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文档简介

酶联免疫吸附测定（ELRSA）

定义

酶免疫技术是以酶标记抗原或酶标记抗体为主要试剂，通过复合物中的酶催化底物呈色而对被测物进行定性或定量的标记免疫技术。基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）

酶结合物是酶与抗体或抗原联结的产物。具有酶促反应，显示出生物放大作用。在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)和碱性磷酸酶(alkalinephosohatase,AP)。酶的底物1、HRP催化过氧化物的氧化反应。供氢体：邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB)OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，最适吸收波长为492nmTMB经HRP作用后共产物显蓝色，用HCL或H2SO4终止后，由蓝色呈黄色，最适吸收波长为405nm2、AP为磷酸酯酶一般采用对硝基苯磷酸酯(p-NPP)作为底物。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应根据检测目的和操作步骤不同，有以下三种类型的常用方法：1.间接法

此法是测定抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体。加入待检标本(含相应抗体)与之结合。洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体(酶标抗抗体)和底物进行测定。2.双抗体夹心法

此法常用于测定抗原。将已知抗体吸附于固相载体，加入待检标本(含相应抗原)与之结合。温育后洗涤，加入酶标板中。实验方法:

1.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

2.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

3.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

4.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

5.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

显微镜领域里，成图一般用xyz三个轴来标注3D空间。

xy就是和显微镜平台平行的

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