现代生物技术在植物育种上的应用-课件

生物技术在植物育种中的应用生物技术在植物育种中的应用1主要内容生物技术的概念和范围细胞工程与育种基因工程与育种分子标记辅助育种主要内容生物技术的概念和范围2生物技术生物技术也称生物工程，是指以现代生命科学为基础，结合先进的工程手段和其他基础学科的科学原理，按照预先的设计，发行生物体或加工生物原料，为人类生产出所需的产品或达到某种目的的一门新兴、综合性学科。生物技术是在分子生物学和细胞生物学基础上结合现代工程学的方法和原理而发展起来的一门综合性科学技术应用范围广泛：医药卫生、农林牧渔、轻工、食品、化

工和能源等领域。生物技术生物技术也称生物工程，是指以现代生命科学为基础，结合3植物方面：产量、品质、抗病虫、抗逆性等，以细胞工程、基因工程、分子标记辅助育种为核心的生物技术在植物育种中已得到广泛应用。主要涉及：组织与细胞培养、体细胞突变体筛选、原生质体培养与体细胞杂交、单倍体细胞培养、体细胞胚胎发生与生物反应器、基因分离和转移和分子标记辅助选择育种等技术植物方面：产量、品质、抗病虫、抗逆性等，主要涉及：4生物技术应用于育种的必要性1、人类21世纪面临的三大问题

（人口、资源、环境）2、传统育种方法的局限3、生物技术的创造性（1）打破自然生殖隔离，生物可共享一个基因库（2）有目的地进行基因重组，克服不良连锁（3）有效克服环境影响，选择更可靠生物技术应用于育种的必要性1、人类21世纪面临的三大问题5生物技术在植物育种中应用的重要意义生物技术应用于植物育种，可以解决传统育种的一些特殊困难，扩大育种的基因来源，提高鉴定和摆地摊的可靠性，加快育种进程，加速繁殖，提高育种效率等，对于解决人口与食物问题以及生物能源问题，具有十分重要意义。生物技术在植物育种中应用的重要意义生物技术应用于植物6组织与器官培养的类别组织与器官培养的应用第一节细胞工程与育种组织与器官培养的类别第一节细胞工程与育种7第一节细胞工程与育种第一节细胞工程与育种8一、组织与器官培养茎尖和分生组织培养胚培养胚珠和子房培养胚乳培养离体叶的培养一、组织与器官培养茎尖和分生组织培养9相关的专业术语细胞全能性：外植体：愈伤组织胚状体继代培养相关的专业术语细胞全能性：10现代生物技术在植物育种上的应用-课件11组织与器官培养过程可分四个阶段无菌培养物的建立营养繁殖体的增殖生根培养植株移栽各阶段在培养基、生长调节剂的配比和浓度、培养方式和环境上都有不同的要求组织与器官培养过程可分四个阶段无菌培养物的建立营养繁殖体的增12组织和器官培养在育种中的作用加快植物新品种和育种繁殖速度培养无病毒苗木诱发和离体筛选突变体进行种质资源长期保存和远距离运输获得倍性不同的植株克服种子和萌发中的障碍克服远缘杂交困难提供育种中间材料组织和器官培养在育种中的作用加快植物新品种和育种繁殖速度131.加快植物新品种和育种繁殖速度1.加快植物新品种和育种繁殖速度142.培养无病毒苗木2.培养无病毒苗木153.诱发和离体筛选突变体3.诱发和离体筛选突变体164.获得倍性不同的植株二倍体（左）多倍体（右）水稻4.获得倍性不同的植株二倍体（左）多倍体（右）水稻175.克服种子和萌发中的障碍种子萌发全过程5.克服种子和萌发中的障碍种子萌发全过程186.克服远缘杂交困难6.克服远缘杂交困难197.提供育种中间材料7.提供育种中间材料20二、花药和花粉培养花药培养：其外植体为植物雄性器官的一部分，就培养方法和技术来讲于器官培养的范畴花粉培养：将处于一定发育阶段的花粉从花药中分离，再加以离体培养，有时花粉培养也称为小孢子培养，从培养方法和技术方面讲，属于细胞培养的范围二、花药和花粉培养花药培养：其外植体为植物雄性器官的一部分，21花药培养的基本程序花药培养的基本程序22花粉发育时期四分体小孢子单核花粉双核花粉最适期花粉发育时期四分体小孢子单核花粉双核花粉最适期23花粉及小孢子培养1、取材时期的确定花粉及小孢子培养1、取材时期的确定24花药培养与小孢子培养的目的一样，为获得单倍体。单倍体（haploid):指具有配子体染色体数的孢子体（植物个体）花药培养与小孢子培养的目的一样，为获得单倍体。25单倍体在育种中的作用：加倍后可迅速获得纯合型材料，缩短育种年限获得育种中间材料与诱变育种相结合可以提高诱变频率，使育种途径更具有实际应用意义，无籽三倍体的获得作为遗传工程受体更为有效用于基础遗传学研究的各个领域获得超雄植株（YY）可获得异源体附加系，代换系和易位系节省田间试验的土地和劳力克服远缘杂交不育性与分离的困难提高选择的正确性和效率单倍体在育种中的作用：加倍后可迅速获得纯合型材料，缩短育种年26芦笋性染色体（XY）超雄植株：有性染色体的纯合体芦笋性染色体（XY）27三、原生质体培养原生质体培养：protoplastculture体细胞杂交

Somatichybridization原生质体融合

Protoplastfusion三、原生质体培养原生质体培养：protoplastcult28相关概念原生质体：指除去细胞壁的细胞或是一个被质膜所包围的裸露细胞。亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体。可以具有细胞核或没有细胞核核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体，即微小原生技击体胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体相关概念原生质体：指除去细胞壁的细胞或是一个被质膜所包围的裸29原生质体的分离和培养无菌试管苗叶片上胚轴和子叶愈伤组织培养细胞酶解纤维素酶和果胶酶原生质体原生质体培养培养基液体浅层培养固体平板培养固液双层培养琼脂糖珠培养培养方法原生质体的分离和培养无菌试管苗叶片酶解纤维素酶和果胶酶原生质30四、体细胞杂交定义：将两个不同亲本的原生质体，经人工诱导融合并培养成植株的过程，统称为体细胞杂交（A+B）几种不同的表述：体细胞杂交：somatichybridization细胞融合:Cellfusion无性杂交:asexualhybridization原生质体融合：Protoplastfusion超性杂交:Parasexualhybridization超性融合:Parasexualhybridization细胞工程:Cellengineering四、体细胞杂交定义：将两个不同亲本的原生质体，经人工诱导融合311960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功1971年，Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，是第一个植物细胞杂种1974年，Kao将聚已二醇诱导融合法应用于植物细胞融合并取得了相应的融合技术1978年，Melchers获得第一个属间细胞杂交（马铃薯+蕃茄）1981年，Zimmerman发明电融合仪，并首次年出电融合概念1987年，Schweiger建立单对原生质体电融合技术程序1960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得32体细胞和有性杂交的比较比较内容体细胞杂交有性杂交时间无季节限制花期限制，特别是母本的花期亲缘关系一定程度上可以克服有性/嫁接不亲和性受亲和性影响结果细胞核、细胞质均可以重组、倍性增加双受精，一般无细胞质重组，倍性不改变体细胞和有性杂交的比较比较内容体细胞杂交有性杂交时间33现代生物技术在植物育种上的应用-课件34理论上，任何细胞都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源，这对种质资源的开发和利用具有深远意义融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统理论上，任何细胞都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源，这35现代生物技术在植物育种上的应用-课件36原生质体培养和体细胞杂交的应用获得新品种创造新种质转移有利性状和克服远缘杂交的障碍作为基因工程的良好受体及进行突变体筛选的优良原始材料原生质体培养和体细胞杂交的应用获得新品种37五、植物细胞突变体的离休筛选基因组突变：染色体数目的改变或细胞质基因组的增减染色体突变：染色体较大范围的结构变化，涉及多个基因基因突变：指范围在一个基因以内的分子结构的改变，按DNA改变方式有碱基置换、称雄突变、缺失突变和插入突变（一）突变体的产生在离体培养条件下，诱发突变的突变型和自发突变没有本质上的差别，一般有三个水平的突变：五、植物细胞突变体的离休筛选基因组突变：染色体数目的改变或细38（二）突变细胞的筛选方法直接选择法正选择/负选择间接选择法（二）突变细胞的筛选方法直接选择法正选择/负选择间接选择法39正选择用一种含有特定物质的选择培养基，在此培养基上只有突变细胞能够生长，非突变细胞不能生长，从而直接筛选出突变体。如除草剂、抗盐碱突变体的筛选，均可直接在培养基中加入一定浓度的除草剂或增加渗透压的物质。目前采用这一途径已从多种植物中筛选出可利用的体细胞变异体。正选择用一种含有特定物质的选择培养基，在此培养基上只有突变细40负选择一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法Dorffling等以Pro类似物羟脯氨酸（HYP)为选择剂，获得了耐HYP的体细胞变异系，其抗寒性比供体亲本增强，且能稳定遗传林定波等将锦橙株心细胞愈伤组织的悬浮细胞经γ射线照射，然后在高浓度散打脯氨酸培养基中培养筛选，获得了抗寒体细胞变异愈伤组织，并再生植株。鉴定显示，抗寒愈伤组织及其再生植株的抗寒性分别比供体提高1.4度和2.4度，突变系体内的Pro含量比供体增加了一倍负选择一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法41（三）突变性状遗传基础及其稳定性鉴定遗传基础稳定性（三）突变性状遗传基础及其稳定性鉴定遗传基础稳定性42突变性状的遗传学基础体细胞变异，除发生在染色体水平外，更多的是基因水平上的变异从利用体细胞变异的角度，染色体变异大多是一些畸型变异，真正可利用的染色体变异十分有限基因水平上的变异大多只是个别性状的改变，不会影响再生植株的正常生长发育。因此，从再生植株的这些变异中有可能筛选有益的变异。基因水平的变异从根本上讲是DNA大项突变或修饰状态的改变突变性状的遗传学基础体细胞变异，除发生在染色体水平外，更多的43突变性状的稳定性对于单基因控制的遗传性状，大多数碱基突变可以稳定遗传而且符合孟德尔遗传分离规律，这一点已在水稻、烟草和玉米的体细胞变异中得以证实。植物的许多性状特别是经济性状均由多基因控制，对于多基因控制性状的碱基突变可能由于技术上的复杂性，目前还没有关于多基因控制性状的碱基突变报道。突变性状的稳定性对于单基因控制的遗传性状，大多数碱基突变可以44第二节基因工程与育种GeneticEngineeringandBreeding第二节基因工程与育种GeneticEngineerin45植物基因工程：指以类似工程设计的方法，按照人们的意志，通过一定的程序，将具有遗传信息的DNA片段，在离休条件下，用工具酶加以剪切、组合和拼接，再将人工重组的基因引物适当的植物受体中进行复制和表达的技术。转基因植物（transgenicplants)转基因技术(transgenictechnique)植物基因工程：指以类似工程设计的方法，按照人们的意志，通过一46基因工程基因枪和农杆菌介导基因转化示意图基因工程基因枪和农杆菌介导基因转化示意图47基因工程基本操作步骤目的基因的分离与鉴定植物表达载体的构建植物的遗传转化转化植物细胞的筛选及转基因植物的鉴定基因工程基本操作步骤目的基因的分离与鉴定48植物基因转移的过程植物基因转移的过程49基因工程在植物育种中的应用改良品质提高抗病虫能力改良抗逆性提高光合作用和固氮效率创建雄性不育材料延迟成熟与保鲜选育抗除草剂品种基因工程在植物育种中的应用改良品质501.提高抗病能力抗真菌基因工程途径抗细菌基因工程途径克隆并导入几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因克隆并导入抗毒素过量表达法克隆转化溶菌酶基因或杀菌肽基因1.提高抗病能力抗真菌基因工程途径抗细菌基因工程途径克隆51过量表达来自番茄PR蛋白的甜橙抗脚腐病过量表达来自番茄PR蛋白的甜橙抗脚腐病52马铃薯抗菌肽基因工程马铃薯抗菌肽基因工程532.抗病毒基因工程向植物中导入病毒外壳蛋白（CP)转移病毒的反义RNA，卫星RNA，病毒复制酶基因和核酶基因等抗病毒番木瓜2.抗病毒基因工程向植物中导入病毒外壳蛋白（CP)抗病毒番木543.提高抗虫能力导入Bt毒蛋白基因导入蛋白酶抑制基因利用一些昆虫毒素基因（如蜘蛛杀虫肽基因，和蝎毒素基因等）3.提高抗虫能力导入Bt毒蛋白基因554.改善抗逆性向植物中导入热休克基因，可提高其扩，抗热性将深海鱼美洲拟鲽的抗冻基因通过柱头导入番茄，获得可耐受-4℃—-5℃的转基因番茄导入脯氨酸或甜菜碱合成有关的酶的基因如甜菜碱醛脱氢酶（BADH)基因导入烟草，草莓和水稻后，转基因植物的耐盐性明显提高4.改善抗逆性向植物中导入热休克基因，可提高其扩，抗热性56深海鱼美洲拟鲽转深海鱼美洲拟鲽的抗冻基因草莓深海鱼美洲拟鲽转深海鱼美洲拟鲽的抗冻基因草莓575.选育抗除草剂品种把除草剂作用的靶酶或靶蛋白质的基因导入植物现已在矮牵牛、烟草、番茄、马铃薯、大豆、油菜、杨树等植物上获得抗除草剂的转基因植株。转移一种能以除草剂为底物的酶的基因如bar基因编码PPT乙酰转移酶，导入烟草，番茄和马铃薯等植物后，使作物获得抗除草剂PPT的能力5.选育抗除草剂品种把除草剂作用的靶酶或靶蛋白质的基因导586.延迟成熟与保鲜改变果实细胞壁降解酶活性抑制成熟激素乙烯的生成乙烯生成减少70%需更长时间软化硬度：高于CK比CK耐贮藏转基因苹果6.延迟成熟与保鲜改变果实细胞壁降解酶活性乙烯生成减少7059转基因耐贮藏番茄转基因耐贮藏番茄607.提高产量目前已克降出许多种参与光合作用的基因和导致植物雄性不育的基因Worral等报道用编码β-1，3-葡聚糖水解酶基因转化烟草，矮牵牛获得雄性不育植株提高光合作用效率和固氮效率克隆与杂种优势相关的植物雄性不育有关的基因7.提高产量目前已克降出许多种参与光合作用的基因和导致植物618.改良品质将人工合成的富含必须氨基酸的DNA片段导入马铃薯，能有效地改善马铃薯贮藏蛋白的氨基酸成分通过导入淀粉粒结合的淀粉合成酶的反义RNA基因，可改变马铃薯支链淀粉和直链淀粉的比例8.改良品质将人工合成的富含必须氨基酸的DNA片段导入马铃629.提早开花结实9.提早开花结实63转基因植株的筛选形态学鉴定直接选择法间接选择法同工酶测定分子标记方法：转基因植株的筛选形态学鉴定方法：64第三节分子标记辅助育种分子标记遗传标记第三节分子标记辅助育种分子标记遗传标记65分子标记在育种中的应用构建遗传图谱分析亲缘关系和植物的起源演化问题农艺性状基因的定位分子标记辅助选择种质资源及品种鉴定分子标记在育种中的应用构建遗传图谱66遗传图谱和物理图谱玉米的连锁遗传图遗传图谱和物理图谱玉米的连锁遗传图67生物技术在植物育种中的应用生物技术在植物育种中的应用68主要内容生物技术的概念和范围细胞工程与育种基因工程与育种分子标记辅助育种主要内容生物技术的概念和范围69生物技术生物技术也称生物工程，是指以现代生命科学为基础，结合先进的工程手段和其他基础学科的科学原理，按照预先的设计，发行生物体或加工生物原料，为人类生产出所需的产品或达到某种目的的一门新兴、综合性学科。生物技术是在分子生物学和细胞生物学基础上结合现代工程学的方法和原理而发展起来的一门综合性科学技术应用范围广泛：医药卫生、农林牧渔、轻工、食品、化

工和能源等领域。生物技术生物技术也称生物工程，是指以现代生命科学为基础，结合70植物方面：产量、品质、抗病虫、抗逆性等，以细胞工程、基因工程、分子标记辅助育种为核心的生物技术在植物育种中已得到广泛应用。主要涉及：组织与细胞培养、体细胞突变体筛选、原生质体培养与体细胞杂交、单倍体细胞培养、体细胞胚胎发生与生物反应器、基因分离和转移和分子标记辅助选择育种等技术植物方面：产量、品质、抗病虫、抗逆性等，主要涉及：71生物技术应用于育种的必要性1、人类21世纪面临的三大问题

（人口、资源、环境）2、传统育种方法的局限3、生物技术的创造性（1）打破自然生殖隔离，生物可共享一个基因库（2）有目的地进行基因重组，克服不良连锁（3）有效克服环境影响，选择更可靠生物技术应用于育种的必要性1、人类21世纪面临的三大问题72生物技术在植物育种中应用的重要意义生物技术应用于植物育种，可以解决传统育种的一些特殊困难，扩大育种的基因来源，提高鉴定和摆地摊的可靠性，加快育种进程，加速繁殖，提高育种效率等，对于解决人口与食物问题以及生物能源问题，具有十分重要意义。生物技术在植物育种中应用的重要意义生物技术应用于植物73组织与器官培养的类别组织与器官培养的应用第一节细胞工程与育种组织与器官培养的类别第一节细胞工程与育种74第一节细胞工程与育种第一节细胞工程与育种75一、组织与器官培养茎尖和分生组织培养胚培养胚珠和子房培养胚乳培养离体叶的培养一、组织与器官培养茎尖和分生组织培养76相关的专业术语细胞全能性：外植体：愈伤组织胚状体继代培养相关的专业术语细胞全能性：77现代生物技术在植物育种上的应用-课件78组织与器官培养过程可分四个阶段无菌培养物的建立营养繁殖体的增殖生根培养植株移栽各阶段在培养基、生长调节剂的配比和浓度、培养方式和环境上都有不同的要求组织与器官培养过程可分四个阶段无菌培养物的建立营养繁殖体的增79组织和器官培养在育种中的作用加快植物新品种和育种繁殖速度培养无病毒苗木诱发和离体筛选突变体进行种质资源长期保存和远距离运输获得倍性不同的植株克服种子和萌发中的障碍克服远缘杂交困难提供育种中间材料组织和器官培养在育种中的作用加快植物新品种和育种繁殖速度801.加快植物新品种和育种繁殖速度1.加快植物新品种和育种繁殖速度812.培养无病毒苗木2.培养无病毒苗木823.诱发和离体筛选突变体3.诱发和离体筛选突变体834.获得倍性不同的植株二倍体（左）多倍体（右）水稻4.获得倍性不同的植株二倍体（左）多倍体（右）水稻845.克服种子和萌发中的障碍种子萌发全过程5.克服种子和萌发中的障碍种子萌发全过程856.克服远缘杂交困难6.克服远缘杂交困难867.提供育种中间材料7.提供育种中间材料87二、花药和花粉培养花药培养：其外植体为植物雄性器官的一部分，就培养方法和技术来讲于器官培养的范畴花粉培养：将处于一定发育阶段的花粉从花药中分离，再加以离体培养，有时花粉培养也称为小孢子培养，从培养方法和技术方面讲，属于细胞培养的范围二、花药和花粉培养花药培养：其外植体为植物雄性器官的一部分，88花药培养的基本程序花药培养的基本程序89花粉发育时期四分体小孢子单核花粉双核花粉最适期花粉发育时期四分体小孢子单核花粉双核花粉最适期90花粉及小孢子培养1、取材时期的确定花粉及小孢子培养1、取材时期的确定91花药培养与小孢子培养的目的一样，为获得单倍体。单倍体（haploid):指具有配子体染色体数的孢子体（植物个体）花药培养与小孢子培养的目的一样，为获得单倍体。92单倍体在育种中的作用：加倍后可迅速获得纯合型材料，缩短育种年限获得育种中间材料与诱变育种相结合可以提高诱变频率，使育种途径更具有实际应用意义，无籽三倍体的获得作为遗传工程受体更为有效用于基础遗传学研究的各个领域获得超雄植株（YY）可获得异源体附加系，代换系和易位系节省田间试验的土地和劳力克服远缘杂交不育性与分离的困难提高选择的正确性和效率单倍体在育种中的作用：加倍后可迅速获得纯合型材料，缩短育种年93芦笋性染色体（XY）超雄植株：有性染色体的纯合体芦笋性染色体（XY）94三、原生质体培养原生质体培养：protoplastculture体细胞杂交

Somatichybridization原生质体融合

Protoplastfusion三、原生质体培养原生质体培养：protoplastcult95相关概念原生质体：指除去细胞壁的细胞或是一个被质膜所包围的裸露细胞。亚原生质体：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体。可以具有细胞核或没有细胞核核质体：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体，即微小原生技击体胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体相关概念原生质体：指除去细胞壁的细胞或是一个被质膜所包围的裸96原生质体的分离和培养无菌试管苗叶片上胚轴和子叶愈伤组织培养细胞酶解纤维素酶和果胶酶原生质体原生质体培养培养基液体浅层培养固体平板培养固液双层培养琼脂糖珠培养培养方法原生质体的分离和培养无菌试管苗叶片酶解纤维素酶和果胶酶原生质97四、体细胞杂交定义：将两个不同亲本的原生质体，经人工诱导融合并培养成植株的过程，统称为体细胞杂交（A+B）几种不同的表述：体细胞杂交：somatichybridization细胞融合:Cellfusion无性杂交:asexualhybridization原生质体融合：Protoplastfusion超性杂交:Parasexualhybridization超性融合:Parasexualhybridization细胞工程:Cellengineering四、体细胞杂交定义：将两个不同亲本的原生质体，经人工诱导融合981960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得成功1971年，Takebe首次从离体烟草原生质体培养中获得再生完整植株1972年，Carlson首次获得粉蓝烟草和郎氏烟草的细胞杂种，是第一个植物细胞杂种1974年，Kao将聚已二醇诱导融合法应用于植物细胞融合并取得了相应的融合技术1978年，Melchers获得第一个属间细胞杂交（马铃薯+蕃茄）1981年，Zimmerman发明电融合仪，并首次年出电融合概念1987年，Schweiger建立单对原生质体电融合技术程序1960年，Kocking用酶法制备高等植物原生质体首次获得99体细胞和有性杂交的比较比较内容体细胞杂交有性杂交时间无季节限制花期限制，特别是母本的花期亲缘关系一定程度上可以克服有性/嫁接不亲和性受亲和性影响结果细胞核、细胞质均可以重组、倍性增加双受精，一般无细胞质重组，倍性不改变体细胞和有性杂交的比较比较内容体细胞杂交有性杂交时间100现代生物技术在植物育种上的应用-课件101理论上，任何细胞都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源，这对种质资源的开发和利用具有深远意义融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制，为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统理论上，任何细胞都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源，这102现代生物技术在植物育种上的应用-课件103原生质体培养和体细胞杂交的应用获得新品种创造新种质转移有利性状和克服远缘杂交的障碍作为基因工程的良好受体及进行突变体筛选的优良原始材料原生质体培养和体细胞杂交的应用获得新品种104五、植物细胞突变体的离休筛选基因组突变：染色体数目的改变或细胞质基因组的增减染色体突变：染色体较大范围的结构变化，涉及多个基因基因突变：指范围在一个基因以内的分子结构的改变，按DNA改变方式有碱基置换、称雄突变、缺失突变和插入突变（一）突变体的产生在离体培养条件下，诱发突变的突变型和自发突变没有本质上的差别，一般有三个水平的突变：五、植物细胞突变体的离休筛选基因组突变：染色体数目的改变或细105（二）突变细胞的筛选方法直接选择法正选择/负选择间接选择法（二）突变细胞的筛选方法直接选择法正选择/负选择间接选择法106正选择用一种含有特定物质的选择培养基，在此培养基上只有突变细胞能够生长，非突变细胞不能生长，从而直接筛选出突变体。如除草剂、抗盐碱突变体的筛选，均可直接在培养基中加入一定浓度的除草剂或增加渗透压的物质。目前采用这一途径已从多种植物中筛选出可利用的体细胞变异体。正选择用一种含有特定物质的选择培养基，在此培养基上只有突变细107负选择一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法Dorffling等以Pro类似物羟脯氨酸（HYP)为选择剂，获得了耐HYP的体细胞变异系，其抗寒性比供体亲本增强，且能稳定遗传林定波等将锦橙株心细胞愈伤组织的悬浮细胞经γ射线照射，然后在高浓度散打脯氨酸培养基中培养筛选，获得了抗寒体细胞变异愈伤组织，并再生植株。鉴定显示，抗寒愈伤组织及其再生植株的抗寒性分别比供体提高1.4度和2.4度，突变系体内的Pro含量比供体增加了一倍负选择一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法108（三）突变性状遗传基础及其稳定性鉴定遗传基础稳定性（三）突变性状遗传基础及其稳定性鉴定遗传基础稳定性109突变性状的遗传学基础体细胞变异，除发生在染色体水平外，更多的是基因水平上的变异从利用体细胞变异的角度，染色体变异大多是一些畸型变异，真正可利用的染色体变异十分有限基因水平上的变异大多只是个别性状的改变，不会影响再生植株的正常生长发育。因此，从再生植株的这些变异中有可能筛选有益的变异。基因水平的变异从根本上讲是DNA大项突变或修饰状态的改变突变性状的遗传学基础体细胞变异，除发生在染色体水平外，更多的110突变性状的稳定性对于单基因控制的遗传性状，大多数碱基突变可以稳定遗传而且符合孟德尔遗传分离规律，这一点已在水稻、烟草和玉米的体细胞变异中得以证实。植物的许多性状特别是经济性状均由多基因控制，对于多基因控制性状的碱基突变可能由于技术上的复杂性，目前还没有关于多基因控制性状的碱基突变报道。突变性状的稳定性对于单基因控制的遗传性状，大多数碱基突变可以111第二节基因工程与育种GeneticEngineeringandBreeding第二节基因工程与育种GeneticEngineerin112植物基因工程：指以类似工程设计的方法，按照人们的意志，通过一定的程序，将具有遗传信息的DNA片段，在离休条件下，用工具酶加以剪切、组合和拼接，再将人工重组的基因引物适当的植物受体中进行复制和表达的技术。转基因植物（transgenicplants)转基因技术(transgenictechnique)植物基因工程：指以类似工程设计的方法，按照人们的意志，通过一113基因工程基因枪和农杆菌介导基因转化示意图基因工程基因枪和农杆菌介导基因转化示意图114基因工程基本操作步骤目的基因的分离与鉴定植物表达载体的构建植物的遗传转化转化植物细胞的筛选及转基因植物的鉴定基因工程基本操作步骤目的基因的分离与鉴定115植物基因转移的过程植物基因转移的过程116基因工程在植物育种中的应用改良品质提高抗病虫能力改良抗逆性提高光合作用和固氮效率创建雄性不育材料延迟成熟与保鲜选育抗除草剂品种基因工程在植物育种中的应用改良品质1171.提高抗病能力抗真菌基因工程途径抗细菌基因工程途径克隆并导入几丁质酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因克隆并导入抗毒素过量表达法克隆转化溶菌酶基因或杀菌肽基因