土壤酶活性测定方法

(完整)土壤酶活性测定方法(完整)土壤酶活性测定方法66土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法(苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水氮素状况。土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量,也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。二、试剂1）甲苯2)10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。3（PH6.:184g柠檬酸和147.5g（KOPH6。7，1000ml。4)苯酚钠溶液(。35mol/：62。5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A100mlBAB20ml100ml。0。9％，溶液稳定。0.4717g1000ml，得到1ml0.1mg10（10ml100ml)制成氮的工作液（0.01mg/ml）.三、操作步骤5g50ml1ml15min10ml1020mlPH37℃241ml50ml4ml3ml20min1h578nm（1h。0135791113ml50ml20ml4ml3ml20min定容。1h578nm注意事项：1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质,其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯度和基质自身分解。3、如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样四、结果计算：以24小时后1g土壤中NHN的毫克数表示土壤脲酶活性Ure。3Ure=（a－a）×V×n／m式中：aNH－N3aNH－N3aNH－N3V为显色液体积;n为分取倍数，浸出液体积／吸取滤液体积；m表示烘干土重土壤磷酸酶活性测定(磷酸苯二钠比色法）一、原理测定磷酸酶主要根据酶促生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。前一种通常称为有有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法，后一种称为无机磷含量法。研究证明:磷酸酶有三种最适PH值：4～56~78～10PHPH(PH5.0~4（PH70)三羟甲基氨基甲烷缓冲液（PH7.0~8.5)、和硼酸缓冲液（PH9~10。磷酸酶测定时常用基质有磷酸苯二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、β-萘酚磷酸钠等。现介绍磷酸苯二钠比色法。二、试剂缓冲液：醋酸盐缓冲液（PH。0）0.2mol/L醋酸溶液11.55ml95%冰醋酸溶至1L.0.2mol/L醋酸钠溶液16。4gCHONa27gCHONa.3HO1L.232 232 2取14。8ml0。2mol/L醋酸溶液和35。2ml0。2mol/L醋酸钠溶液稀释至1L。柠檬酸盐缓冲液7。0）mol/L柠檬酸溶液19.2gCHO1L。678mol/L磷酸氢二钠溶液53.63g

HPO2

。7H4

O71。7g2

HPO2

.12H4

O溶至1L。2取6。4ml0.1mol/L柠檬酸溶液加43。6ml0。2mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至100ml。硼酸盐缓冲液（PH。6）0.05mol/L硼砂溶液19。05g硼砂溶至1L.0。2mol/LNaOH溶液8gNaOH溶至1L.取50ml0。05mol/L硼砂溶液加23ml0。2mol/LNaOH溶液稀释至200ml.2）0.5％磷酸苯二钠（用缓冲液配制）0125g10ml96放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。甲苯5）0.3%硫酸铝溶液6）酚标准溶液1g1L，酚工作液（0。01mg/ml）:10ml1L。三、操作步骤5g200ml2.5ml15min20ml0。5%磷酸苯二钠（酸酶用乙酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液24h.100ml0.33ml50ml660nm035791113ml50ml5ml4,30min660nm注意事项：1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品实验相同,以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。2、整个实验设置一个无土对照，不加土样,其他操作与样品实验相同,以检验试剂纯度和基质自身分解。3、如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样四、结果计算24h1g磷酸酶活性=（aa－a）×V×n／m式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数;a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数;V为显色液体积；n为分取倍数，浸出液体积／吸取滤液体积；m表示烘干土重土壤蔗糖酶活性测定（3，5-二硝基水杨酸比色法）一、原理蔗糖酶与土壤许多因子有相关性,如与土壤有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度有关，一般情况下,土壤肥力越高，蔗糖酶活性越高.蔗糖酶酶解所生成的还原糖与3，5—二硝基水杨酸反应而生成橙色的3—氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关,因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。二、试剂8％蔗糖，pH5。51/15M（11.876gNaHPO·2HO2 4 21L）0.5ml1/15M（9.078gKHPO1L）9.5ml2 4葡萄糖标准液（1mg/mL)80℃烘箱内约1250mg50mL4℃保存期约一星期3，5—(DNS）05g20ml2mol/LNaOH50ml30g100ml（保存期不过7天).三、操作步骤（1）标准曲线绘制1mg/mL的标准葡糖糖溶液05mL3mL540nmOD（2)土壤蔗糖酶测定5g50mL15ml，5mlpH5.5537℃24h50ml3mlDNS5min3min3—氨基—5-50ml,508nm四、结果计算：24h，1g蔗糖酶活性=（a－a）×n／ma样品、a无土、a无机质分别表示其由标准曲线求的葡萄糖毫克数；n为分取倍数；m表示烘干土重土壤纤维素酶活性测定（3，5-二硝基水杨酸比色法)(完整)土壤酶活性测定方法一、原理(完整)土壤酶活性测定方法一、原理66纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在纤维素酶作用下,它的最初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖.所以，纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。纤维素酶解所生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应而生成橙色的3—氨基—5—硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关,因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。二、试剂1）甲苯2）1%羧甲基纤维素溶液：1g羧甲基纤维素钠,用50％的乙醇溶至100ml.3）pH5.5醋酸盐缓冲液：0.2mol/L醋酸溶液11.55ml95％冰醋酸溶至1L。0。2mol/L醋酸钠溶液16.4gCHONa2722gCHONa。3HO1L。232 232 2取11ml0。2mol/L醋酸溶液和88ml0。2mol/L醋酸钠溶液混匀即成PH5.5醋酸盐缓冲液.3，5—1。25g50ml2mol/LNaOH125ml75g250ml（7）,葡萄糖标准液(1mg/mL）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。准确称取50mg葡萄糖于烧杯中,用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容,摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期)。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。三、操作步骤1mg/mL00.10.20.4060.8mL1mL，加DNS3ml5min，540nmOD10g50ml。5ml15min5ml1％羧甲基纤维素溶5mlpH5.53772h1ml）四、结果计算72h,1g－aa样品、a无土、a无机质分别表示其由标准曲线求的葡萄糖毫克数；n为分取倍数；m表示烘干土重过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾滴定法）过氧化氢对生物和土壤具有毒害作用。与此同时，在生物体和土壤中存有过氧化氢酶,能促进过氧化氢分解（HOHO+O（含22 2 2有过氧化氢酶)和过氧化氢作用析出的氧气体积或过氧化氢的消耗量,测定过氧化氢的分解速度，以此代表过氧化氢酶的活性。测定过氧化氢酶的具体方法比较多,如气量法：根据析出的氧气体积来计算过氧化氢酶的活性；比色法：根据过氧化氢与硫酸铜产生黄色或橙黄色络合物的量来表征过氧化氢酶的活性；滴定法:用钾滴定法。二、试剂2mol/LHSO5。43ml500ml,置于冰箱贮存；2 4002mol/L17g400mL500mL，避光保存,用时用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1mol/L草酸溶液：称取优级纯HCO 2HO。334g,用蒸馏水溶解后，定容至250ml；224 23%HO30%HO25ml250ml0.1mol/L

溶液标定。22 22 4三、操作步骤5g5mL4℃冰箱中30min25mL3％HO22

水溶液，充分混匀后,再置于冰箱中放置1h.取出,迅2mol/LHSO1mL5mL5mL2mol/L2 4HSO溶液，用0.02mol/LH

的量所消2 4 22耗的KmnO.过氧化氢酶活性以每g干土1h内消耗的0.1mol/LKmnO体积数表示(以mL计）表示.4 4四、结果计算（如下面处理)：KMnO10mL0.1mol/LHC

用KMnO滴定，所消耗KMnO体积数为19.49mL，由此计算出KMnO标4准溶液浓度为0.0205mol/L。

224 4 4 4HO标定：1ml3%HO用KMnO滴定,所消耗KMnO体积数为16。51ml,由此计算出HO22 22 4 4 2

浓度为0.846