EBV抗体酶联免疫诊断试剂

EB病毒IgA抗体酶联免疫

吸附法诊断试剂盒

（受理号：X0407269）中山大学中山医学院朱振宇教授、医学博士、博士生导师中山大学达安基因股份首席科学家一、鼻咽癌与EB病毒感染的关系

◆鼻咽癌（NPC）是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的低分化或未分化癌。本病可见于世界各地，但NPC有明显的种族倾向，大部分患者是中国人及其后裔，在爱斯基摩人、北非洲人和马来人中也较常见。

◆病人的肿瘤细胞中有规律地隐匿着潜伏状态的EB病毒（Epstein-BarrVirus，EBV）。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒◆发现

EB病毒是1964年Epstein与Barr在非洲儿童恶性淋巴瘤的瘤细胞中观察到的一种疱疹病毒。

1966年Old等采用免疫扩散法发现鼻咽癌病人的血清能与非洲儿童淋巴细胞的抽提液起反应。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒◆证据（1）：1969年de-the从鼻咽癌活检培养的类淋巴细胞中分离出EB病毒。国内也已经从鼻咽癌组织培养所建立的类淋巴母细胞株中证明带有EB病毒壳抗原（VCA）和早期抗原（EA），并在电镜下找到了典型的疱疹病毒颗粒，其形态与EB病毒相同。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒◆证据（2）：KottaridisSD等（1996年）认为鼻咽癌患者血清中抗EBNA的水平反映肿瘤的大小。[AnticancerRes,1996,16(2):785-789]Vera-SempereFJ等（1996年）采用巢式PCR和免疫组化分析说明了不论组织学类型，鼻咽癌中均有EB病毒感染。[EurJCancerBOralOncol,1996,32B(3):163-168]2、几乎100%鼻咽非角化性癌均有EBV感染。在我国，几乎所有四岁以上的人群均已感染过EBV，80%以上的健康成人是EBV携带者。特别在珠江三角洲及香港地区，是世界上NPC的高发区。根据中山市的肿瘤统计资料（流行病学），NPC的年龄和性别的校正发病率为18.12/10万(男：25.60/10万；女：11.05/10万)。97%的NPC为非角化性癌。经EBER1原位杂交（所谓“金标准”）证实癌细胞中有EBV感染。EBERs原位杂交3、NPC病人血清中的EBV抗体水平普遍升高

◆

NPC的显著特征是病人血清中对EB病毒各种抗原的抗体（尤其是IgA亚型）水平普遍升高，借此可区分NPC与健康携带者。（WernerHenleetal.,1976.）

◆中国医学科学院等单位采用间接免疫荧光法，发现鼻咽癌患者血清中IgA/VCA的阳性率为90.14％，几何平均滴度为1:15.3,而其它癌瘤和健康携带者血清中IgA/VCA的阳性率为2.61%-3.30%，几何平均滴度为1:1.3。同时还发现鼻咽癌病人放疗后，其IgA抗体水平随存活时间的延长而逐渐下降，在放疗后4～22年者仅39.29％为阳性；但当病者出现肿瘤复发或转移时，阳性率又再次升至85.75％。一、鼻咽癌与EB病毒感染的关系

小结：流行病学、血清学和分子生物学的资料证实,EBV感染与NPC有密切关系。◆鼻咽癌患者癌细胞中证实有EB病毒的DNA，经原位杂交，多数癌细胞呈EBERs阳性、核抗原（EBNA-1）阳性。◆鼻咽癌患者肿瘤细胞中有EB病毒，血清有一套抗EB病毒的抗体，血清中的EBV抗体水平普遍升高。◆1997年世界卫生组织在国际抗癌联盟年会上把EBV归类为第一类致癌物（特别是鼻咽癌）。二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同◆EBV血清学诊断利用NPC的一个特征，即患者多种EBV抗体的水平较非患者高（WernerHenleetal.,1976.）。◆EBV血清学诊断已用于NPC高危人群的筛查和对NPC可疑病例的诊断。根据从70年代后期以来的研究结果，VCA-IgA检测通常被用于筛查以排除NPC的诊断；EA-IgA检测目前被用于NPC的确定性检测。二、EB病毒携携带者与与鼻咽癌癌病人血血清中EBV抗抗体的不不同检测哪种种抗体？？检测抗体体哪种类类型？因为鼻咽咽癌（NPC））是来源源于鼻咽咽粘膜上上皮细胞胞的低分分化或未未分化癌癌。所所以我们们可以先先了解EB病毒毒在上皮细细胞中的的潜伏感感染以及两种形式式的EB病毒感感染所表达的的各种抗抗原。各种抗原相相应产生不不同的特异异性抗体中中哪种有代代表性？1、EB病毒的潜潜伏感染上皮细胞中中病毒复制制→循环中中的B淋巴巴细胞池→→长期潜潜伏感染↑↑↑如果感染了了无复制缺缺陷突变的的病毒↑EB病毒→→感染口咽咽上皮细胞胞↑↑如果感染了了复制缺陷陷突变的病病毒↑↓↑↑待上皮细胞胞增生后→→个别细胞胞死亡→EB病毒引自:JImmmunol.2005;17498:4972-82、两种形形式的EB病毒感染染◆潜伏性感感染(latentinfection)I型潜伏性性感染:表表达EBNA1，病征为Burkitt淋巴瘤瘤II型潜伏伏性感染:表达EBNA1和LMP1、LMP2A、LMP2B，病征为为Hodgkin淋巴瘤、鼻咽癌、鼻型NK/T-细胞淋巴巴瘤、T-细胞淋淋巴瘤III型潜潜伏性感染染:表达EBNA1、EBNA2、EBNA3、、EBNA4、EBNA5、、EBNA6，病征为为传染性单单核细胞增增多症、移移植后淋巴巴组织增生性性疾病◆溶解性感感染(lyticinfection)在EBV潜潜伏感染的的淋巴细胞胞中有小部部分（约15%～20%）出出现溶解性性感染，溶溶解性感染染出现三个个时相（phase）。立即早期:表达达Zta(ZEBRA)、EBNA1等早期:表表达EA(D)、EA(R)、EBNA1等晚期:表表达VCA、EBNA1等◆EBNA-1是在所有不不同EBV感染细胞胞中都出现现的唯一抗抗原。3、检测抗抗体哪种类类型？遵循免疫学学抗体产生生的基本原原则◆IgG◆IgM◆IgA是上上皮细胞的的分泌型抗抗体◆IgD◆IgE二、EB病病毒携带者者与鼻咽癌癌病人血清清中EBV抗体的不不同检测对象例数EBNA1/IgA（rOD）中位数范围鼻咽癌1212.60.4~7.5患者健康3320.50.2~3.9携带者NPC病人人血清中的的EBNA1/IgA抗体平平均水平是是健康携带带者的4倍倍以上。EBNA1IgA的抗抗体水平在在NPC患者中高高于正常的的EBV携携带者CutoffOD?小结◆NPC主要要表现是EBV潜伏伏感染伴少少量溶解性性感染。EBNA-1是是在所有不不同EBV感染细胞胞中都出现现的唯一抗抗原。◆NPC是来来源于鼻咽咽粘膜上皮皮细胞，检检测上皮细细胞的分泌泌型IgA抗体水平平对NPC较有诊断断意义。◆NPC的显显著特征是是病人血清清中的EBV抗体（（尤其是IgA亚型型）水平普普遍升高，，这种变化化在NPC发病前期期将先于症症状出现，，借此可区区分NPC与其它EB病毒感感染相关疾疾病或健康康携带者。。◆我们认为EBNA1/IgA抗体水平平的检测对对NPC高高危人群的的筛查可作作为早期发发现鼻咽癌癌的有效手手段之一。。三本品是是用于NPC辅助诊断的的有效手段段◆NPC是来来源于鼻咽咽粘膜上皮皮细胞的一一种恶性肿肿瘤，组织织病理学检检查是确诊诊NPC的的唯一方法法。◆NPC的早早期症状是是非特异的的，EBV血清学体体外诊断最最常用于诊诊断程序的的初期及NPC高危危人群的筛筛查。◆NPC的显显著特征是是病人血清清中的EBV多种抗抗体水平普普遍升高，，因此一种种抗体的检检测有一定定的局限性性。◆本品的设计计应用ELISA技技术，采采用了高度度纯化的EBNA1的抗原原，它的的抗体水平平在鼻咽癌癌和非鼻咽咽癌患者之之间的差异异，大于那那些不是由由肿瘤细胞胞所表达的的抗原的特特异性抗体体。同时每每个试剂盒盒中加入了了一份定值值参考对照照，在每次次的检测中中与测试样样品同时进进行检测，，使抗体的的水平以标标准的rOD单位来来表示，，这样可以以减少实验验之间和实实验室之间间的误差，，从而可以以直接地比比较不同的的实验室在在不同的时时间所独立立得出的检检测结果。。1、本品的的用途和局局限性◆用途本品适用于于疑似鼻咽咽癌病人的的血清学检检测，检测测结果有助助于临床医医生作出排排除或进一一步确认NPC的的诊断。。主要可用于于高危人群群的筛查。。◆局限性本品并非NPC诊断断的确诊试试剂，只有组织病病理学检查查能确诊NPC。检测结果只只提供了额额外的信息息，以指导导对疑似NPC病例例的诊断。。同时对健健康人群来来说，检测测结果可能反映NPC的风险程度度。2、本品的的使用特点点推荐使用的的诊断参数数及其临床床意义：◆当疑似鼻咽咽癌症状的的病人首次次到专科门门诊就诊时时，血清学学诊断可作作初步筛选选，此时敏感性性为主要的的诊断参数数。其目的是是评估病人人被诊断为为鼻咽癌的的可能性大大小。推荐使用当当rOD值低于0.700时，可判判定为阴性性（此时敏敏感性大于于94.1%），支支持排除NPC，但但应建议病病人定期复复查；◆当普查时，，绝大部分分人均非鼻鼻咽癌患者者，因此特特异性为主主要的诊断断参数。推推荐使用当当rOD值高于1.500时，可判判定为阳性性（此时特特异性大于于94.4%），即即高度怀疑疑病人患有有NPC，，应继续进进行组织学学检查以确确诊。◆当rOD值在0.700至1.500之间时，判判定为可疑疑NPC（此时敏感感性和特异异性在70%~95%之间），须须结合临床床作进一步步检查和随随访，必要要时进行组组织学检查查。3、本品的判断断依据和评评价◆相对抗体水水平与罹患患NPC的关系：对1402例1998年以来来在NPC高发区普普通门诊和和耳鼻喉科科就诊病人人的血清进进行检测，，其相对抗抗体水平（（rOD））与罹患NPC的关关系见下表表。1402例病人人中有321例经组组织学检查查确诊为NPC，其其他1081例临床床经多种血血清学方法法或组织学学方法检查查，结合临临床观察，，不能确诊诊为NPC，应考虑虑排除NPC。表NPC高发区1402例疑似病人人相对抗体体水平与罹罹患NPC的关系rOD

%敏感性%特异性

阳性试验似然比（LR＋）

≤0.20099.7(320/321)8.0(86/1081)

1.1≤0.40098.1(315/321)

38.6(417/1081)

1.6≤0.60094.7(304/321)

62.6(677/1081)

2.5≤0.70094.1(302/321)

70.1(758/1081)

3.1≤0.80090.0(289/321)

76.3(825/1081)

3.8≤1.00085.0(273/321)

84.4(912/1081)

5.4≤1.30076.0(244/321)

91.5(989/1081)

8.9≤1.50069.2(222/321)

94.4(1021/1081)

12.5≤1.60063.6(204/321)

95.9(1037/1081)

15.6≤1.80057.9(186/321)

97.4(1053/1081)

22.4≤2.00047.7(153/321)

98.1(1061/1081)

25.8注：阳性试试验似然比比（LR＋）=敏感性∕(1－特异性)EBNA1-IgAELISA检检测结果的的最优化选选择特异度[controls]敏感度[NPC]低/高高rOD值百分比临床考核试验评价（（1）三个医疗单单位的非鼻鼻咽癌个体体的抗体水水平相似，，并且明显显低于鼻咽咽癌患者的的抗体水平平。详见下下表鼻咽癌患者抗体中位数水平非鼻咽癌个体抗体中位数水平玛丽医院2.1rOD0.56rOD东莞市人民医院1.8rOD0.67rOD中山市肿瘤研究所1.9rOD0.63rOD综合1.9rOD0.63rOD临床考核试验评价（（2）三个医疗单单位的检测测中，敏感感性和特异异性的水平平相似。详详见下表界限值=0.7rOD界限值=1.5rOD灵敏度特异性灵敏度特异性玛丽医院93%77%77%95%东莞市人民医院94%70%63%94%中山市肿瘤研究所96%68%68%94%综合94%69%66%94%临床考核试验评价（（3）进行了VCAIgA和EAIgA的免疫荧光光检测以及及EBVDNA检测对比。◆作为筛查实实验排除鼻鼻咽癌的应应用与VCAIgA相比较VCAIgA界值＝0.7rOD阴性预测率94%97%假阴性率13%7%被排除的疑似鼻咽癌病例59%77%◆作为确定实实验预测鼻鼻咽癌的应应用与EAIgA和EBVDNA检测相比较较EAIgAEBVDNA界值＝1.5rOD阳性预测率

86%89%83%假阳性率

4%2%5%被预测的疑似鼻咽癌病例

75%57%77%◆结果表明，，本品在筛筛查试验中中的应用与与目前所使使用的VCAIgA相似，在确确定实验中中的应用与与目前所使使用的EAIgA，或与最新新使用的EBVDNA检测相似。。小结临床考核检检测441例鼻咽癌癌患者，1523例例非鼻咽癌癌患者。考考核结果显显示：◆以R≤0.7为临界值（与目前所使使用的VCAIgA相似），本品检测测阴性符合合率为94%。假阴性率率为6%；特异性为为69%，假阳性31%。◆以R≥1.5为临界值值（与目前所使使用的EAIgA），本品检检测的阳性性符合率为为66%，假阳性率率为6%，特异性94%，假阴性34%。◆上述结果果与本品的的使用说明明书推荐使使用的诊断断参数及其其临床意义义相一致。。中国药品生生物制品检检定所药品品注册检验验报告检品名称及批号EB病毒IgA抗体酶联免疫吸附法诊断试剂盒

批号：20040612检验项目标准规定检验结果物理检查液体组份应为澄清液体符合规定阳性参考品符合率：阳性参考品20份阳性参考品符合率为19/2019/20阴性参考品符合率：阴性参考品20份阴性参考品符合率为19/2019/20精密性（%）精密性参考品n=10CV≤15%2％检验结论符合规定报告编号：：SZ200501144签发日期：：2005年3月29日中国药品生生物制品检检定所药品品注册检验验报告检品名称及批号EB病毒IgA抗体酶联免疫吸附法诊断试剂盒

批号：20040619检验项目标准规定检验结果物理检查液体组份应为澄清液体符合规定阳性参考品符合率：阳性参考品20份阳性参考品符合率为19/2019/20阴性参考品符合率：阴性参考品20份阴性参考品符合率为19/2019/20精密性（%）精密性参考品n=10CV≤15%8％检验结论符合规定报告编号：：SZ200501145签发日期：：2005年3月29日中国药品生生物制品检检定所药品品注册检验验报告检品名称及批号EB病毒IgA抗体酶联免疫吸附法诊断试剂盒

批号：20040626检验项目标准规定检验结果物理检查液体组份应为澄清液体符合规定阳性参考品符合率：阳性参考品20份阳性参考品符合率为19/2019/20阴性参考品符合率：阴性参考品20份阴性参考品符合率为19/2019/20精密性（%）精密性参考品n=10CV≤15%3％检验结论符合规定报告编号：：SZ200501146签发日期：：2005年3月29日谢谢9、静夜夜四无无邻，，荒居居旧业业贫。。。12月月-2212月月-22Tuesday,December20,202210、雨中中黄叶叶树，，灯下下白头头人。。。18:09:0218:09:0218:0912/20/20226:09:02PM11、以我独独沈久，，愧君相相见频。。。12月-2218:09:0218:09Dec-2220-Dec-2212、故人江江海别，，几度隔隔山川。。。18:09:0218:09:0218:09Tuesday,December20,202213、乍见翻翻疑梦，，相悲各各问年。。。12月-2212月-2218:09:0218:09:02December20,202214、他乡生白发发，旧国见青青山。。20十二月月20226:09:02下午18:09:0212月-2215、比不了得就就不比，得不不到的就不要要。。。十二月226:09下下午12月-2218:09December20,202216、行动出成果果，工作出财财富。。2022/12/2018:09:0218:09:0220December202217、做前，能够够环视四周；；做时，你只只能或者最好好沿着以脚为为起点的射线线向前。。6:09:02下午6:09下下午18:09:0212月-229、没没有有失失败败，，只只有有暂暂时时停停止止成成功功！！。。12月月-2212月月-22Tuesday,December20,202210、很很多多事事情情努努力力了了未未必必有有结结果果，，但但是是不不努努力力却却什什么么改改变变也也没没有有。。。。18:09:0218:09:0218:0912/20/20226:09:02PM11、成成功功就就是是日日复复一一日日那那一一点点点点小小小小努努力力的的积积累累。。。。12月-2218:09:0218:09Dec-2220-Dec-2212、世间成成事，不不求其绝绝对圆满满，留一一份不足足，可得得无限完完美。。。18:09:0218:09:0218:09Tuesday,December20,202213、不知香香积寺，，数里入入云峰。。。12月-2212月-2218:09:0218:09:02December20,202214、意志坚坚强的人人能把世世界放在在手中像像泥块一一样任意意揉捏。。20十十二月20226:09:02下午午18:09:0212月-2215、楚塞塞三湘湘接，，荆门门九派派通。。。。。十二月月226:09下下午午12月月-2218:09December20,202216、少年十五五二十时，，步行夺得得胡马骑。。。2022/12/2018:09:0218:09:0220December202217、空山新雨雨后，天气气晚来秋。。。6:09:02下下午6:09下下午18:09:0212月-229、杨柳散散和