高效液相色谱

高效液相色谱-质谱/质谱联用法测定鸡蛋中氯霉素残留量的不确定度评定作者：黄伟蓉,张朋杰,张宪臣,陈丽斯,杨蕙,卢俊文,陈润雯来源：《现代食品》2018年第24期摘要：对高效液相色谱-质谱/质谱联用法检测鸡蛋中氯霉素残留的测量不确定度进行评定。参照GB/T22338-2008中的液相色谱-质谱/质谱法检测鸡蛋样品，依据测量不确定度评定的相关指导文件建立了不确定度数据模型，分析了检测过程中可能引入的不确定度来源，并算出测量结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。当鸡蛋样品中残留量为0.493ug・kg-1时，其扩展不确定度为U=0.0203X2=0.0406ug・kg-1，氯霉素残留量为（0.493±0.0406）ug・kg-l（k=2）。实验过程中引入的不确定度对检测结果影响较大的主要有标准物质配制、样品重复测定、标准曲线拟合以及仪器定量校准；而标准物质称量、样品称重质量、最终定容体积以及样品回收率等引入的不确定度分量对检测结果影响相对较小。关键词：高效液相色谱-质谱串联法；鸡蛋；氯霉素；不确定度评定氯霉素是一种广谱性抗生素，对革兰氏阴性菌和阳性菌均有良好的抑制作用，广泛应用于动物细菌感染的临床治疗；但也能引起人的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺失症、新生儿灰色综合症等［1-2］；因此食品中氯霉素的残留会对人体健康造成严重危害。中华人民共和国农业部公告第235号《动物性食品中兽药最高残留限量》将氯霉素列入禁用药，其检测限为0.1Ug・kg-1。我国规定在鸡肉中的残留限量为100Ug・kg-1,这一限度不会引起骨髓抑制或再生障碍性贫血，但对胚胎有毒性，妊娠动物禁用，产蛋鸡禁用，在鸡蛋中不得检出［3］。鸡蛋也是动物源性食品的重要部分，因此准确测定鸡蛋中氯霉素的残留量具有重要意义。而不确定度的大小直接反应了测量水平的高低，对质量控制具有重要意义；因此为了检测检测结果的可信度，本研究参考了GB/T22338-2008《动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》中的高效液相色谱-质谱/质谱法检测鸡蛋中的氯霉素残留量，并根据CNAS-GL06-2006《化学分析中不确定度的评估指南》［4］，JJF1059.1-2012《测量不确定度与表示》［5］及JJG196-2006《常用玻璃量器检定规程》［6］等相关指导性文件，建立了一套合理、完整的鸡蛋中氯霉素残留量的不确定度评估方案［7-11］。仪器与试剂ABSciexTripleQuad5500液相色谱串联质谱：配电喷雾离子源（ESI）（美国AB公司）；天平HF-2000，感量0.01g；SartoriusBSA2245，感量0.0001g。搅拌机、振荡器、离心机、氮吹仪、移液器（100UL、200uL、100nL）以及100mL容量瓶，A级。氯霉素标准品，纯度299.24%；氘代氯霉素内标，纯度299.9%。乙酸乙酯，甲醇，正己烷：色谱纯；无水硫酸钠、氨水：分析纯；0.22um有机相滤膜；实验室一级水。方法样品的选择和制备从市场购买1kg鲜鸡蛋作为试样。取鲜鸡蛋约500g,去壳经高速组织搅拌机均匀捣碎混匀，装入洁净容器，密封，待测定。标准溶液的配制浓度为100ug・mL-1的氯霉素标准储备液：按纯度折算准确称取氯霉素标准物质0.0100g,置于100mL容量瓶中，用甲醇超声溶解稀释并定容至刻度，摇匀。浓度为1ug・mL-1的氯霉素标准中间液：用移液器准确移取浓度为100ug・mL-1的标准储备液1mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。浓度为5ng・mL-1的氯霉素标准工作液：用移液器准确移取浓度为1Ug・mL-1的标准中间液0.5mL至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。样品前处理准确称取搅拌均匀的鸡蛋样品5g（精准至0.01g）置于50mL离心管，依次加入15mL乙酸乙酯，0.5mL氢氧化铵，5g无水硫酸钠，振摇10min，4500r・minT离心10min，吸取上清液到另一50mL离心管中。另取15mL乙酸乙酯和0.5mL氢氧化铵溶解残渣，重复提取一次。将两次提取液合并，并涡旋混匀。取6mL提取液于氮吹管中在50°C下吹至近干，加2mL水溶解，溶解后加3mL10%甲醇饱和正己烷涡旋混合，4500r・min-1离心5min，弃去上清液，用10%甲醇饱和正己烷重复净化一次。取下层过0.2nm滤膜供高效液相色谱-质谱串联仪。仪器条件色谱条件色谱柱：C18柱（2.1mmX100mm，3.0nm）；流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱条件：0〜2min，25%A；2〜4min，80%A；4〜6min，25%A；流速0.4mL・minT；柱温：35C；进样量：10uLo质谱条件电喷雾离子源（ESI）；负离子模式采集；喷雾电压：-4500V；气帘气流速：30L・min-1;锥孔气流速：45L・min-1；去溶剂气流速：50L・min-1；多反应监测扫描模式（MRM）。

6结果与讨论本实验使用液相色谱-串联质谱法对鸡蛋样品中氯霉素残留量进行了测定。结果显示，当鸡蛋样品中残留量为0.493ug・kg-1时，其扩展不确定度为U=0.0203X2=0.0406Ug・kg-1。测量结果准确度较高，适用于鸡蛋中氯霉素的残留检测。通过表3可知，实验过程中引入的不确定度对检测结果影响较大的主要分量有标准物质的配制、样品重复测定、标准曲线拟合、仪器定量校准；而标准物质称量、样品称重质量、最终定容体积、样品回收率等过程引入的不确定度分量对检测结果影响相对较小。因此在实验过程中应调整仪器使之达到最佳状态，制备样品时使样品充分均匀，确保实验结果更准确、稳定及可