缺血性心脏病的基因治疗课件

缺血性心脏病的基因治疗南京医科大学第一附属医院心内科杨志健编辑课件缺血性心脏病的基因治疗南京医科大学第一附属医院编辑课件1现有治疗药物治疗PCICABG

具有局限性！………无法血运重建………细胞丧失编辑课件现有治疗药物治疗具有局限性！编辑课件2生物学治疗基因治疗、细胞成形术优化现有的治疗为终末期患者提供新的治疗途径编辑课件生物学治疗基因治疗、细胞成形术编辑课件3基因治疗的目的在于修复、替代体内突变、缺失的基因或加强某些被不良抑制基因的功能，或抑制某些不当过强表达基因的功能，以达到使机体异常的功能、代谢得以改善、恢复的目的。编辑课件基因治疗的目的在于修复、替代体内突变、缺失的基因或加强某些被4编辑课件编辑课件5编辑课件编辑课件6编辑课件编辑课件7AngiogenesisStatusSince1999–amassivewaveofangiogenesis-stimulatingdrugsinclinicaltrials:5drugsforcoronaryarterydisease;

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5drugsforperipheralvasculardisease;

2drugsforstroke;10drugsforwoundhealing;LaserDopplerbloodflowinischemichindlimbmodel编辑课件AngiogenesisStatusSince19998血管内皮生长因子（VEGF）：形成最初的血管丛血管生成细小，有渗漏基因治疗：编辑课件血管内皮生长因子（VEGF）：基因治疗：编辑课件9VEGF-121进行了人下肢缺血性治疗的二期临床试验(863)编辑课件VEGF-121进行了人下肢缺血性治疗的二期临床试验(86310血管生成素（Ang）：稳定新生血管壁血管口径增大编辑课件血管生成素（Ang）：编辑课件11VEGF165和Ang1基因

促血管生成和抗缺血研究编辑课件VEGF165和Ang1基因

促血管生成和抗缺血研究12研究内容构建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1联合转染促血管生成作用研究联合转染抗心肌缺血作用研究机制探讨编辑课件研究内容构建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1编辑课13研究结果编辑课件研究结果编辑课件14更强的促血管生成作用编辑课件更强的促血管生成作用编辑课件15进一步减少心肌梗死面积编辑课件进一步减少心肌梗死面积编辑课件16Ang1组和联合组与对照组均有显著性差异，但VEGF组无显著性差异；Ang1组和联合组与VEGF组均有显著性差异高调心肌Bcl-2，抗凋亡编辑课件Ang1组和联合组与对照组均有显著性差异，但VEGF组无显著17单独转染组以及联合组PI3K活性均比对照组显著性增高；联合组比VEGF单独转染组显著升高，但与Ang1组无差异。进一步活化心肌PI3K信号编辑课件单独转染组以及联合组PI3K活性均比对照组显著性增高；联合组18腺病毒介导肝细胞生长因子治疗缺血性心脏病(863,973)编辑课件腺病毒介导肝细胞生长因子治疗缺血性心脏病(863,973)编19

HGF在心血管方向的研究现状抗心肌细胞凋亡，促进血管新生，抗心肌组织纤维化促梗死周遍区心肌肥厚可能改善梗死后室壁扩张，有待进一步研究体外实验中发现HGF诱导骨髓干细胞分化成心肌细胞以及能诱导特异的前体细胞沿浓度梯度定向迁移至梗死区

通过阻NF－kappaB旁路，起到抗炎作用编辑课件HGF在心血管方向的研究现状抗心肌细胞凋亡，促进血管新生20研究目的考察经非梗死相关动脉转染Ad5-HGF对梗死后心衰的改善作用

研究转染Ad5-HGF后，局部心肌中CD117+干细胞动员情况对比经非梗死相关动脉移植骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）或转染Ad5-HGF对心梗死后心衰治疗作用编辑课件研究目的考察经非梗死相关动脉转染Ad5-HGF对梗死后心衰研21

实验技术方法对照组急性心梗模型建立MSCs培养移植（4周后）门控心肌显像，冠状动脉造影处死，免疫组织化学Ad5-HGF组BM-MSCs组

3周后再次心肌显像，冠脉造影编辑课件实验技术方法对照组急性心梗模型建立MSCs培养移植（4周后22开胸结扎前降支，建立模型编辑课件开胸结扎前降支，建立模型编辑课件23门控心肌核素显像A:对照组4周和7周对比B:Ad5-HGF组4周和7周对比编辑课件门控心肌核素显像A:对照组4周和7周对比B:Ad5-HGF24

心功能编辑课件心功能编辑课件25冠状动脉造影：侧支循环分析A:对照组4周和7周对比B:Ad5-HGF组4周和7周对比编辑课件冠状动脉造影：侧支循环分析A:对照组4周和7周对比B:Ad526

免疫组化ELISA法检测心肌组织中HGF蛋白表达编辑课件免疫组化ELISA法检测心肌组织中H27编辑课件编辑课件28Ⅷ因子阳性血管A:BM-MSCs治疗组

B:Ad5-HGF治疗组

编辑课件Ⅷ因子阳性血管A:BM-MSCs治疗组B:Ad5-HG29SMA阳性血管A:BM-MSCs治疗组B:Ad5-HGF治疗组

编辑课件SMA阳性血管A:BM-MSCs治疗组B:Ad5-HGF30编辑课件编辑课件31

CD117+细胞结果

A:对照组B：Ad5-HGF组编辑课件CD117+细胞结果A:对照组B：Ad5-HGF组32编辑课件编辑课件33连续切片CD117和C-Met抗体免疫组织化学检测A：显示细胞呈CD117+

B：显示细胞也呈C-Met+

编辑课件连续切片CD117和C-Met抗体免疫组织化学检测A：显示34

结论经冠脉转染Ad5-HGF能使心肌高度表达HGF蛋白，HGF对心肌梗死慢性期的侧枝循环形成，心肌灌注及心功能均有改善作用

经非梗死相关动脉移植BM-MSCs或肝细胞生长因子均能促进梗死心脏心功能改善和促进血管再生；BM-MSCs移植或Ad5-HGF转导，未显示何者更具优势。

编辑课件结论经冠脉转染Ad5-HGF能使心肌高度表达35

HGF能增加动员至缺血区的CD117+骨髓干细胞，并且该类细胞表达c-Met+；HGF改善心功能及心肌灌注的作用不仅仅是血管新生，可能还涉及到对干细胞的动员召集作用。

编辑课件HGF能增加动员至缺血区的CD117+骨髓干细胞，并且该类36文章被引用VEGF165andangiopoietin-1decreasedmyocardiuminfarctsizethroughphosphatidylinositol-3kinaseandBcl-2pathways.

2005GeneTherapy编辑课件文章被引用VEGF165andangiopoietin-37Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠinChina

编辑课件Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠin3823CHDpatients,dividedinto3groupsbydifferentdoseofAd-HGF5×109pfuAd-HGF1×1010pfuAd-HGF2×1010pfuAd-HGF编辑课件23CHDpatients,dividedinto39Lowdosegroup:6casesMiddledosegroup:6casesHighdosegroup:11cases11patientsonlyreceivedHGFtherapy编辑课件Lowdosegroup:6cases编辑课件40Safety2patientshavetransientfever(38.0-38.50C)withinoneweekaftergenetherapy，andrecoveredafter2-3daysAllsubjectshaveroutineexaminationofblood,biochemicalindex,andtumormarker,allofthemhavenosignificantchange编辑课件Safety2patientshavetransien41EfficiencyEvaluatetheefficiencyinpatientsreceivedHGFtherapyonly编辑课件EfficiencyEvaluatetheeffic42CodeH-01NameLYNASexMaleAge72Birthdate1934.03.25Diagnosis1.Coronaryarterydisease；2.unstableanginaAnginagrading(Canada）ⅢAngiography：1.LADproximalsegment90%stenosis；2.LCXproximalmiddlesegment80%，middlesegment:totaloccluded；3.RCAmildstenosisLAD、LCXwithHGF

编辑课件CodeH-01NameLYNASex43After5weeksAnginograding（Canada）ⅡECT：aftertreatment,theperfusionofinferiorwallimproved,LVdiameterdiminished编辑课件After5weeks编辑课件44编辑课件编辑课件45Pre

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p46M-02Name:SXBASexFemaleName74BirthDate1932.08.14Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography1.LADproximalsegmenttotaloccluded；2.LCXmiddleanddistalsegment90%stenosis；3.RCAproximalsegment70%stenosisLAD、LCXwithHGF编辑课件M-02Name:SXBASexFemale47After5weeksAnginagrading(Canada)ⅡECT：anteriorandposteriorwallperfusionimproved编辑课件After5weeks编辑课件48编辑课件编辑课件49Pre

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p50M-03NameGSBISexmaleAge52Birthdate1954.04.25Diagnosis1.CHD；2.StableanginaAnginagrading（Canada）ⅡAngiography1.LADproximalsegment50%stenosis，middlesegment30％stenosis；2.LCXstenosisinstent，distalsegmentmildirregular3.RCArestenosisinstent，proximalsegmentofstent30-50%stenosis，distal30%LAD,LCXwithHGF编辑课件M-03NameGSBI51After5weeksAnginagrading(Canada)ⅠECT：LVanterior,IVS,inferiorwallperfusionsignificantlyimproved。LVdiameterdiminished.编辑课件After5weeks编辑课件52编辑课件编辑课件53Pre

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p54M-05NameLGSHSexmaleAge76Birthdate1930.07.06Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography:LADproximalandmiddlesegment70-80%stenosis，LCX70%，middlesegment80%stenosis，OM1proximalsegment80%stenosis，RCAproximalsegment70%，distalsegment90%LAD、LCX、RCAwithHGF编辑课件M-05NameLGSHSexmale55After5weeksAnginagrading(Canada)ⅢECT：anteriorandposteriorwallperfusionsignificantimproved。编辑课件After5weeks编辑课件56编辑课件编辑课件57Pre

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p58B-01nameXJLISexMAge69DiagnosisCHD,AMI，Myocardialdysfunction，Hypertension，DMtype2Anginagrading（Canada）IIIAngiography:LM90%，LAD、LCX75-90%stenosis，RCAlongstenosis，occludedindistalsegmentLAD、LCX、RCAwithHGF编辑课件B-01nameXJLISexM59Treatmentfor5weekAnginagrading（Canada）IIIECT：Nosignificantimprovment编辑课件Treatmentfor5week编辑课件60编辑课件编辑课件61Pre

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Pr62B-03nameTZHESexMAge71DiagnosisCHD、AMI，Hypertension、DMAnginagrading（Canada）2AngiographyLADproximalsegment90%，middlesegmenttotalocclusion，LCXdistalsegment80%stenosis，RCAdistalsegment60%stenosisLADwithHGF编辑课件B-03nameTZHESexMAge63Treatmentfor5weeksAnginagrading(Canada):1ECT：Perfusionofanteriorwall,inferiorwallandlateralwallsignificantlyimproved,cardiacchamberalsodiminished。编辑课件Treatmentfor5weeks编辑课件64编辑课件编辑课件65Pre

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p66ConclusionInall11patients7patientsclinicalsyndromeimproved5patientsmyocardiumperfusionimproved(5of6)Commonmedicaltherapyforallpatients(ASA,statin,ACEI,β-blocker,etc)Ad-HGFtherapysafe,effective编辑课件ConclusionInall11patients编辑67冠心病患者冠状动脉内注射给药，对受试者的生命体征、血液生化等均无影响冠心病患者冠状动脉内注射给药受试者的中、大剂量组心肌供血改善，显示Ad-HGF对弥漫性病变,药物治疗很难奏效,又不能承受外科手术或血管成型术的患者提供了一种新的有效的方法。编辑课件冠心病患者冠状动脉内注射给药，对受试者的生命体征、血液生化等68II期临床试验即将批准!编辑课件II期临床试验即将批准!编辑课件69

谢谢编辑课件谢谢编辑课件70缺血性心脏病的基因治疗南京医科大学第一附属医院心内科杨志健编辑课件缺血性心脏病的基因治疗南京医科大学第一附属医院编辑课件71现有治疗药物治疗PCICABG

具有局限性！………无法血运重建………细胞丧失编辑课件现有治疗药物治疗具有局限性！编辑课件72生物学治疗基因治疗、细胞成形术优化现有的治疗为终末期患者提供新的治疗途径编辑课件生物学治疗基因治疗、细胞成形术编辑课件73基因治疗的目的在于修复、替代体内突变、缺失的基因或加强某些被不良抑制基因的功能，或抑制某些不当过强表达基因的功能，以达到使机体异常的功能、代谢得以改善、恢复的目的。编辑课件基因治疗的目的在于修复、替代体内突变、缺失的基因或加强某些被74编辑课件编辑课件75编辑课件编辑课件76编辑课件编辑课件77AngiogenesisStatusSince1999–amassivewaveofangiogenesis-stimulatingdrugsinclinicaltrials:5drugsforcoronaryarterydisease;

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5drugsforperipheralvasculardisease;

2drugsforstroke;10drugsforwoundhealing;LaserDopplerbloodflowinischemichindlimbmodel编辑课件AngiogenesisStatusSince199978血管内皮生长因子（VEGF）：形成最初的血管丛血管生成细小，有渗漏基因治疗：编辑课件血管内皮生长因子（VEGF）：基因治疗：编辑课件79VEGF-121进行了人下肢缺血性治疗的二期临床试验(863)编辑课件VEGF-121进行了人下肢缺血性治疗的二期临床试验(86380血管生成素（Ang）：稳定新生血管壁血管口径增大编辑课件血管生成素（Ang）：编辑课件81VEGF165和Ang1基因

促血管生成和抗缺血研究编辑课件VEGF165和Ang1基因

促血管生成和抗缺血研究82研究内容构建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1联合转染促血管生成作用研究联合转染抗心肌缺血作用研究机制探讨编辑课件研究内容构建Ad5-VEGF165和Ad5-Ang1编辑课83研究结果编辑课件研究结果编辑课件84更强的促血管生成作用编辑课件更强的促血管生成作用编辑课件85进一步减少心肌梗死面积编辑课件进一步减少心肌梗死面积编辑课件86Ang1组和联合组与对照组均有显著性差异，但VEGF组无显著性差异；Ang1组和联合组与VEGF组均有显著性差异高调心肌Bcl-2，抗凋亡编辑课件Ang1组和联合组与对照组均有显著性差异，但VEGF组无显著87单独转染组以及联合组PI3K活性均比对照组显著性增高；联合组比VEGF单独转染组显著升高，但与Ang1组无差异。进一步活化心肌PI3K信号编辑课件单独转染组以及联合组PI3K活性均比对照组显著性增高；联合组88腺病毒介导肝细胞生长因子治疗缺血性心脏病(863,973)编辑课件腺病毒介导肝细胞生长因子治疗缺血性心脏病(863,973)编89

HGF在心血管方向的研究现状抗心肌细胞凋亡，促进血管新生，抗心肌组织纤维化促梗死周遍区心肌肥厚可能改善梗死后室壁扩张，有待进一步研究体外实验中发现HGF诱导骨髓干细胞分化成心肌细胞以及能诱导特异的前体细胞沿浓度梯度定向迁移至梗死区

通过阻NF－kappaB旁路，起到抗炎作用编辑课件HGF在心血管方向的研究现状抗心肌细胞凋亡，促进血管新生90研究目的考察经非梗死相关动脉转染Ad5-HGF对梗死后心衰的改善作用

研究转染Ad5-HGF后，局部心肌中CD117+干细胞动员情况对比经非梗死相关动脉移植骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）或转染Ad5-HGF对心梗死后心衰治疗作用编辑课件研究目的考察经非梗死相关动脉转染Ad5-HGF对梗死后心衰研91

实验技术方法对照组急性心梗模型建立MSCs培养移植（4周后）门控心肌显像，冠状动脉造影处死，免疫组织化学Ad5-HGF组BM-MSCs组

3周后再次心肌显像，冠脉造影编辑课件实验技术方法对照组急性心梗模型建立MSCs培养移植（4周后92开胸结扎前降支，建立模型编辑课件开胸结扎前降支，建立模型编辑课件93门控心肌核素显像A:对照组4周和7周对比B:Ad5-HGF组4周和7周对比编辑课件门控心肌核素显像A:对照组4周和7周对比B:Ad5-HGF94

心功能编辑课件心功能编辑课件95冠状动脉造影：侧支循环分析A:对照组4周和7周对比B:Ad5-HGF组4周和7周对比编辑课件冠状动脉造影：侧支循环分析A:对照组4周和7周对比B:Ad596

免疫组化ELISA法检测心肌组织中HGF蛋白表达编辑课件免疫组化ELISA法检测心肌组织中H97编辑课件编辑课件98Ⅷ因子阳性血管A:BM-MSCs治疗组

B:Ad5-HGF治疗组

编辑课件Ⅷ因子阳性血管A:BM-MSCs治疗组B:Ad5-HG99SMA阳性血管A:BM-MSCs治疗组B:Ad5-HGF治疗组

编辑课件SMA阳性血管A:BM-MSCs治疗组B:Ad5-HGF100编辑课件编辑课件101

CD117+细胞结果

A:对照组B：Ad5-HGF组编辑课件CD117+细胞结果A:对照组B：Ad5-HGF组102编辑课件编辑课件103连续切片CD117和C-Met抗体免疫组织化学检测A：显示细胞呈CD117+

B：显示细胞也呈C-Met+

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结论经冠脉转染Ad5-HGF能使心肌高度表达HGF蛋白，HGF对心肌梗死慢性期的侧枝循环形成，心肌灌注及心功能均有改善作用

经非梗死相关动脉移植BM-MSCs或肝细胞生长因子均能促进梗死心脏心功能改善和促进血管再生；BM-MSCs移植或Ad5-HGF转导，未显示何者更具优势。

编辑课件结论经冠脉转染Ad5-HGF能使心肌高度表达105

HGF能增加动员至缺血区的CD117+骨髓干细胞，并且该类细胞表达c-Met+；HGF改善心功能及心肌灌注的作用不仅仅是血管新生，可能还涉及到对干细胞的动员召集作用。

编辑课件HGF能增加动员至缺血区的CD117+骨髓干细胞，并且该类106文章被引用VEGF165andangiopoietin-1decreasedmyocardiuminfarctsizethroughphosphatidylinositol-3kinaseandBcl-2pathways.

2005GeneTherapy编辑课件文章被引用VEGF165andangiopoietin-107Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠinChina

编辑课件Ad-HGFClinicalTrialPhaseⅠin10823CHDpatients,dividedinto3groupsbydifferentdoseofAd-HGF5×109pfuAd-HGF1×1010pfuAd-HGF2×1010pfuAd-HGF编辑课件23CHDpatients,dividedinto109Lowdosegroup:6casesMiddledosegroup:6casesHighdosegroup:11cases11patientsonlyreceivedHGFtherapy编辑课件Lowdosegroup:6cases编辑课件110Safety2patientshavetransientfever(38.0-38.50C)withinoneweekaftergenetherapy，andrecoveredafter2-3daysAllsubjectshaveroutineexaminationofblood,biochemicalindex,andtumormarker,allofthemhavenosignificantchange编辑课件Safety2patientshavetransien111EfficiencyEvaluatetheefficiencyinpatientsreceivedHGFtherapyonly编辑课件EfficiencyEvaluatetheeffic112CodeH-01NameLYNASexMaleAge72Birthdate1934.03.25Diagnosis1.Coronaryarterydisease；2.unstableanginaAnginagrading(Canada）ⅢAngiography：1.LADproximalsegment90%stenosis；2.LCXproximalmiddlesegment80%，middlesegment:totaloccluded；3.RCAmildstenosisLAD、LCXwithHGF

编辑课件CodeH-01NameLYNASex113After5weeksAnginograding（Canada）ⅡECT：aftertreatment,theperfusionofinferiorwallimproved,LVdiameterdiminished编辑课件After5weeks编辑课件114编辑课件编辑课件115Pre

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p116M-02Name:SXBASexFemaleName74BirthDate1932.08.14Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography1.LADproximalsegmenttotaloccluded；2.LCXmiddleanddistalsegment90%stenosis；3.RCAproximalsegment70%stenosisLAD、LCXwithHGF编辑课件M-02Name:SXBASexFemale117After5weeksAnginagrading(Canada)ⅡECT：anteriorandposteriorwallperfusionimproved编辑课件After5weeks编辑课件118编辑课件编辑课件119Pre

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p120M-03NameGSBISexmaleAge52Birthdate1954.04.25Diagnosis1.CHD；2.StableanginaAnginagrading（Canada）ⅡAngiography1.LADproximalsegment50%stenosis，middlesegment30％stenosis；2.LCXstenosisinstent，distalsegmentmildirregular3.RCArestenosisinstent，proximalsegmentofstent30-50%stenosis，distal30%LAD,LCXwithHGF编辑课件M-03NameGSBI121After5weeksAnginagrading(Canada)ⅠECT：LVanterior,IVS,inferiorwallperfusionsignificantlyimproved。LVdiameterdiminished.编辑课件After5weeks编辑课件122编辑课件编辑课件123Pre

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p124M-05NameLGSHSexmaleAge76Birthdate1930.07.06Diagnosis1.CHD；2.unstableanginaAnginagrading（Canada）ⅢAngiography:LADproximalandmiddlesegment70-80%stenosis，LCX70%，middlesegment80%stenosis，OM1proximalsegment80%stenosis，RCAproximalsegment70%，distalsegment90%LAD、LCX、RCAwithHGF编辑课件M-05NameLGSHSexmale125After5weeksAnginagrading(Canada)ⅢECT：anteriorandposteriorwallperfusionsignificantimproved。编辑课件After5weeks编辑课件126编辑课件编辑课件127Pre

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