流式细胞术在白血病中的应用课件

0世界卫生组织血液肿瘤分类方案（1999年）“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。“这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新的与令人兴奋的合作交流新篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤的治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志17卷3835-3849页，1999年）更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。0世界卫生组织血液肿瘤分类方案（1999年）“新分类方案的基1白血病分子诊断的意义系统诊断白血病初发异常标记精确诊断准确预后指导治疗科研资料残留监测靶向治疗免疫/遗传学靶标MICM诊断1白血病分子诊断的意义系统诊断白血病初发异常标记精确诊断残留2WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。2WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WHO334InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement(2008ASHEducationProgramBookp298)

PatientEvaluation

诊断

单克隆蛋白数量和特征

血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量 24小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白

尿和血清免疫固定

血清自由轻链和比例

骨髓检查和骨髓活检Bonemarrowaspirationandbiopsy

组化

免疫分型-克隆检定，及通过CD38/CD56/CD19/CD45抗体组合能从90余例患者正常浆细胞中找到检测残留MM细胞

终末器官损害评价

全血细胞计数；生化检查:血清肌酐和骨钙测定

预后评估

球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP

骨髓细胞遗传学和FISHt(4;14),t(14;16),del17p

针对某些特定患者的特殊研究

4InvestigativeToolsforMMdi5传统流式细胞术的临床应用细胞计数：CD4、CD34DNA含量：多倍数、S期结果是数据、准确性依赖于良好的质控传统流式细胞术在白血病免疫表型中的应用单参“白血病表型”，阳性比率大多数细胞为肿瘤细胞多为形态学/细胞化学后的确认数据由临床医师判断高分辨流式细胞的优点以多参数正常抗原表达为基础结果类似病理报告用于原发性诊断与鉴别诊断用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断流式细胞术5传统流式细胞术的临床应用传统流式细胞术在白血病免疫表型中的6骨髓-异质性系统中的应用多系列Lymphocyte(T,B,NK)MonocyteNeutrophilEosinophilBasophilErythrocyte骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段必须能涵盖所有细胞6骨髓-异质性系统中的应用多系列100% 1% 0.”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志17卷3835-3849页，1999年）复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。免疫表型异常适合MRD检测80-95%成人AMLHSCT后MRD评估 调整免疫抑制治疗时间，等基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。87%的CD10+CD19+CD20-细胞和约1.RT-PCR:0.相对于全部CD45阳性细胞(WBCs)Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL基因：AML1/ETO阳性。单克隆蛋白数量和特征FCM：未见免疫表型明显异常的细胞。抗体的联合应用能使你从有限的标本中得到最大化的信息量评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断Cytogenetics:1-5%,10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%7应该使用何种抗体？所有抗体必须为标准的商业化试剂没有什么“秘密武器”或者专门特异的抗体抗体的联合应用能使你从有限的标本中得到最大化的信息量对正常抗原表达的正确认识能帮助你有效地鉴别疾病状态相关的改变100% 1% 0.7应该使用何种抗体？所有抗体必8高分辨流式细胞术能够鉴别和分类所有骨髓细胞可以对每一个细胞进行多特征性的检测并对其相应的系列和成熟的阶段进行分类至少检测一万个细胞，分辨率达到0.5%8高分辨流式细胞术能够鉴别和分9910CD45/SSWood(2004)MethodsCellBiology75:559-57610CD45/SSWood(2004)MethodsC11正常粒系成熟模式11正常粒系成熟模式正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576正常B系成熟Wood(2004)MethodsCe13表达交叉系列的抗原非同步抗原共表达：CD34与CD15、CD11b、CD56、CD14抗原的过度表达：早前B-ALL中CD10抗原表达缺失：泛T抗原易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞光散射异常：FSC和SSC白血病相关的免疫表型特点13表达交叉系列的抗原白血病相关的免疫表型特点14AML-M014AML-M015AML-M215AML-M2Cytogenetics:1-5%,Cytogenetics:1-5%,HSCT前MRD评估 优化HSCT的时间10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。残存白血病细胞<10-4,3年无复发用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断用于原发性诊断与鉴别诊断55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。检测复发 加强治疗，准备HSCT05化疗第7个月：评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体基因：AML1/ETO阴性。以诊断的免疫表型作为出发点基因：BCR/ABL阴性。评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断16AML-M3Cytogenetics:1-5%,16AML-M317AML-M417AML-M4基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45阴性略向原始延伸的分布区域可见异常细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有核细胞的89%，主要表达HLA-DR、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT。11%）、CD7+CD117+（0.血清自由轻链和比例用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断MALT+GNeutrophil以诊断的免疫表型作为出发点01%）、CD34+cCD3+（0.FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。80-95%成人AMLWHO血液肿瘤新分类实验技术平台NeutrophilMolecularMeasurementsofTreatmentResponseLymphocyte(T,B,NK)FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45弱表达分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的45%，表达HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（CR）。检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。Application Action辨别出背离正常发育阶段的免疫表型白血病相关的免疫表型特点18AML-M5基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。18A19B-ALL19B-ALL20Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL20Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL21MALT+GMALT+B21MALT+GMALT+B22AUL22AUL23B-CLL/SLL23B-CLL/SLL24HCL24HCL25大B细胞淋巴瘤25大B细胞淋巴瘤评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果以诊断的免疫表型作为出发点流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。单参“白血病表型”，阳性比率骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果100% 1% 0.80-95%成人AMLFCM：未见明显表型异常的残留白血病细胞。FCM印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.白血病相关的免疫表型特点Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。11%）、CD7+CD117+（0.55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。骨髓-异质性系统中的应用26MM评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、27T-ALL27T-ALL基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。FCM：可见残留，在CD45dim/-区域可见约1.05化疗第7个月：RT-PCR:0.这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。至少检测一万个细胞，分辨率达到0.易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。结果是数据、准确性依赖于良好的质控可以对每一个细胞进行多特征性的检测FCM免疫表型、FCMDNA倍体、PCR、FISH是较好的方法。基因：AML1/ETO阴性。以诊断的免疫表型作为出发点辨别出背离正常发育阶段的免疫表型临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果骨髓检查和骨髓活检BonemarrowaspirationandbiopsyWHO血液肿瘤新分类实验技术平台1012 1010109108107≤10680-95%成人AML基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。Cytogenetics:1-5%,Cytogenetics:1-5%,当残存白血病细胞>10-2，3年复发率为76-94%11化疗第20个月：05化疗第7个月：流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断WHO血液肿瘤新分类实验技术平台单参“白血病表型”，阳性比率基因：E2A、MLL、TEL、BCR融合基因均阴性。生化检查:血清肌酐和骨钙测定基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。以多参数正常抗原表达为基础易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞(2008ASHEducationProgramBookp367)免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement87%的CD10+CD19+CD20-细胞和约1.Cytogenetics:1-5%,生化检查:血清肌酐和骨钙测定28NK-LGL基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。实施W29报告包括出现或缺乏的异常细胞群异常免疫表型相比正常细胞群的抗原强度增强，减弱，缺失定量层面的判断相对于全部CD45阳性细胞(WBCs)出现的其它细胞群29报告包括303031TCRVβ克隆31TCRVβ克隆32小结流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断更加确定的诊断排除其他疾病有助于细分亚型更准确的原始细胞辨别和定量有助于预后判断治疗后监测快速32小结流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断33免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。33免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，34MRD背景目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（CR）。但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。34MRD背景目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者35MRDOutlineofLeukemicDiagnosisMorphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flowcytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%CRPrimaryleukemiaOSChemotherapiesAutoSCTAlloSCTInductionLeukemiccells1012 1010109108107≤106100% 1% 0.1%0.010.001 35MRDOutlineofLeukemicDiagn363637MolecularMeasurementsofTreatmentResponse—ClinicalApplication(2008ASHEducationProgramBookp367)

Application Action

检测治疗早期的反应佳 加强治疗检测治疗早期的反应差

无需加强治疗

检测复发 加强治疗，准备HSCT

HSCT前MRD评估 优化HSCT的时间HSCT后MRD评估 调整免疫抑制治疗时间，等

临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果

37MolecularMeasurementsofTr38MRD与预后当残存白血病细胞>10-2，3年复发率为76-94%10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%残存白血病细胞<10-3,3年复发率为8-20%残存白血病细胞<10-4,3年无复发38MRD与预后当残存白血病细胞>10-2，3年复发率为7639各种MRD检测方法检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。FCM免疫表型、FCMDNA倍体、PCR、FISH是较好的方法。39各种MRD检测方法检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发40MRD流式分析原则违背正常分化模式诊断时辨别出背离正常发育阶段的免疫表型相对特异的抗原组合随访辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体以诊断的免疫表型作为出发点40MRD流式分析原则违背正常分化模式41免疫表型异常适合MRD检测ALL>95%儿童ALL>90-95%成人ALLAML85%儿童AML80-95%成人AML41免疫表型异常适合MRD检测ALL42报告模板42报告模板至少检测一万个细胞，分辨率达到0.7化疗D33：辨别出背离正常发育阶段的免疫表型流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断基因：BCR/ABL阴性。HSCT前MRD评估 优化HSCT的时间终末器官损害评价检测治疗早期的反应佳 加强治疗80-95%成人AML辨别出背离正常发育阶段的免疫表型“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；WHO血液肿瘤新分类实验技术平台提示：急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）。85%儿童AML09化疗第30个月：残存白血病细胞<10-4,3年无复发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。Application Action43病例一AML病例资料：女，3岁，2009.6初发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的26%，主要表达HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴细胞比例降低。提示：急性髓系细胞白血病（AML-M2可能）。基因：AML1/ETO阳性。至少检测一万个细胞，分辨率达到44病例一（续1）2009.7化疗D33：FCM：可见残留，CD33+CD19+细胞约占0.04%。基因：AML1/ETO阳性。44病例一（续1）2009.7化疗D33：452009.9D70：FCM：未做。基因：AML1/ETO阴性。2010.3D245：FCM：未见免疫表型明显异常的细胞。基因：AML1/ETO阴性。病例一（续2）452009.9D70：病例一（续2）46病例二B-ALL病例资料：男，3岁，2007.3初发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45弱表达分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的45%，表达HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提示：急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）。基因：BCR/ABL阴性。46病例二B-ALL病例资料：472008.11化疗第20个月：FCM：未见明显表型异常的残留白血病细胞。（未附图）基因：未做。2009.09化疗第30个月：FCM：可见残留，在CD45dim/-区域可见约1.87%的CD10+CD19+CD20-细胞和约1.55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。（见右图）基因：未做。病例二（续1）472008.11化疗第20个月：病例二（续1）48病例二（续2）2010.03化疗+DC-CIK第36个月：FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45阴性略向原始延伸的分布区域可见异常细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有核细胞的89%，主要表达HLA-DR、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT。提示：结合病史，考虑急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）复发。

基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。48病例二（续2）2010.03化疗+DC-CIK第3649病例三T-ALL病例资料：女，3岁，2008.10初发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。提示：急性T淋巴细胞白血病

。基因：E2A、MLL、TEL、BCR融合基因均阴性。49病例三T-ALL病例资料：50病例三（续1）2009.05化疗第7个月：FCM印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.01%）

、CD34+cCD3+（0.11%）

、CD7+CD117+（0.07%）等免疫表型明显异常的T淋巴细胞，考虑为残留白血病细胞。。

基因：未做。

50病例三（续1）2009.05化疗第7个月：51WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。51WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WH52CD45/SSWood(2004)MethodsCellBiology75:559-57652CD45/SSWood(2004)MethodsC正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576正常B系成熟Wood(2004)MethodsCe单参“白血病表型”，阳性比率更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。Leukemiccells实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。用于原发性诊断与鉴别诊断易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。所有抗体必须为标准的商业化试剂Cytogenetics:1-5%,05化疗第7个月：05化疗第7个月：单参“白血病表型”，阳性比率基因：BCR/ABL阴性。抗原的过度表达：早前B-ALL中CD107化疗D33：检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。100% 1% 0.基因：AML1/ETO阳性。Application Action基因：BCR/ABL阴性。辨别出背离正常发育阶段的免疫表型54Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL单参“白血病表型”，阳性比率54Burkitt淋巴瘤/白血病55免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。55免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，56各种MRD检测方法检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。FCM免疫表型、FCMDNA倍体、PCR、FISH是较好的方法。56各种MRD检测方法检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发57MRD流式分析原则违背正常分化模式诊断时辨别出背离正常发育阶段的免疫表型相对特异的抗原组合随访辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体以诊断的免疫表型作为出发点57MRD流式分析原则违背正常分化模式以诊断的免疫表型作为出发点传统流式细胞术在白血病免疫表型中的应用生化检查:血清肌酐和骨钙测定骨髓细胞遗传学和FISHt(4;14),t(14;16),del17p对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；单参“白血病表型”，阳性比率基因：AML1/ETO阴性。高分辨流式细胞术能够鉴别和分类所有骨髓细胞用于原发性诊断与鉴别诊断Cytogenetics:1-5%,FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。检测治疗早期的反应差 无需加强治疗用于原发性诊断与鉴别诊断Application Action白血病相关的免疫表型特点辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。03化疗+DC-CIK第36个月：11化疗第20个月：实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。用于原发性诊断与鉴别诊断相对于全部CD45阳性细胞(WBCs)实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。05化疗第7个月：OutlineofLeukemicDiagnosis单参“白血病表型”，阳性比率终末器官损害评价对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；>95%儿童ALL检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。Leukemiccells骨髓细胞遗传学和FISHt(4;14),t(14;16),del17pOutlineofLeukemicDiagnosisWHO血液肿瘤新分类实验技术平台WHO血液肿瘤新分类实验技术平台临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果至少检测一万个细胞，分辨率达到0.用于原发性诊断与鉴别诊断用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断Cytogenetics:1-5%,单参“白血病表型”，阳性比率目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（CR）。非同步抗原共表达：CD34与CD15、CD11b、CD56、CD14基因：AML1/ETO阳性。当残存白血病细胞>10-2，3年复发率为76-94%免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。01%）、CD34+cCD3+（0.但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。11化疗第20个月：Cytogenetics:1-5%,检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。582009.9D70：FCM：未做。基因：AML1/ETO阴性。2010.3D245：FCM：未见免疫表型明显异常的细胞。基因：AML1/ETO阴性。病例一（续2）以诊断的免疫表型作为出发点检测残存白血病细胞的主要依据是在患59世界卫生组织血液肿瘤分类方案（1999年）“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。“这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新的与令人兴奋的合作交流新篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤的治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志17卷3835-3849页，1999年）更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。0世界卫生组织血液肿瘤分类方案（1999年）“新分类方案的基60白血病分子诊断的意义系统诊断白血病初发异常标记精确诊断准确预后指导治疗科研资料残留监测靶向治疗免疫/遗传学靶标MICM诊断1白血病分子诊断的意义系统诊断白血病初发异常标记精确诊断残留61WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。2WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WHO62363InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement(2008ASHEducationProgramBookp298)

PatientEvaluation

诊断

单克隆蛋白数量和特征

血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量 24小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白

尿和血清免疫固定

血清自由轻链和比例

骨髓检查和骨髓活检Bonemarrowaspirationandbiopsy

组化

免疫分型-克隆检定，及通过CD38/CD56/CD19/CD45抗体组合能从90余例患者正常浆细胞中找到检测残留MM细胞

终末器官损害评价

全血细胞计数；生化检查:血清肌酐和骨钙测定

预后评估

球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP

骨髓细胞遗传学和FISHt(4;14),t(14;16),del17p

针对某些特定患者的特殊研究

4InvestigativeToolsforMMdi64传统流式细胞术的临床应用细胞计数：CD4、CD34DNA含量：多倍数、S期结果是数据、准确性依赖于良好的质控传统流式细胞术在白血病免疫表型中的应用单参“白血病表型”，阳性比率大多数细胞为肿瘤细胞多为形态学/细胞化学后的确认数据由临床医师判断高分辨流式细胞的优点以多参数正常抗原表达为基础结果类似病理报告用于原发性诊断与鉴别诊断用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断流式细胞术5传统流式细胞术的临床应用传统流式细胞术在白血病免疫表型中的65骨髓-异质性系统中的应用多系列Lymphocyte(T,B,NK)MonocyteNeutrophilEosinophilBasophilErythrocyte骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段必须能涵盖所有细胞6骨髓-异质性系统中的应用多系列100% 1% 0.”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志17卷3835-3849页，1999年）复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。免疫表型异常适合MRD检测80-95%成人AMLHSCT后MRD评估 调整免疫抑制治疗时间，等基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。87%的CD10+CD19+CD20-细胞和约1.RT-PCR:0.相对于全部CD45阳性细胞(WBCs)Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL基因：AML1/ETO阳性。单克隆蛋白数量和特征FCM：未见免疫表型明显异常的细胞。抗体的联合应用能使你从有限的标本中得到最大化的信息量评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断Cytogenetics:1-5%,10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%66应该使用何种抗体？所有抗体必须为标准的商业化试剂没有什么“秘密武器”或者专门特异的抗体抗体的联合应用能使你从有限的标本中得到最大化的信息量对正常抗原表达的正确认识能帮助你有效地鉴别疾病状态相关的改变100% 1% 0.7应该使用何种抗体？所有抗体必67高分辨流式细胞术能够鉴别和分类所有骨髓细胞可以对每一个细胞进行多特征性的检测并对其相应的系列和成熟的阶段进行分类至少检测一万个细胞，分辨率达到0.5%8高分辨流式细胞术能够鉴别和分68969CD45/SSWood(2004)MethodsCellBiology75:559-57610CD45/SSWood(2004)MethodsC70正常粒系成熟模式11正常粒系成熟模式正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576正常B系成熟Wood(2004)MethodsCe72表达交叉系列的抗原非同步抗原共表达：CD34与CD15、CD11b、CD56、CD14抗原的过度表达：早前B-ALL中CD10抗原表达缺失：泛T抗原易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞光散射异常：FSC和SSC白血病相关的免疫表型特点13表达交叉系列的抗原白血病相关的免疫表型特点73AML-M014AML-M074AML-M215AML-M2Cytogenetics:1-5%,Cytogenetics:1-5%,HSCT前MRD评估 优化HSCT的时间10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。残存白血病细胞<10-4,3年无复发用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断用于原发性诊断与鉴别诊断55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。检测复发 加强治疗，准备HSCT05化疗第7个月：评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体基因：AML1/ETO阴性。以诊断的免疫表型作为出发点基因：BCR/ABL阴性。评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断75AML-M3Cytogenetics:1-5%,16AML-M376AML-M417AML-M4基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45阴性略向原始延伸的分布区域可见异常细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有核细胞的89%，主要表达HLA-DR、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT。11%）、CD7+CD117+（0.血清自由轻链和比例用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断MALT+GNeutrophil以诊断的免疫表型作为出发点01%）、CD34+cCD3+（0.FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。80-95%成人AMLWHO血液肿瘤新分类实验技术平台NeutrophilMolecularMeasurementsofTreatmentResponseLymphocyte(T,B,NK)FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45弱表达分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的45%，表达HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（CR）。检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。Application Action辨别出背离正常发育阶段的免疫表型白血病相关的免疫表型特点77AML-M5基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。18A78B-ALL19B-ALL79Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL20Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL80MALT+GMALT+B21MALT+GMALT+B81AUL22AUL82B-CLL/SLL23B-CLL/SLL83HCL24HCL84大B细胞淋巴瘤25大B细胞淋巴瘤评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果以诊断的免疫表型作为出发点流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。单参“白血病表型”，阳性比率骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果100% 1% 0.80-95%成人AMLFCM：未见明显表型异常的残留白血病细胞。FCM印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.白血病相关的免疫表型特点Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。11%）、CD7+CD117+（0.55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。骨髓-异质性系统中的应用85MM评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、86T-ALL27T-ALL基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。FCM：可见残留，在CD45dim/-区域可见约1.05化疗第7个月：RT-PCR:0.这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。至少检测一万个细胞，分辨率达到0.易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。结果是数据、准确性依赖于良好的质控可以对每一个细胞进行多特征性的检测FCM免疫表型、FCMDNA倍体、PCR、FISH是较好的方法。基因：AML1/ETO阴性。以诊断的免疫表型作为出发点辨别出背离正常发育阶段的免疫表型临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果骨髓检查和骨髓活检BonemarrowaspirationandbiopsyWHO血液肿瘤新分类实验技术平台1012 1010109108107≤10680-95%成人AML基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。Cytogenetics:1-5%,Cytogenetics:1-5%,当残存白血病细胞>10-2，3年复发率为76-94%11化疗第20个月：05化疗第7个月：流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断WHO血液肿瘤新分类实验技术平台单参“白血病表型”，阳性比率基因：E2A、MLL、TEL、BCR融合基因均阴性。生化检查:血清肌酐和骨钙测定基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。以多参数正常抗原表达为基础易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞(2008ASHEducationProgramBookp367)免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement87%的CD10+CD19+CD20-细胞和约1.Cytogenetics:1-5%,生化检查:血清肌酐和骨钙测定87NK-LGL基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。实施W88报告包括出现或缺乏的异常细胞群异常免疫表型相比正常细胞群的抗原强度增强，减弱，缺失定量层面的判断相对于全部CD45阳性细胞(WBCs)出现的其它细胞群29报告包括893090TCRVβ克隆31TCRVβ克隆91小结流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断更加确定的诊断排除其他疾病有助于细分亚型更准确的原始细胞辨别和定量有助于预后判断治疗后监测快速32小结流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断92免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。33免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，93MRD背景目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（CR）。但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。34MRD背景目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者94MRDOutlineofLeukemicDiagnosisMorphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flowcytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%CRPrimaryleukemiaOSChemotherapiesAutoSCTAlloSCTInductionLeukemiccells1012 1010109108107≤106100% 1% 0.1%0.010.001 35MRDOutlineofLeukemicDiagn953696MolecularMeasurementsofTreatmentResponse—ClinicalApplication(2008ASHEducationProgramBookp367)

Application Action

检测治疗早期的反应佳 加强治疗检测治疗早期的反应差

无需加强治疗

检测复发 加强治疗，准备HSCT

HSCT前MRD评估 优化HSCT的时间HSCT后MRD评估 调整免疫抑制治疗时间，等

临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果

37MolecularMeasurementsofTr97MRD与预后当残存白血病细胞>10-2，3年复发率为76-94%10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%残存白血病细胞<10-3,3年复发率为8-20%残存白血病细胞<10-4,3年无复发38MRD与预后当残存白血病细胞>10-2，3年复发率为7698各种MRD检测方法检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。FCM免疫表型、FCMDNA倍体、PCR、FISH是较好的方法。39各种MRD检测方法检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发99MRD流式分析原则违背正常分化模式诊断时辨别出背离正常发育阶段的免疫表型相对特异的抗原组合随访辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体以诊断的免疫表型作为出发点40MRD流式分析原则违背正常分化模式100免疫表型异常适合MRD检测ALL>95%儿童ALL>90-95%成人ALLAML85%儿童AML80-95%成人AML41免疫表型异常适合MRD检测ALL101报告模板42报告模板至少检测一万个细胞，分辨率达到0.7化疗D33：辨别出背离正常发育阶段的免疫表型流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断基因：BCR/ABL阴性。HSCT前MRD评估 优化HSCT的时间终末器官损害评价检测治疗早期的反应佳 加强治疗80-95%成人AML辨别出背离正常发育阶段的免疫表型“新分类方案的基本原则是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来鉴定疾病的‘真实’本质”。临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果10-3<残存白血病细胞<10-2,3年复发率为37-53%免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致；WHO血液肿瘤新分类实验技术平台提示：急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）。85%儿童AML09化疗第30个月：残存白血病细胞<10-4,3年无复发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。Application Action102病例一AML病例资料：女，3岁，2009.6初发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的26%，主要表达HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴细胞比例降低。提示：急性髓系细胞白血病（AML-M2可能）。基因：AML1/ETO阳性。至少检测一万个细胞，分辨率达到103病例一（续1）2009.7化疗D33：FCM：可见残留，CD33+CD19+细胞约占0.04%。基因：AML1/ETO阳性。44病例一（续1）2009.7化疗D33：1042009.9D70：FCM：未做。基因：AML1/ETO阴性。2010.3D245：FCM：未见免疫表型明显异常的细胞。基因：AML1/ETO阴性。病例一（续2）452009.9D70：病例一（续2）105病例二B-ALL病例资料：男，3岁，2007.3初发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45弱表达分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的45%，表达HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提示：急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）。基因：BCR/ABL阴性。46病例二B-ALL病例资料：1062008.11化疗第20个月：FCM：未见明显表型异常的残留白血病细胞。（未附图）基因：未做。2009.09化疗第30个月：FCM：可见残留，在CD45dim/-区域可见约1.87%的CD10+CD19+CD20-细胞和约1.55%的HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。（见右图）基因：未做。病例二（续1）472008.11化疗第20个月：病例二（续1）107病例二（续2）2010.03化疗+DC-CIK第36个月：FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45阴性略向原始延伸的分布区域可见异常细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有核细胞的89%，主要表达HLA-DR、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT。提示：结合病史，考虑急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）复发。

基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。48病例二（续2）2010.03化疗+DC-CIK第36108病例三T-ALL病例资料：女，3岁，2008.10初发FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的59%，与淋巴细胞分界不清，表达HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。提示：急性T淋巴细胞白血病

。基因：E2A、MLL、TEL、BCR融合基因均阴性。49病例三T-ALL病例资料：109病例三（续1）2009.05化疗第7个月：FCM印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.01%）

、CD34+cCD3+（0.11%）

、CD7+CD117+（0.07%）等免疫表型明显异常的T淋巴细胞，考虑为残留白血病细胞。。

基因：未做。

50病例三（续1）2009.05化疗第7个月：110WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。51WHO血液肿瘤新分类实验技术平台实施WH111CD45/SSWood(2004)MethodsCellBiology75:559-57652CD45/SSWood(2004)MethodsC正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576正常B系成熟Wood(2004)MethodsCe单参“白血病表型”，阳性比率更重要的是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断的较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案的新时代。Leukemiccells实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学实验技术平台以及掌握这类实验技能并具有专业知识的人员。用于原发性诊断与鉴别诊断易位抗原表达：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段的T淋巴细胞复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。所有抗体必须为标准的商业化试剂Cytogenetics:1-5%,05化疗第7个月：