临床免疫学试验诊断课件

目的要求病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义肿瘤标志物的检测特征及其意义自身免疫性疾病的特点和主要指标酶联免疫吸附试验的原理，方法酶免疫组化技术概念、过程及应用。沉淀试验、凝集试验和标记技术原理细胞因子的检测及临床应用T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法移植排斥反应的免疫学监测外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测目的要求病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义临床免疫学实验诊断实验诊断学临床免疫学实验诊断临床免疫学实验诊断3临床免疫学实验诊断概述感染性疾病免疫学诊断肿瘤免疫学诊断免疫增殖和免疫缺陷病诊断超敏反应性疾病免疫学诊断自身免疫性疾病诊断移植免疫学临床免疫学检验的自动化3临床免疫学实验诊断概述临床免疫学与免疫检验免疫检验可分为两部分：一部分为利用免疫检测原理与技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞粘附分子等免疫相关物质；另一部分是利用免疫检测原理与技术检测体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。临床免疫学与免疫检验免疫检验可分为两部分：免疫学技术发展史年代学者贡献1894J.Bordet补体与溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特异凝集反应1896G.Widal,A.Sicad肥达试验1897R.Kraus沉淀试验1900J.Bordet,O.Gengou补体结合反应1900K.Landsteiner人类ABO血型及其抗体1906A.Wassermann梅毒补体结合反应1935M.Heidelberger,F.Kendall纯化抗体,定量沉淀反应1941A.Coons免疫荧光标记1946J.Oudin凝胶内沉淀反应1948O.Ouchterlony,S.Elek双扩散沉淀反应1953P.Grabar,C.Williams免疫电泳分析,Ig多样性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫标记1966S.Avrames,J.Uriel,etal酶标免疫技术1975G.Kohler,C.Milstein杂交瘤技术与单克隆抗体免疫学技术发展史年代学者贡献1894J.Bordet补体与发展进程的主要阶段自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应）加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术）标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反应过程标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合发展进程的主要阶段自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝免疫检验涉及的主要技术 放射免疫技术 化学发光免疫技术 荧光免疫技术 流式细胞免疫技术 酶联免疫技术 免疫印迹技术 透/散射免疫技术

单克隆抗体技术免疫检验涉及的主要技术 放射免疫技术 化学发光免疫技8概述：凝集反应8概述：凝集反应9单向琼脂扩散试验9单向琼脂扩散试验10测吸光度计算抗原或抗体的含量抗体抗原免疫复合物的浓度与透射光的衰减呈正相关免疫比浊法原理10测吸光度计算抗原或抗体的含量抗体抗原免疫复合物的浓度与透11概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术。免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检测技术等。特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、定位。概述：标记免疫技术11概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗12免疫荧光技术12免疫荧光技术13酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)13酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)14斑点金免疫渗滤试验ADCB阴性（未怀孕）加尿样除去滤器加胶体金标记抗体加洗涤液14斑点金免疫渗滤试验ADCB阴性（未怀孕）加尿样除去滤器加化学发光/电化学发光技术化学发光/电化学发光技术16免疫印迹法图解SDS裂解病毒聚丙酰胺凝胶电泳-+95684512KD电转印至NC膜上置待测血清中，漂洗；加酶标抗抗体，漂洗；加底物显色1204124KD16免疫印迹法图解SDS裂解病毒聚丙酰胺凝胶电泳-+临床应用临床应用18一感染性疾病免疫学诊断（一）病毒性肝炎（二）细菌感染（三）病毒感染（四）真菌感染（五）寄生虫感染（六）其他18一感染性疾病免疫学诊断（一）病毒性肝炎19肝炎甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎19肝炎甲型肝炎乙型肝炎20甲型肝炎免疫学检测抗体检测IgM型：常用IgM抗体捕捉ELISA检测法IgG型：双份血清，用于流行病学调查、既往感染或疫苗效果评价抗原检测ELISA夹心法难以常规开展20甲型肝炎免疫学检测抗体检测21实验室检查蛋白质代谢功能检查胆红素代谢检查常用的血清酶及同工酶检查肝纤维化常用标志物检测21实验室检查蛋白质代谢功能检查22HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc结果分析+----HBV感染或无症状携带者++---急性或慢性乙型肝炎，或无症状携带者++--+急性或慢性乙型肝炎（传染性强，“大三阳”）+--++急性感染趋向恢复（“小三阳”）--+++既往感染恢复期--++-既往感染恢复期----+既往感染或“窗口期”--+--既往感染或接种过疫苗乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测结果分析22HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc结果分23丙型肝炎免疫学检测免疫学：筛选试验ELISA、放射免疫法抗HCVIgG或IgM。抗HCVIgM早期诊断。确证免疫印迹法23丙型肝炎免疫学检测免疫学：筛选试验ELISA、放射免24丁型肝炎免疫学检测1）HDV抗原2）抗HDVIgM3）抗HDV

24丁型肝炎免疫学检测1）HDV抗原2）抗HDVIgM25戊型肝炎免疫学检测抗体检测IgM型：诊断指标，ELISA法IgG型：双份血清，流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价病毒抗原25戊型肝炎免疫学检测抗体检测26（二）细菌感染免疫学诊断人感染病原体产生特异性抗体可持续一段时间，→现症诊断，疾病追溯。1.血清抗链球菌溶血素“O”试验：A链近期感染，活动性风湿热、风湿性关节炎、心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等26（二）细菌感染免疫学诊断人感染病原体产生特异性抗体可持续27（二）细菌感染免疫学诊断2.伤寒副伤寒沙门菌IgM抗体：ELISA法阴性或滴度＜1:20；IgM抗体早期诊断价值。3.伤寒副伤寒沙门菌可溶性抗原测定：乳胶凝集法为阴性。确诊伤寒沙门菌感染。4.结核分枝杆菌抗体测定：胶体金或ELISA法检测抗体阴性。结核分枝杆菌感染。27（二）细菌感染免疫学诊断2.伤寒副伤寒沙门菌IgM抗体：28（三）病毒感染免疫学诊断TORCH：弓形虫，风疹病毒，巨细胞病毒，单纯疱疹病毒ⅠⅡ型抗体检测早孕时胎儿先天性风疹感染，新生儿致残致畸率可达80％，损害五官神经系统IgM抗体出现均应做咨询。IgG抗体应注意滴度变化，滴度低且无变化为既往感染，双份血清滴度升高4倍以上。28（三）病毒感染免疫学诊断TORCH：弓形虫，风疹病毒，巨29（三）病毒感染免疫学诊断单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）致畸性、影响新生儿神经系统发育，IgM和IgG抗体的检测，IgM型为近期感染，IgG型多为既往感染。巨细胞病毒﹙CMV﹚造成神经系统及智力的障碍。EIA法测IgM了解近期感染，IgG流行病学调查。29（三）病毒感染免疫学诊断单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）30（三）病毒感染免疫学诊断3嗜异性凝集—传染性单核细胞增多症EB病毒感染：感染后2周抗体效价达高峰，常＞1：56；3个月后消失；效价上升4倍以上；更有诊断价值。4严重急性呼吸综合征病毒抗体SARS冠状病毒。抗体阳性表明感染过，阴性到阳性血清转化，或急性期到恢复期抗体效价增高4倍以上，表明有近期感染。30（三）病毒感染免疫学诊断3嗜异性凝集—传染性单核细胞增多（三）病毒感染免疫学诊断（三）病毒感染免疫学诊断32（四）真菌感染免疫学诊断意义有限32（四）真菌感染免疫学诊断意义有限33（五）寄生虫感染免疫学诊断弓形虫抗体囊虫抗体测定：人和猪共患的寄生虫病。[参考值]①ELISA法：血清低于1：64为阴性；脑脊液低于1：8为阴性②间接血凝法：血清低于1：128为阴性；脑脊液低于1：8为阴性。[临床意义]IgG阳性见于囊虫病，可用作流行病学调查。33（五）寄生虫感染免疫学诊断弓形虫抗体34（六）其他感染免疫学诊断性传播疾病：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、淋球菌、HIV引起。1衣原体抗体测定沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病常见的病原体之一。①IgM阳性提示近期有CT感染，有利于早期诊断；②IgG在发病后6－8周出现，持续时间较长；提示曾有过CT感染34（六）其他感染免疫学诊断性传播疾病：衣原体、支原体、梅毒35（六）其他感染免疫学诊断2支原体血清学检测：肺炎支原体、解脲人原体、人型支原体和生殖道支原体。单份血清效价＞1：64－128者或双份血清有4倍以上增长者，有诊断意义。3梅毒螺旋体抗体测定梅毒螺旋体反应素试验敏感性高；定性试验阳性的情况下，必须进行确诊试验，若阳性可确诊梅毒。4淋球菌血清学测定35（六）其他感染免疫学诊断2支原体血清学检测：肺炎支原体36二肿瘤免疫学诊断血清肿瘤标志物检测细胞表面肿瘤标志物检测患者免疫功能状态评估临床意义：①早期诊断和发现肿瘤；②提示肿瘤发生的部位和组织来源；③判别肿瘤恶性程度；④监测临床治疗效果；⑤监测肿瘤复发。36二肿瘤免疫学诊断血清肿瘤标志物检测373738肿瘤标志物肿瘤组织产生的、可反映肿瘤自身存在的化学物质。大分子蛋白质(包括肽类、激素和酶)，小分子脂类和氨基酸衍生物。38肿瘤标志物肿瘤组织产生的、可反映肿瘤自身存在的化学物质。39肿瘤标志物标志物的多样性同一肿瘤可有多种标志物。联合检测标志物定位相对特异性同一标志物在多种肿瘤中存在。标志物在某些良性疾病中，一过性升高。（动态诊断）标志物的多变性随病情发展而升高随治疗见效而下降随复发转移再升高（动态随访）39肿瘤标志物标志物的多样性40肿瘤标志物细胞肿瘤标志物：位于细胞中的物质或抗原，如激素受体、白血病表型、分子基因等。体液肿瘤标志物：病理情况下，浓度增加时可在血液、尿液或其他体液中测得的物质，如AFP、CA19-9、CEA、CA15-3等。40肿瘤标志物细胞肿瘤标志物：41肿瘤标志物酶类激素类癌胚抗原类糖类抗原41肿瘤标志物酶类42肿瘤标志物ROC曲线假阴性率是指将患者错误地判定为无病的比例（即1-灵敏度）。假阳性率＝1－特异度。42肿瘤标志物ROC曲线假阴性率是指将患者错误地判定为无病的43血清肿瘤标志物检测甲胎蛋白属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期AFP由卵黄囊和肝脏产生，成人肝脏只产生微量AFP。肝细胞癌、卵黄囊瘤、胚胎性癌的肿瘤标志。妊娠/良性肝病43血清肿瘤标志物检测甲胎蛋白属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期AFP44血清肿瘤标志物检测CEA：胃肠道恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌等广谱诊断、监测、预后、疗效评价大分子糖蛋白，属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期由肝、胃肠及胰合成。肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等都可见血清CEA水平升高。作为消化道癌瘤的标志。44血清肿瘤标志物检测CEA：胃肠道恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌等45血清肿瘤标志物检测PSA：前列腺癌/前列腺增生监测疗效、判断预后50岁以上男性每年普查1次45血清肿瘤标志物检测PSA：前列腺癌/前列腺增生46血清肿瘤标志物检测PAP前列腺酸性磷酸酶：前列腺癌诊断、疗效、预后监测酸性磷酸酶可来自正常前列腺细胞，亦可来自癌细胞。血清前列腺酸性磷酸酶(PSAP)的监测在早期前列腺癌的诊断、前列腺癌病情的监测、鉴别诊断方面都有帮助。46血清肿瘤标志物检测PAP前列腺酸性磷酸酶：47神经原特异性烯醇化酶（NSE）同功酶类肿瘤标志物，小细胞肺癌、神经母细胞瘤和神经内分泌肿瘤及脑损伤时升高。待测标本绝对禁止溶血。NSE高预示生存期短，下降是疗效良好标志。47神经原特异性烯醇化酶（NSE）同功酶类肿瘤标志物，小细胞48激素类肿瘤标志物肺癌：NSE、CYFRA21-1、CEA乳腺癌：CA153、CEA肝癌：AFP、AFU、CEA、AKP同工酶胰腺癌：CA242、CA199、CA50卵巢癌：CA125、CEA、CA199、HCG联合应用可大大提高检出的灵敏度48激素类肿瘤标志物肺癌：NSE、CYFRA21-1、CEA49血清肿瘤标志物检测糖类抗原标志物是由肿瘤细胞分泌的或者是肿瘤细胞表面的抗原。针对这些抗原的单克隆抗体已成为临床上较为有用的肿瘤标志物，比天然分泌的标志物（如酶和激素）更敏感。49血清肿瘤标志物检测糖类抗原标志物是由肿瘤细胞分泌的或者是50血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA19-9：消化道恶性肿瘤胰腺癌、肝胆系统癌、胃癌和大肠癌，特别是胰腺癌。糖链抗原CA125：卵巢癌是卵巢癌和子宫内膜癌的肿瘤标志物50血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA19-9：消化道恶性肿瘤51血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA50：胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌。非特异性广谱肿瘤标志物。糖链抗原CA15-3：乳腺癌诊断、术后监测乳腺癌患者30-50%增高，转移者增高达80%；51血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA50：胰腺癌、结肠直肠癌、52血清肿瘤标志物检测方法：酶免、荧光、放射意义：早期诊断、鉴别良性恶性、发生部位和程度、监测疗效、预防复发52血清肿瘤标志物检测方法：酶免、荧光、放射53血清肿瘤标志物检测方法：荧光放射53血清肿瘤标志物检测方法：荧光放射54细胞表面肿瘤标志物检测免疫组化、流式细胞术54细胞表面肿瘤标志物检测免疫组化、流式细胞术55患者免疫状态评估T细胞及亚群NK细胞吞噬细胞功能抗体、补体、细胞因子水平55患者免疫状态评估T细胞及亚群56三免疫增殖和免疫缺陷病诊断免疫器官、免疫组织、免疫细胞异常增殖引起的机体病理损伤。淋巴系统异常增殖所引起的疾病。先天遗传因素或后天因素造成的免疫系统发育、分化、代谢或相互调节的不同环节发生障碍，导致免疫功能低下或缺失，临床表现以感染为主的一组综合征。56三免疫增殖和免疫缺陷病诊断免疫器官、免疫组织、免疫细胞57单克隆免疫球蛋白病诊断对免疫球蛋白异常增殖病的检测，其目的是早期发现疾病、监控病情和判断预后。57单克隆免疫球蛋白病诊断对免疫球蛋白异常增殖病的检测，其目58单克隆免疫球蛋白病诊断血清蛋白区带电泳免疫电泳免疫固定电泳血清免疫球蛋白定量免疫球蛋白轻链型筛选本周蛋白检测冷球蛋白检测58单克隆免疫球蛋白病诊断血清蛋白区带电泳59血清蛋白区带电泳测定M蛋白的一种定性实验，常采用醋酸纤维素膜和琼脂糖电泳两种方法。M蛋白在电泳时出现于～区带中，不同类型的M蛋白的电泳后所处位置略有不同59血清蛋白区带电泳测定M蛋白的一种定性实验，常采用醋酸纤维60血清免疫球蛋白定量病人IgGIgA

IgM

KAP

LAM

K/L（g/l)姓名8～150.85～3.00.5～2.51.72～3.830.81～1.921.47～2.95A46.2↑0.23↓0.17↓0.26↓16.80↑0.02↓B7.36↓0.31↓26.90↑5.11↑1.025.01↑

C1.78↓49.50↑0.17↓18.20↑0.18↓101.11↑D2.77↓0.23↓0.22↓0.72↓0.950.76↓E4.91↓0.34↓0.29↓1.02↓2.00↑0.51↓F38.70↑1.932.007.34↑4.08↑1.8060血清免疫球蛋白定量病人IgGIgA61肾损伤型特点：选择性蛋白丢失

总蛋白和白蛋白均严重降低

α2-球蛋白显著升高

β-球蛋白降低/正常/升高

γ-球蛋白正常/降低

常见于肾病综合征61肾损伤型特点：选择性蛋白丢失

总蛋白和白蛋白均严重降低

62肝损伤型特点：白蛋白、α1、α2、β-球蛋白合成减少，γ-球蛋白合成增加。

总蛋白降低/正常

白蛋白严重降低

α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白降低

γ-球蛋白升高

常见于重症肝炎、肝硬化、肝癌

62肝损伤型特点：白蛋白、α1、α2、β-球蛋白合成减少，63急性感染与应激状态特点：α1糖蛋白等急性时相反应蛋白增加。

Alb减少或正常，

α1、α2-球蛋白增高，

γ-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。63急性感染与应激状态特点：α1糖蛋白等急性时相反应蛋白增加64慢性炎症型特点：γ-球蛋白显著升高

总蛋白降低/正常/升高

白蛋白降低

α1-球蛋白、α2-球蛋白升高

β-球蛋白升高/降低

γ-球蛋白显著升高常见慢性感染、风湿病及其它自身免疫病

64慢性炎症型特点：γ-球蛋白显著升高

总蛋白降低/正常/升65低蛋白血症型特点：

总蛋白和白蛋白明显减低

α1-球蛋白正常/升高

α2-球蛋白正常/降低

β-球蛋白降低

γ-球蛋白正常/降低

常见于营养不良、吸收不良、非选择性蛋白丢失

65低蛋白血症型特点：

总蛋白和白蛋白明显减低

α1-球蛋白66单克隆高γ-球蛋白血症型特点：α2、β或γ区出现单克隆条带，正常免疫球蛋白带减弱或消失。

见于良、恶性M蛋白病、多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、半分子病、淋巴瘤、某些白血病。66单克隆高γ-球蛋白血症型特点：α2、β或γ区出现单克隆条67免疫缺陷病实验诊断B细胞缺陷病检测血清Ig测定同种血型凝集素的测定：ABO血型抗体特异性抗体产生能力测定噬菌体试验B细胞表面膜Ig检测-免疫组化CD抗原检测67免疫缺陷病实验诊断B细胞缺陷病检测68免疫缺陷病实验诊断T细胞缺陷病的检测皮肤试验：迟发型超敏反应DTH能力T细胞及其亚群检测：CD标记T细胞功能检测：PHA刺激淋巴细胞增殖转化结核菌素试验68免疫缺陷病实验诊断T细胞缺陷病的检测结核菌素试验69MTT比色MTT是一种噻唑盐，胞内线粒体琥珀酸脱氢酶底物反应后呈蓝黑色甲潜颗粒+盐酸异丙醇溶（570nm）。69MTT比色MTT是一种噻唑盐，胞内线粒体琥珀酸脱氢酶底物70免疫缺陷病实验诊断吞噬细胞缺陷病检测白细胞计数趋化功能检测吞噬和杀伤试验NBT还原试验黏附分子检测70免疫缺陷病实验诊断吞噬细胞缺陷病检测71免疫缺陷病实验诊断补体系统缺陷病检测：C1INH基因诊断71免疫缺陷病实验诊断补体系统缺陷病检测：C1INH72免疫缺陷病实验诊断HIV检测病毒标志检测：分离病毒组分免疫标志检测非特异性检测：T细胞亚群等72免疫缺陷病实验诊断HIV检测73免疫缺陷病实验诊断73免疫缺陷病实验诊断74免疫缺陷病实验诊断①初筛（ELISA、IFA、RIA）②确证：免疫印迹试验,至少同时测两种抗体(P24、gp120)阳性,方可判断HIV感染74免疫缺陷病实验诊断①初筛（ELISA、IFA、RIA）75样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送确认重复检测阴性报告均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种原理初筛试剂选用初筛试剂阴性反应HIV抗体初筛检测流程图75样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送确认重复检测76HIV抗体确认实验结果a强阳性对照（HIV-1和HIV-2）b弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照d典型的HIV-2血清阳性反应abcdgp160gp120p66p55p51gp41p39p31P24p17血清对照HIV-2特异带76HIV抗体确认实验结果a强阳性对照（HIV-1和HIV77初筛检测阳性标本两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性反应一阴一阳阳性反应免疫印迹法WB-1/2混合型复核报告HIV-2血清学阳性反应,必要时测核酸阴性反应可疑反应HIV-2阳性反应免疫印迹法WB-2阴性报告出现gp36阴性反应可疑反应HIV-1阳性报告HIV-1阳性反应每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体确认实验流程图77初筛检测阳性标本两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性反应一阴78CD4+T细胞绝对数量78CD4+T细胞绝对数量79体液免疫检测1.单向免疫扩散(SRID).2.透射比浊、散射比浊.3.ELISA，RIA(IgD,IgE).4.免疫电泳.79体液免疫检测1.单向免疫扩散(SRID).80细胞免疫检测1.皮肤试验2.T细胞及其亚群的检测3.E玫瑰花结试验4.T细胞体外免疫功能检测（1）淋巴细胞增殖反应试验（2）T细胞分泌产物功能的检测80细胞免疫检测1.皮肤试验81四超敏反应性疾病免疫学诊断81四超敏反应性疾病免疫学诊断82I型超敏反应检验：血清IgE检测血清总IgE测定：标记技术ELISA放射免疫吸附试验化学发光法IgE升高：过敏性哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、IgE骨髓瘤等超敏反应≠IgE升高82I型超敏反应检验：血清IgE检测血清总IgE测定：标记技83I型超敏反应检验：血清IgE检测血清特异性IgE检测：针对特异性变应原的IgE83I型超敏反应检验：血清IgE检测血清特异性IgE检测：针84II型超敏反应的检验：Coombs试验自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病、系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤。正常红细胞(rh阳性的o型红细胞)84II型超敏反应的检验：Coombs试验自身免疫性溶血性贫85II型超敏反应的检验：免疫组化技术1、特异性强

抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示。2、敏感性高

ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合。3、定位准确、形态与功能相结合

通过抗原抗体反应及呈色反应，可准确定位，进行形态与功能相结合的研究。85II型超敏反应的检验：免疫组化技术1、特异性强

抗原与86Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测PEG比浊法：选择性沉淀免疫复合物。简便敏感、特异性差、影响因素多。86Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测87Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测C1q固相法：C1q—重链CH2补体结合点抗C3-CIC-ELISA：胶固素结合试验：单克隆RF固相抑制试验：87Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测88Ⅲ型超敏反应的检验组织固定免疫复合物检测免疫组化技术抗人IgG、抗人C388Ⅲ型超敏反应的检验组织固定免疫复合物检测89IV型超敏反应的检验结核菌素实验（皮内试验）结核菌素皮试OT、PPD“+”感染过结核“-”可基本排除结核假阴性：播散性结核、麻疹、淋巴瘤、细胞免疫功能缺陷假阳性：非典型分枝杆菌89IV型超敏反应的检验结核菌素实验（皮内试验）90五自身免疫性疾病诊断机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而导致的疾病状态自身免疫应答过分强烈，导致自身组织器官损伤或功能障碍自身抗体/自身反应性T细胞90五自身免疫性疾病诊断机体免疫系统对自身成分发生免疫应答91自身免疫病的基本特征高效价自身抗体和/或自身反应性T细胞组织器官损伤、功能障碍可复制出病理模型病情转归与自身免疫应答强度相关反复发作慢性迁延，糖皮质激素可缓解病因不清，女性易患，遗传倾向91自身免疫病的基本特征高效价自身抗体和/或自身反应性T细胞92自身免疫性疾病诊断自身抗体检测-抗核抗体自身抗体检测-类风湿因子淋巴细胞检测狼疮细胞试验免疫复合物、补体检测细胞因子检测92自身免疫性疾病诊断自身抗体检测-抗核抗体93自身抗体检测-抗核抗体自身抗体检测方法：间接免疫荧光法、ELISA、RIA、免疫印迹法抗各种核成分的抗体IgG为主SLE等多种自身免疫病93自身抗体检测-抗核抗体自身抗体检测方法：间接免疫荧光法、94自身抗体检测-抗核抗体抗DNA抗体：天然/双链、变性/单链间接免疫荧光法ELISARIA94自身抗体检测-抗核抗体抗DNA抗体：天然/双链、变性/单95自身抗体检测-抗核抗体抗ENA抗体：盐水可提取性核抗原的抗体。是抗小分子细胞核核糖核蛋白（snRNPs）和小分子细胞浆核糖核蛋白（scRNPs）的自身抗体，不含组蛋白。抗原进行SDS95自身抗体检测-抗核抗体抗ENA抗体：盐水可提取性核抗原的96自身抗体检测-抗核抗体抗ENA抗体：抗u1RNP：混合结缔组织病MCTD抗Sm、Rib：SLE抗SS-A、SS-B：干燥综合征SS抗Scl-70：硬皮病PSS抗Jo-1：多发性肌炎/皮肌炎PM/DM96自身抗体检测-抗核抗体抗ENA抗体：97自身抗体检测-类风湿因子抗变性IgGFc自身抗体。并非RA特异抗体ELISA约90%（RA）患者RF阳性。IgA-RF与骨质破坏有关，早期IgA-RF升高常提示病情严重，预后不良；IgE-RF升高时已属晚期。冷球蛋白血症、进行性全身性硬化症、干燥综合征、SLE等患者都有较高阳性率；血管炎、肝病、慢性感染也可出现RF。97自身抗体检测-类风湿因子抗变性IgGFc自身抗体。并非98淋巴细胞亚群单克隆抗体将外周淋巴器官或外周血中T细胞分为CD4+和CD8+两个主要亚群。每个亚群按表面标志和功能分为不同亚群。Th1和Th2亚群

应用Th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，CD4阳性细胞群分为Th1和Th2。Th1细胞合成IL-2/3、IFN-γ、TNF-α和GM-CSF，Th2合成TNF-α、IL-3/4/5/6/10/13、GM-CSF。98淋巴细胞亚群单克隆抗体将外周淋巴器官或外周血中T细胞分为99混合淋巴细胞反应自身混合淋巴细胞反应：外周血B细胞和单核细胞等非T细胞在体外培养时能诱导某些自身T细胞发生增殖反应，称为自身混合淋巴细胞反应。这一部分T细胞称为自身反应性T细胞。99混合淋巴细胞反应自身混合淋巴细胞反应：外周血B细胞和单核100免疫复合物、补体检测CIC增加，补体消耗，动态变化总补体CH50：50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算出每毫升血清中补体含量。以补体量作为横坐标，溶血百分数作为纵坐标，50%溶血周围近似直线。单一补体浓度疾病进展、疗效100免疫复合物、补体检测CIC增加，补体消耗，动态变化101细胞因子检测Th1、Th2平衡失调细胞因子是一类在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或多肽。淋巴因子、单核因子、各种生长因子等。作用：参与免疫应答与免疫调节;刺激造血功能。101细胞因子检测Th1、Th2平衡失调102ANA的检测方法间接免疫荧光法102ANA的检测方法间接免疫荧光法103检测方案103检测方案104检测方法同ANAELISA104检测方法同ANA105检测方法-免疫印迹法105检测方法-免疫印迹法106检测方法-RIA法γ计数器所测量放射性同位素的强度，用得较多的标记化合物是14C、3H、125I、131I。106检测方法-RIA法γ计数器所测量放射性同位素的强度，107类风湿因子测定方法胶乳凝集试验速率散射浊度法ELISA法107类风湿因子测定方法胶乳凝集试验108六移植免疫学108六移植免疫学109预防排斥反应的免疫学措施移植物预处理组织配型交叉配合试验免疫抑制免疫耐受109预防排斥反应的免疫学措施移植物预处理110移植物预处理灌洗：清除免疫细胞加入单克隆抗体、补体放射线照射110移植物预处理灌洗：清除免疫细胞111组织配型组织相容性程度越高，存活几率越大ABO血型必须相同或相容HLA相容：HLA-A、HLA-B、HLA-DR造血干洗胞移植：必须配合心肾肠移植：HLA-DR肝肺移植：主要ABO111组织配型组织相容性程度越高，存活几率越大112HLA112HLA113HLA配型113HLA配型114HLA配型Immunology,2ndedition.114HLA配型Immunology,2ndeditio115HLA分型结果115HLA分型结果116HLA配型Immunology,2ndedition.116HLA配型Immunology,2ndeditio117交叉配合试验淋巴细胞毒交叉配合试验，lymphocytecytotoxicitycrossmatching：检测受者体内抗供者淋巴细胞的细胞毒性抗体。117交叉配合试验淋巴细胞毒交叉配合试验，lymphocyt118预防免疫排斥措施1、寻求与受者MHC相配的供者组织或器官2、移植后的免疫监护3、正确合理选用免疫抑制疗法4、诱导对移植抗原的特异性耐受118预防免疫排斥措施1、寻求与受者MHC相配的供者组织或器119预防免疫排斥措施119预防免疫排斥措施120免疫抑制全身淋巴组织照射选择性淋巴组织照射：免疫抑制剂：化学性硫唑嘌呤+皮质类固醇环孢素A+皮质类固醇120免疫抑制全身淋巴组织照射选择性淋巴组织照射：免疫抑制剂121免疫抑制生物性免疫抑制剂—融合蛋白：生物性免疫抑制剂—反义寡核苷酸Immunology,2ndedition.121免疫抑制生物性免疫抑制剂—融合蛋白：Immunolog122免疫抑制天然药物雷公藤、冬虫夏草等122免疫抑制天然药物123预防免疫排斥措施诱导对移植抗原的特异性耐受对供者抗原的特异性无应答不用药、不感染、不排斥1多次输血2转基因（MHC）3微嵌合123预防免疫排斥措施诱导对移植抗原的特异性耐受124移植排斥反应的免疫学监测并无理想的免疫学实验能准确监测排斥反应及移植物功能丧失一供者特异性免疫反应监测二非供者特异性免疫学指标监测124移植排斥反应的免疫学监测并无理想的免疫学实验能准确监测125七临床免疫学检验的自动化早期如免疫扩散、免疫电泳、血凝试验、补体结合等70年代初，开始有自动检测系统，激光光源，固定波长，灵敏度低，2—3小时70年代未，速率比浊，几十秒自动化免疫分析系统飞速发展免疫化学可以纳入临床化学检验范畴基础是抗原抗体的结合，高特异性；利用标记技术而将信号放大，高灵敏度125七临床免疫学检验的自动化早期如免疫扩散、免疫电泳、血126七临床免疫学检验的自动化免疫比浊分析技术化学发光、电发光分析技术荧光免疫分析技术放射免疫分析技术酶免疫分析技术流式细胞术126七临床免疫学检验的自动化免疫比浊分析技术127免疫比浊利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方法准确快速，已成为免疫诊断技术中重要的检测手段比浊法与比色法127免疫比浊利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方128预反应阶段5ul样本抗原过剩区阈值信号反应阶段45ul样本7.5秒2分钟6分钟（2+4分钟）定时散射比浊反应曲线图抗原不过量抗原过量128预反应阶段抗原过剩区阈值信号反应阶段7.129免疫透射比浊基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度与正前方夹角为0℃，保持抗体过量，形成可溶性AG-AB复合物，使介质浊度发生改变。实验要求：选择亲和力高的抗体，抗原抗体复合物要大、数量要多，反应时间充分。129免疫透射比浊基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度130单色器透射比浊计散射比浊计散射比浊和透射比浊的区别示意图θ透射光散射光散射光130单色器透散射散射比浊和透射比浊的区别示意图θ透射光散射131胶乳浊度测定法131胶乳浊度测定法132自动免疫浊度分析仪校准程序，使仪器处于正常的工作状态定标程序，保证检测结果的准确性自动控制，保证实施实验条件中的抗原抗体反应体系要求自动系统，障碍的检测和预警。132自动免疫浊度分析仪校准程序，使仪器处于正常的工作状态133自动化免疫仪器种类免疫比浊分析技术化学发光、电发光分析技术荧光免疫分析技术放射免疫分析技术酶免疫分析技术流式细胞术133自动化免疫仪器种类免疫比浊分析技术134化学发光自动免疫分析化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射现象基本原理：标记在抗原或抗体上的发光物质在碱性介质中氧化时产生激发态中间体，中间体回基态产生辐射，多余能量发射光子，产生发光现象，对光信号进行接收转化，可得检测物浓度134化学发光自动免疫分析化学发光是指在化学反应过程中产生光135化学发光自动免疫分析类型电化学发光免疫分析（ECLIA）电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括电化学和化学发光，应用“亲和素-生物素”放大系统，灵敏度大大提高双抗体夹心法135化学发光自动免疫分析类型电化学发光免疫分析（ECLIA136双抗体夹心形成生物素与亲和素结合磁珠吸引吸附电极表面启动电化学反应撤消磁场冲洗磁珠136双抗体夹心形成生物素与亲和素结合磁珠吸引吸附电极表面启137临床应用激素肿瘤标记物内分泌功能传染性疾病其它如VB12、叶酸、铁蛋白、肌钙蛋白、肌红蛋白、酶、脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。

137临床应用激素138自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术化学发光、电发光分析技术荧光免疫分析技术放射免疫分析技术酶免疫分析技术流式细胞术138自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术139荧光免疫自动化利用荧光物质标记抗原抗体的检测方法免疫反应、荧光及计算机技术联合应用时间分辨荧光免疫和荧光偏振免疫经单一平面的蓝偏振光照射后，吸收光能跃入激发态，随后回复至基态，并发出单一平面的偏振荧光。139荧光免疫自动化利用荧光物质标记抗原抗体的检测方法经单一140荧光免疫自动化时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）：AG-AB结合，荧光物质（镧氏元素铕螯合物）发长寿命荧光，利用延迟时间来消除非特异性的荧光干扰。140荧光免疫自动化时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）：AG141荧光免疫自动化荧光偏振免疫测定：以小分子物质与大分子物质的旋转差异而使它们对偏振光的吸收不同为依据检测小分子药物141荧光免疫自动化荧光偏振免疫测定：以小分子物质与大分子物142自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术化学发光、电发光分析技术荧光免疫分析技术放射免疫分析技术酶免疫分析技术流式细胞术142自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术143流式细胞仪流式细胞仪（FCM）是以激光为光源，检测生物学颗粒理化性质的仪器生物学颗粒包括免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细胞、染色体、真核细胞等理化性质则为细胞大小、形状、胞浆颗粒、DNA含量、酶活性等143流式细胞仪流式细胞仪（FCM）是以激光为光源，检测生物144流式细胞仪FCM综合了激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学及计算机技术，广泛应用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、病理学、遗传学、临床检验学等144流式细胞仪FCM综合了激光技术、电子技术、流体力学、细145145思考题分析自身免疫性疾病的特征如何确定候选肿瘤标志物的检测参考值设计实验证实某血清蛋白质与移植排斥有关病毒性肝炎的免疫学检测和分子生物学检测特点HIV感染的监测思考题分析自身免疫性疾病的特征147临床免疫学实验诊断概述感染性疾病免疫学诊断肿瘤免疫学诊断免疫增殖和免疫缺陷病诊断超敏反应性疾病免疫学诊断自身免疫性疾病诊断移植免疫学临床免疫学检验的自动化147临床免疫学实验诊断概述目的要求病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义肿瘤标志物的检测特征及其意义自身免疫性疾病的特点和主要指标酶联免疫吸附试验的原理，方法酶免疫组化技术概念、过程及应用。沉淀试验、凝集试验和标记技术原理细胞因子的检测及临床应用T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法移植排斥反应的免疫学监测外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测目的要求病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义临床免疫学实验诊断实验诊断学临床免疫学实验诊断临床免疫学实验诊断150临床免疫学实验诊断概述感染性疾病免疫学诊断肿瘤免疫学诊断免疫增殖和免疫缺陷病诊断超敏反应性疾病免疫学诊断自身免疫性疾病诊断移植免疫学临床免疫学检验的自动化3临床免疫学实验诊断概述临床免疫学与免疫检验免疫检验可分为两部分：一部分为利用免疫检测原理与技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞粘附分子等免疫相关物质；另一部分是利用免疫检测原理与技术检测体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。临床免疫学与免疫检验免疫检验可分为两部分：免疫学技术发展史年代学者贡献1894J.Bordet补体与溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特异凝集反应1896G.Widal,A.Sicad肥达试验1897R.Kraus沉淀试验1900J.Bordet,O.Gengou补体结合反应1900K.Landsteiner人类ABO血型及其抗体1906A.Wassermann梅毒补体结合反应1935M.Heidelberger,F.Kendall纯化抗体,定量沉淀反应1941A.Coons免疫荧光标记1946J.Oudin凝胶内沉淀反应1948O.Ouchterlony,S.Elek双扩散沉淀反应1953P.Grabar,C.Williams免疫电泳分析,Ig多样性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫标记1966S.Avrames,J.Uriel,etal酶标免疫技术1975G.Kohler,C.Milstein杂交瘤技术与单克隆抗体免疫学技术发展史年代学者贡献1894J.Bordet补体与发展进程的主要阶段自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应）加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术）标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反应过程标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合发展进程的主要阶段自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝免疫检验涉及的主要技术 放射免疫技术 化学发光免疫技术 荧光免疫技术 流式细胞免疫技术 酶联免疫技术 免疫印迹技术 透/散射免疫技术

单克隆抗体技术免疫检验涉及的主要技术 放射免疫技术 化学发光免疫技155概述：凝集反应8概述：凝集反应156单向琼脂扩散试验9单向琼脂扩散试验157测吸光度计算抗原或抗体的含量抗体抗原免疫复合物的浓度与透射光的衰减呈正相关免疫比浊法原理10测吸光度计算抗原或抗体的含量抗体抗原免疫复合物的浓度与透158概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术。免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检测技术等。特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、定位。概述：标记免疫技术11概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗159免疫荧光技术12免疫荧光技术160酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)13酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)161斑点金免疫渗滤试验ADCB阴性（未怀孕）加尿样除去滤器加胶体金标记抗体加洗涤液14斑点金免疫渗滤试验ADCB阴性（未怀孕）加尿样除去滤器加化学发光/电化学发光技术化学发光/电化学发光技术163免疫印迹法图解SDS裂解病毒聚丙酰胺凝胶电泳-+95684512KD电转印至NC膜上置待测血清中，漂洗；加酶标抗抗体，漂洗；加底物显色1204124KD16免疫印迹法图解SDS裂解病毒聚丙酰胺凝胶电泳-+临床应用临床应用165一感染性疾病免疫学诊断（一）病毒性肝炎（二）细菌感染（三）病毒感染（四）真菌感染（五）寄生虫感染（六）其他18一感染性疾病免疫学诊断（一）病毒性肝炎166肝炎甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎19肝炎甲型肝炎乙型肝炎167甲型肝炎免疫学检测抗体检测IgM型：常用IgM抗体捕捉ELISA检测法IgG型：双份血清，用于流行病学调查、既往感染或疫苗效果评价抗原检测ELISA夹心法难以常规开展20甲型肝炎免疫学检测抗体检测168实验室检查蛋白质代谢功能检查胆红素代谢检查常用的血清酶及同工酶检查肝纤维化常用标志物检测21实验室检查蛋白质代谢功能检查169HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc结果分析+----HBV感染或无症状携带者++---急性或慢性乙型肝炎，或无症状携带者++--+急性或慢性乙型肝炎（传染性强，“大三阳”）+--++急性感染趋向恢复（“小三阳”）--+++既往感染恢复期--++-既往感染恢复期----+既往感染或“窗口期”--+--既往感染或接种过疫苗乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测结果分析22HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc结果分170丙型肝炎免疫学检测免疫学：筛选试验ELISA、放射免疫法抗HCVIgG或IgM。抗HCVIgM早期诊断。确证免疫印迹法23丙型肝炎免疫学检测免疫学：筛选试验ELISA、放射免171丁型肝炎免疫学检测1）HDV抗原2）抗HDVIgM3）抗HDV

24丁型肝炎免疫学检测1）HDV抗原2）抗HDVIgM172戊型肝炎免疫学检测抗体检测IgM型：诊断指标，ELISA法IgG型：双份血清，流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价病毒抗原25戊型肝炎免疫学检测抗体检测173（二）细菌感染免疫学诊断人感染病原体产生特异性抗体可持续一段时间，→现症诊断，疾病追溯。1.血清抗链球菌溶血素“O”试验：A链近期感染，活动性风湿热、风湿性关节炎、心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等26（二）细菌感染免疫学诊断人感染病原体产生特异性抗体可持续174（二）细菌感染免疫学诊断2.伤寒副伤寒沙门菌IgM抗体：ELISA法阴性或滴度＜1:20；IgM抗体早期诊断价值。3.伤寒副伤寒沙门菌可溶性抗原测定：乳胶凝集法为阴性。确诊伤寒沙门菌感染。4.结核分枝杆菌抗体测定：胶体金或ELISA法检测抗体阴性。结核分枝杆菌感染。27（二）细菌感染免疫学诊断2.伤寒副伤寒沙门菌IgM抗体：175（三）病毒感染免疫学诊断TORCH：弓形虫，风疹病毒，巨细胞病毒，单纯疱疹病毒ⅠⅡ型抗体检测早孕时胎儿先天性风疹感染，新生儿致残致畸率可达80％，损害五官神经系统IgM抗体出现均应做咨询。IgG抗体应注意滴度变化，滴度低且无变化为既往感染，双份血清滴度升高4倍以上。28（三）病毒感染免疫学诊断TORCH：弓形虫，风疹病毒，巨176（三）病毒感染免疫学诊断单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）致畸性、影响新生儿神经系统发育，IgM和IgG抗体的检测，IgM型为近期感染，IgG型多为既往感染。巨细胞病毒﹙CMV﹚造成神经系统及智力的障碍。EIA法测IgM了解近期感染，IgG流行病学调查。29（三）病毒感染免疫学诊断单纯疱疹病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）177（三）病毒感染免疫学诊断3嗜异性凝集—传染性单核细胞增多症EB病毒感染：感染后2周抗体效价达高峰，常＞1：56；3个月后消失；效价上升4倍以上；更有诊断价值。4严重急性呼吸综合征病毒抗体SARS冠状病毒。抗体阳性表明感染过，阴性到阳性血清转化，或急性期到恢复期抗体效价增高4倍以上，表明有近期感染。30（三）病毒感染免疫学诊断3嗜异性凝集—传染性单核细胞增多（三）病毒感染免疫学诊断（三）病毒感染免疫学诊断179（四）真菌感染免疫学诊断意义有限32（四）真菌感染免疫学诊断意义有限180（五）寄生虫感染免疫学诊断弓形虫抗体囊虫抗体测定：人和猪共患的寄生虫病。[参考值]①ELISA法：血清低于1：64为阴性；脑脊液低于1：8为阴性②间接血凝法：血清低于1：128为阴性；脑脊液低于1：8为阴性。[临床意义]IgG阳性见于囊虫病，可用作流行病学调查。33（五）寄生虫感染免疫学诊断弓形虫抗体181（六）其他感染免疫学诊断性传播疾病：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、淋球菌、HIV引起。1衣原体抗体测定沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病常见的病原体之一。①IgM阳性提示近期有CT感染，有利于早期诊断；②IgG在发病后6－8周出现，持续时间较长；提示曾有过CT感染34（六）其他感染免疫学诊断性传播疾病：衣原体、支原体、梅毒182（六）其他感染免疫学诊断2支原体血清学检测：肺炎支原体、解脲人原体、人型支原体和生殖道支原体。单份血清效价＞1：64－128者或双份血清有4倍以上增长者，有诊断意义。3梅毒螺旋体抗体测定梅毒螺旋体反应素试验敏感性高；定性试验阳性的情况下，必须进行确诊试验，若阳性可确诊梅毒。4淋球菌血清学测定35（六）其他感染免疫学诊断2支原体血清学检测：肺炎支原体183二肿瘤免疫学诊断血清肿瘤标志物检测细胞表面肿瘤标志物检测患者免疫功能状态评估临床意义：①早期诊断和发现肿瘤；②提示肿瘤发生的部位和组织来源；③判别肿瘤恶性程度；④监测临床治疗效果；⑤监测肿瘤复发。36二肿瘤免疫学诊断血清肿瘤标志物检测18437185肿瘤标志物肿瘤组织产生的、可反映肿瘤自身存在的化学物质。大分子蛋白质(包括肽类、激素和酶)，小分子脂类和氨基酸衍生物。38肿瘤标志物肿瘤组织产生的、可反映肿瘤自身存在的化学物质。186肿瘤标志物标志物的多样性同一肿瘤可有多种标志物。联合检测标志物定位相对特异性同一标志物在多种肿瘤中存在。标志物在某些良性疾病中，一过性升高。（动态诊断）标志物的多变性随病情发展而升高随治疗见效而下降随复发转移再升高（动态随访）39肿瘤标志物标志物的多样性187肿瘤标志物细胞肿瘤标志物：位于细胞中的物质或抗原，如激素受体、白血病表型、分子基因等。体液肿瘤标志物：病理情况下，浓度增加时可在血液、尿液或其他体液中测得的物质，如AFP、CA19-9、CEA、CA15-3等。40肿瘤标志物细胞肿瘤标志物：188肿瘤标志物酶类激素类癌胚抗原类糖类抗原41肿瘤标志物酶类189肿瘤标志物ROC曲线假阴性率是指将患者错误地判定为无病的比例（即1-灵敏度）。假阳性率＝1－特异度。42肿瘤标志物ROC曲线假阴性率是指将患者错误地判定为无病的190血清肿瘤标志物检测甲胎蛋白属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期AFP由卵黄囊和肝脏产生，成人肝脏只产生微量AFP。肝细胞癌、卵黄囊瘤、胚胎性癌的肿瘤标志。妊娠/良性肝病43血清肿瘤标志物检测甲胎蛋白属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期AFP191血清肿瘤标志物检测CEA：胃肠道恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌等广谱诊断、监测、预后、疗效评价大分子糖蛋白，属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期由肝、胃肠及胰合成。肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等都可见血清CEA水平升高。作为消化道癌瘤的标志。44血清肿瘤标志物检测CEA：胃肠道恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌等192血清肿瘤标志物检测PSA：前列腺癌/前列腺增生监测疗效、判断预后50岁以上男性每年普查1次45血清肿瘤标志物检测PSA：前列腺癌/前列腺增生193血清肿瘤标志物检测PAP前列腺酸性磷酸酶：前列腺癌诊断、疗效、预后监测酸性磷酸酶可来自正常前列腺细胞，亦可来自癌细胞。血清前列腺酸性磷酸酶(PSAP)的监测在早期前列腺癌的诊断、前列腺癌病情的监测、鉴别诊断方面都有帮助。46血清肿瘤标志物检测PAP前列腺酸性磷酸酶：194神经原特异性烯醇化酶（NSE）同功酶类肿瘤标志物，小细胞肺癌、神经母细胞瘤和神经内分泌肿瘤及脑损伤时升高。待测标本绝对禁止溶血。NSE高预示生存期短，下降是疗效良好标志。47神经原特异性烯醇化酶（NSE）同功酶类肿瘤标志物，小细胞195激素类肿瘤标志物肺癌：NSE、CYFRA21-1、CEA乳腺癌：CA153、CEA肝癌：AFP、AFU、CEA、AKP同工酶胰腺癌：CA242、CA199、CA50卵巢癌：CA125、CEA、CA199、HCG联合应用可大大提高检出的灵敏度48激素类肿瘤标志物肺癌：NSE、CYFRA21-1、CEA196血清肿瘤标志物检测糖类抗原标志物是由肿瘤细胞分泌的或者是肿瘤细胞表面的抗原。针对这些抗原的单克隆抗体已成为临床上较为有用的肿瘤标志物，比天然分泌的标志物（如酶和激素）更敏感。49血清肿瘤标志物检测糖类抗原标志物是由肿瘤细胞分泌的或者是197血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA19-9：消化道恶性肿瘤胰腺癌、肝胆系统癌、胃癌和大肠癌，特别是胰腺癌。糖链抗原CA125：卵巢癌是卵巢癌和子宫内膜癌的肿瘤标志物50血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA19-9：消化道恶性肿瘤198血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA50：胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌。非特异性广谱肿瘤标志物。糖链抗原CA15-3：乳腺癌诊断、术后监测乳腺癌患者30-50%增高，转移者增高达80%；51血清肿瘤标志物检测糖链抗原CA50：胰腺癌、结肠直肠癌、199血清肿瘤标志物检测方法：酶免、荧光、放射意义：早期诊断、鉴别良性恶性、发生部位和程度、监测疗效、预防复发52血清肿瘤标志物检测方法：酶免、荧光、放射200血清肿瘤标志物检测方法：荧光放射53血清肿瘤标志物检测方法：荧光放射201细胞表面肿瘤标志物检测免疫组化、流式细胞术54细胞表面肿瘤标志物检测免疫组化、流式细胞术202患者免疫状态评估T细胞及亚群NK细胞吞噬细胞功能抗体、补体、细胞因子水平55患者免疫状态评估T细胞及亚群203三免疫增殖和免疫缺陷病诊断免疫器官、免疫组织、免疫细胞异常增殖引起的机体病理损伤。淋巴系统异常增殖所引起的疾病。先天遗传因素或后天因素造成的免疫系统发育、分化、代谢或相互调节的不同环节发生障碍，导致免疫功能低下或缺失，临床表现以感染为主的一组综合征。56三免疫增殖和免疫缺陷病诊断免疫器官、免疫组织、免疫细胞204单克隆免疫球蛋白病诊断对免疫球蛋白异常增殖病的检测，其目的是早期发现疾病、监控病情和判断预后。57单克隆免疫球蛋白病诊断对免疫球蛋白异常增殖病的检测，其目205单克隆免疫球蛋白病诊断血清蛋白区带电泳免疫电泳免疫固定电泳血清免疫球蛋白定量免疫球蛋白轻链型筛选本周蛋白检测冷球蛋白检测58单克隆免疫球蛋白病诊断血清蛋白区带电泳206血清蛋白区带电泳测定M蛋白的一种定性实验，常采用醋酸纤维素膜和琼脂糖电泳两种方法。M蛋白在电泳时出现于～区带中，不同类型的M蛋白的电泳后所处位置略有不同59血清蛋白区带电泳测定M蛋白的一种定性实验，常采用醋酸纤维207血清免疫球蛋白定量病人IgGIgA

IgM

KAP

LAM

K/L（g/l)姓名8～150.85～3.00.5～2.51.72～3.830.81～1.921.47～2.95A46.2↑0.23↓0.17↓0.26↓16.80↑0.02↓B7.36↓0.31↓26.90↑5.11↑1.025.01↑

C1.78↓49.50↑0.17↓18.20↑0.18↓101.11↑D2.77↓0.23↓0.22↓0.72↓0.950.76↓E4.91↓0.34↓0.29↓1.02↓2.00↑0.51↓F38.70↑1.932.007.34↑4.08↑1.8060血清免疫球蛋白定量病人IgGIgA208肾损伤型特点：选择性蛋白丢失

总蛋白和白蛋白均严重降低

α2-球蛋白显著升高

β-球蛋白降低/正常/升高

γ-球蛋白正常/降低

常见于肾病综合征61肾损伤型特点：选择性蛋白丢失

总蛋白和白蛋白均严重降低

209肝损伤型特点：白蛋白、α1、α2、β-球蛋白合成减少，γ-球蛋白合成增加。

总蛋白降低/正常

白蛋白严重降低

α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白降低

γ-球蛋白升高

常见于重症肝炎、肝硬化、肝癌

62肝损伤型特点：白蛋白、α1、α2、β-球蛋白合成减少，210急性感染与应激状态特点：α1糖蛋白等急性时相反应蛋白增加。

Alb减少或正常，

α1、α2-球蛋白增高，

γ-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。63急性感染与应激状态特点：α1糖蛋白等急性时相反应蛋白增加211慢性炎症型特点：γ-球蛋白显著升高

总蛋白降低/正常/升高

白蛋白降低

α1-球蛋白、α2-球蛋白升高

β-球蛋白升高/降低

γ-球蛋白显著升高常见慢性感染、风湿病及其它自身免疫病

64慢性炎症型特点：γ-球蛋白显著升高

总蛋白降低/正常/升212低蛋白血症型特点：

总蛋白和白蛋白明显减低

α1-球蛋白正常/升高

α2-球蛋白正常/降低

β-球蛋白降低

γ-球蛋白正常/降低

常见于营养不良、吸收不良、非选择性蛋白丢失

65低蛋白血症型特点：

总蛋白和白蛋白明显减低

α1-球蛋白213单克隆高γ-球蛋白血症型特点：α2、β或γ区出现单克隆条带，正常免疫球蛋白带减弱或消失。

见于良、恶性M蛋白病、多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、半分子病、淋巴瘤、某些白血病。66单克隆高γ-球蛋白血症型特点：α2、β或γ区出现单克隆条214免疫缺陷病实验诊断B细胞缺陷病检测血清Ig测定同种血型凝集素的测定：ABO血型抗体特异性抗体产生能力测定噬菌体试验B细胞表面膜Ig检测-免疫组化CD抗原检测67免疫缺陷病实验诊断B细胞缺陷病检测215免疫缺陷病实验诊断T细胞缺陷病的检测皮肤试验：迟发型超敏反应DTH能力T细胞及其亚群检测：CD标记T细胞功能检测：PHA刺激淋巴细胞增殖转化结核菌素试验68免疫缺陷病实验诊断T细胞缺陷病的检测结核菌素试验216MTT比色MTT是一种噻唑盐，胞内线粒体琥珀酸脱氢酶底物反应后呈蓝黑色甲潜颗粒+盐酸异丙醇溶（570nm）。69MTT比色MTT是一种噻唑盐，胞内线粒体琥珀酸脱氢酶底物217免疫缺陷病实验诊断吞噬细胞缺陷病检测白细胞计数趋化功能检测吞噬和杀伤试验NBT还原试验黏附分子检测70免疫缺陷病实验诊断吞噬细胞缺陷病检测218免疫缺陷病实验诊断补体系统缺陷病检测：C1INH基因诊断71免疫缺陷病实验诊断补体系统缺陷病检测：C1INH219免疫缺陷病实验诊断HIV检测病毒标志检测：分离病毒组分免疫标志检测非特异性检测：T细胞亚群等72免疫缺陷病实验诊断HIV检测220免疫缺陷病实验诊断73免疫缺陷病实验诊断221免疫缺陷病实验诊断①初筛（ELISA、IFA、RIA）②确证：免疫印迹试验,至少同时测两种抗体(P24、gp120)阳性,方可判断HIV感染74免疫缺陷病实验诊断①初筛（ELISA、IFA、RIA）222样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送确认重复检测阴性报告均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种原理初筛试剂选用初筛试剂阴性反应HIV抗体初筛检测流程图75样本初筛检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送确认重复检测223HIV抗体确认实验结果a强阳性对照（HIV-1和HIV-2）b弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照d典型的HIV-2血清阳性反应abcdgp160gp120p66p55p51gp41p39p31P24p17血清对照HIV-2特异带76HIV抗体确认实验结果a强阳性对照（HIV-1和HIV224初筛检测阳性标本两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性反应一阴一阳阳性反应免疫印迹法WB-1/2混合型复核报告HIV-2血清学阳性反应,必要时测核酸阴性反应可疑反应HIV-2阳性反应免疫印迹法WB-2阴性报告出现gp36阴性反应可疑反应HIV-1阳性报告HIV-1阳性反应每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体确认实验流程图77初筛检测阳性标本两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性反应一阴225CD4+T细胞绝对数量78CD4+T细胞绝对数量226体液免疫检测1.单向免疫扩散(SRID).2.透射比浊、散射比浊.3.ELISA，RIA(IgD,IgE).4.免疫电泳.79体液免疫检测1.单向免疫扩散(SRID).227细胞免疫检测1.皮肤试验2.T细胞及其亚群的检测3.E玫瑰花结试验4.T细胞体外免疫功能检测（1）淋巴细胞增殖反应试验（2）T细胞分泌产物功能的检测80细胞免疫检测1.皮肤试验228四超敏反应性疾病免疫学诊断81四超敏反应性疾病免疫学诊断229I型超敏反应检验：血清IgE检测血清总IgE测定：标记技术ELISA放射免疫吸附试验化学发光法IgE升高：过敏性哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、IgE骨髓瘤等超敏反应≠IgE升高82I型超敏反应检验：血清IgE检测血清总IgE测定：标记技230I型超敏反应检验：血清IgE检测血清特异性IgE检测：针对特异性变应原的IgE83I型超敏反应检验：血清IgE检测血清特异性IgE检测：针231II型超敏反应的检验：Coombs试验自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病、系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤。正常红细胞(rh阳性的o型红细胞)84II型超敏反应的检验：Coombs试验自身免疫性溶血性贫232II型超敏反应的检验：免疫组化技术1、特异性强

抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示。2、敏感性高

ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合。3、定位准确、形态与功能相结合

通过抗原抗体反应及呈色反应，可准确定位，进行形态与功能相结合的研究。85II型超敏反应的检验：免疫组化技术1、特异性强

抗原与233Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测PEG比浊法：选择性沉淀免疫复合物。简便敏感、特异性差、影响因素多。86Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测234Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测C1q固相法：C1q—重链CH2补体结合点抗C3-CIC-ELISA：胶固素结合试验：单克隆RF固相抑制试验：87Ⅲ型超敏反应的检验：CIC检测循环免疫复合物检测235Ⅲ型超敏反应的检验组织固定免疫复合物检测免疫组化技术抗人IgG、抗人C388Ⅲ型超敏反应的检验组织固定免疫复合物检测236IV型超敏反应的检验结核菌素实验（皮内试验）结核菌素皮试OT、PPD“+”感染过结核“-”可基本排除结核假阴性：播散性结核、麻疹、淋巴瘤、细胞免疫功能缺陷假阳性：非典型分枝杆菌89IV型超敏反应的检验结核菌素实验（皮内试验）237五自身免疫性疾病诊断机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而导致的疾病状态自身免疫应答过分强烈，导致自身组织器官损伤或功能障碍自身抗体/自身反应性T细胞90五自身免疫性疾病诊断机体免疫系统对自身成分发生免疫应答238自身免疫病的基本特征高效价自身抗体和/或自身反应性T细胞组织器官损伤、功能障碍可复制出病理模型病情转归与自身免疫应答强度相关反复发作慢性迁延，糖皮质激素可缓解病因不清，女性易患，遗传倾向91自身免疫病的基本特征高效价自身抗体和/或自身反应性T细胞239自身免疫性疾病诊断自身抗体检测-抗核抗体自身抗体检测-类风湿因子淋巴细胞检测狼疮细胞试验免疫复合物、补体检测细胞因子检测92自身免疫性疾病诊断自身抗体检测-抗核抗体240自身抗体检测-抗核抗体自身抗体检测方法：间接免疫荧光法、ELISA、RIA、免疫印迹法抗各种核成分的抗体IgG为主SLE等多种自身免疫病93自身抗体检测-抗核抗体自身抗体检测方法：间接免疫荧光法、241自身抗体检测-抗核抗体抗DNA抗体：天然/双链、变性/单链间接免疫荧光法ELISARIA9