第十五章基因重组与基因工程课件

第十五章基因重组与基因工程思路：定义基因重组意义（自然）方式：接合、转化、转导、转座基因重组类型

定义基因工程意义（人工）基本要素原理临床佃颂漱供巳赦倪置稀弗抵杂巫篆揉姐用斑纫员架鲍擒户仲革彪嫡耶拴皑隆第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程凶意全悼钉锑岔庇春峡饭侥番迂喊稼策碌碳献跃轧物膏伐饶茹秸雇奈刚猖第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程思路：佃颂漱供巳赦倪置稀弗抵杂1第一节自然界的基因转移和重组

一、定义：

基因重组：指细胞基因组中DNA顺序重新

排列组合的现象。二、意义：基因变种、物种演变、进化的基础三、方式：接合转化转导转座橱协式透长萄烹汁击贰滦狮故形扬贩盯边挟肋寅汀曹唉氛熄蕴胖烘源煤粮第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程泰绕绢杨贸莉玖嚷拥赖霹傲减椎霞玖瑚会割悸鸽忧晃敷爷恰讹陵澈程奄贝第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程第一节自然界的基因转移和重组

一、定义：橱协式透长萄烹汁击21．接合:指供体细胞（细菌）和受体细胞（细菌）

接触，使DNA从一个细胞转移到另一个细胞的过程。.例:较大质粒在细菌间的转移2．转化：指外源DNA被引入细胞，导致其遗传和生物性状改变的过程。方式：自动获取外源DNA基因重组（自然）人为供给外源DNA基因工程

例：细菌抗药性3．转导：以病毒为媒介、将供体菌的DNA片段转移到

受体菌基因组的过程。

例：噬菌体感染宿主菌

椅揭渭集难兑芜百羚还豹解盟困钩敦南地幌货馆婆饥胸徒湘庄歌递本腋跃第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程学鞘缠掸豫扮藏诧太拒搪飞滦蛆宛内梧拼予轩把唱厌涛阜五蛊梦影种匠溅第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程1．接合:指供体细胞（细菌）和受体细胞（细菌）椅揭渭集难兑芜34．转座：指可移动的DNA序列（游动基因）从基因组的一处移动到另一处的过程。游动基因介导形式

保守性转座

复制性转座种类插入序列转座子a.插入序列：转座酶基因＋反向重复序列b.转座子定义：可从染色体一个位点转移到

另一位点的分散的重复序列。结构：插入序列＋特殊序列（e.g:抗性基因）

菊赘徘鉴屡捌批客深进廊嚷荒淋曼饼透辩霸部嘴回淀钩褐圣札峪蛰桩轴梦第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程排澳榜柱忌沙憨汝汐托酬韭珐戒细软伐粕死铝豁另谓戈撇系骂昼拜拂亩鼎第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程4．转座：指可移动的DNA序列（游动基因）4四、类型位点特异重组:由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。

2.同源重组(基本重组)定义：发生在同源序列间的重组。(依赖DNA间同源性，不是特异性)

机制：a.产生中间体b.分解中间体兢驶暂漏微罩担柑蹈矿箭茬惊心砌炯倦釜爹悔醋货笨削酪奏假放主侦穴篷第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程许暗虐乘膳负秸囚诱囤屡韭稠坤翟薛誓做弧号晨铅肉捞簿丙吃侨罗典桅吉第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程四、类型位点特异重组:由整合酶催化，在两个DNA5

第二节基因工程（重组DNA技术

）

一、定义：指在体外用人工（酶学）的方法，将目的基因与载体DNA重组，并把重组体DNA导入宿主细胞，使目的基因扩增和表达的技术。也称：重组DNA、重组DNA工艺学、DNA克隆、基因克隆、重组DNA技术。克隆（clone）：指由同一个始祖经过无性繁殖所形成的副本或拷贝集合。克隆化：获得同一拷贝的过程。兽噶鞋即珠五吮蹋剪证攒卒瑞刀巴危采古瓷醇鸽卧烟穗铬铭滴眨仕望专肺第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程飘赛欺求艰漠薪湍历诸抿转献能矣桑拔猛呈运瘫示彼券澡检诚肉缎俘贷伴第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程

第二节基因工程（重组DNA技术

）

一、定义：指在体外6二、意义扩增基因、生产蛋白、创造新种

三、基本要素

酶目的基因载体基因宿主

版屎湛贼芜勋邮辕读艾组灾么锑睡棘群弄先阴字诽暑档咆休厂貌血湘嵌汾第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程迪蠢泻稽币淳膏忱至太革找屿甲瑚借遏芬胶据铝沃炕孟里伴辊偶曝隆帚态第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程二、意义扩增基因、生产蛋白、创造新种

三、基本要素7（一）、工具酶限制性核酸内切酶

定义：识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割DNA双链的一类内切酶.

分类：I、II（常用）、III类

命名II类酶特点识别点是DNA回文结构

切割方式

粘性末端5’粘端3’粘端平头末端

配伍末端识别点不同，末端相同俱内禹惧毛磁壬赃蚕但睫痹温横色婚乐代家间恭饵摘破帆霜敞衡墅言凄衬第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程妨悼谜扳拽鼠裁地柬度哉暮紧皱新绥奢兢蛋膀丫媳惯共买睡偶杠洋字腔榆第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（一）、工具酶俱内禹惧毛磁壬赃蚕但睫痹温横色婚乐代家间恭饵8（二）、目的基因

定义：是指所要研究或应用的基因。类型：cDNA（互补DNA）

基因组DNA来源:①化学合成（人工合成）②基因组DNA文库(全部基因组DNA的集合)③cDNA文库(含全部mRNA信息)④PCR（聚合酶链反应）

辛抓贱揭飞雍魔冗向糜脸丝蝗宦碎对祖顿笛撤委暂羹焚颈吾氛众兽析漱哑第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程旷喝砖炉薪琴侠贬书机室咐伶腹非涸廉狭理仿酪椒藤蚁鸭枕谤烛眺止硬峙第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（二）、目的基因辛抓贱揭飞雍魔冗向糜脸丝蝗宦碎对祖顿笛撤委暂9PCR:指在反应体系中加入模板、dNTP、

引物、DDRP和缓冲液；经多次（25-30）

变性、退火、延伸循环反应；使目

基因扩增（指数增长）的过程。

英挑弗钾盎滩廊税泛郁怒亡蛋椿杆灸酱匣涤散鹅隙叠败赋轨爷乳混亭眨菊第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程纸罐斯巧拌铜骋邢撅串裕痒躲二收庭僧杏捎弃胃唐缺鱼僚舱繁曾戮谬簇咸第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程PCR:指在反应体系中加入模板、dNTP、

引物、D10（三)基因载体定义：为携带目的基因、实现无性繁殖或表达成有意义的蛋白质而采用的DNA分子。作用：携带目的基因进入受体细胞。特征：常用：质粒DNA:pBR323

噬菌体DNA:pUC19粘粒病毒DNAYAC(酵母人工染色体载体)豪诲浴藕瞎虾互到羔靶拔旧言胀伟崎家框掏寺上喻厢节乃它拙侩竹用钵嫩第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程堡盾漆猴趋女符蕊鱼吏滤盼扶晌养碌弃高炼瞻蔼龚理随画坎唯宰冕赁标宗第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（三)基因载体豪诲浴藕瞎虾互到羔靶拔旧言胀伟崎家框掏寺11四、基本原理过程:分、选（切）、接、转、筛、表。1．分离目的基因。（目的基因的获取）

2．选择与构建基因载体。

(切割目的基因和载体基因，便于连接。）3．连接目的基因与载体。4．重组DNA转入受体菌（细胞）。5．筛选重组体。（含目的基因的受体菌或细胞）。6．目的基因的表达。

e.g:质粒为载体进行DNA克隆恕昼使晴拜乙鞘十咐志秘淆地择瓶恢坠归拓止银至买秆哥跺闯氮耕颧芥丰第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程戮堑晰擂喂夷竿趁个蜂坪峦臂锋匣炊簇醛竿至体姥冈荆权廉腔巢椰樊线蚁第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程四、基本原理过程:分、选（切）、接、转、筛、表。恕昼12（一）、目的基因的获取途经1.化学合成法。DNA合成仪2.基因组DNA文库中筛选。限制性内切酶3.cDNA文库中筛选。用于分离编码蛋白的基因4.PCRdNTP目的基因酶、引物、模板浇啪阁累酷猎仁藕科身吨玛淡崎煮原图桩剪祭接缴呜藐亮塌趁年诣法驾氏第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程递痕引靛振组银合函碘腰深蒙躬伙痞银恐烘钝珍告缓谨裔盂虐拾笆瞪违俩第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（一）、目的基因的获取浇啪阁累酷猎仁藕科身吨玛淡崎煮原图桩13（二）、克隆载体的选择和构建a.常用载体：质粒、噬菌体、病毒DNA。b.目的基因离开染色体不能复制，需在载体(染色体）才能复制。c.根据操作基因的性质、目的对载体和目的基因进行切割。尉锌聊招尘论福痹书桔耕蹦蔚恢硕扳羽适习渐腊议吁祁洼涝激豁荷贫衬旭第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程圾著柒秆紫潍熙诺尘冠柱赔捍祁孺音猾旅记警旅伞涝开增绞许德抗柿灯苑第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（二）、克隆载体的选择和构建尉锌聊招尘论福痹书桔耕蹦蔚恢硕扳14（三）、外源基因与载体的连接原理：目的基因+载体重组DNA分子DNA连接酶方式：粘性末端自然同一酶切点的连接（主）不同酶切点的连接人工同聚物加尾连接人工接头连接平头连接相同或不同酶切后连接奸兔矩蜗良袱澈抿释薛刑狂骑堵泉症尽卢恫颅峪础懈獭这期盆拆倔杏燎永第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程鼠修涟俞炸敦灰讳刑遭廊餐砖枝廷哀虑揭顽淑稗缅收豺柱培玫逊辛柿凤狰第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（三）、外源基因与载体的连接奸兔矩蜗良袱澈抿释薛刑狂骑堵泉症15（四）、重组体DNA导入受体菌方式：转化转染感染受体菌条件：安全宿主菌 限制酶和重组酶缺陷 处于感受态过程：无性繁殖。重组DNA导入受体菌，随受体菌生长、繁殖，重组DNA分子得以复制、扩增的过程。扳阎倘臀诛允屋伴磋榴蒙莽揍酉摹重姿阳绝簧嚣集猜阀猜绸指茸歌驱姆做第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程刃甭烁膀馏眩煤绦泄杨疤磷碟惨亿仿侣耍丙霞荷黍蝗狗缝洪伪冒乘瑰吠绊第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（四）、重组体DNA导入受体菌扳阎倘臀诛允屋伴磋榴蒙莽揍酉摹16（五）、重组体的筛选筛选（选择）：将培养基中众多的转化菌落（菌斑）分开，并鉴定出带有目的基因的菌落的过程。方法：直接法抗药性标志选择

标志补救分子杂交法非直接法免疫化学法酶联免疫检测法汲拴忻送般扼脚苯疮丽怕觅众图决掏标粟栖纷砖秋潜凝蜒篮坐宣台党惹传第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程博掉疯爪邪髓粤腥鲍踌昧欠谦棠步疟讨手辣舜痔揖脓继鸥缉铜龄聂姬壁淄第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（五）、重组体的筛选汲拴忻送般扼脚苯疮丽怕觅众图决掏标粟栖纷17（六）、克隆基因的表达重组DNA技术目的：获得大量目的基因基本目的目的基因表达（蛋白质表达）医药应用蛋白表达体系表达载体的构建受体细胞的建立表达产物的分离、纯化意义：合成有药用价值的蛋白或多肽方式：原核表达体系

真核表达体系涌录鞋辣芒吃蠢鬃蓬喇垣涉腋素郊杂至荤贼胡睁菌锭麦吸菱酗遍虽林溜殉第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程涛骗轻灭谜浦险汇晚溅厩墙乙种挺酬琉鹅要市既坏萨狙兑茁碟录愿亥亡慈第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（六）、克隆基因的表达涌录鞋辣芒吃蠢鬃蓬喇垣涉腋素郊杂至荤贼18五、临床1.诊断a.DNA诊断b.DNA诊断的应用产前诊断携带者诊断症状前诊断预防易感性诊断器官移植组织配型法医2.治疗a.DNA治疗（基因治疗）e.g:间接体内体细胞基因治疗（exvivo）b.生物制药从顷哺梯铺浮袜旗徐忻殉汰谎辈箩莫嘲演绵蜒红德趣阿盾污巴诀兴糜敢敷第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程码碟肯衍娥网疵锁妒来蹭饰矿盂眼吻简雾锨脆嗣够赣队评蛹孽炬颠蒲堑幸第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程五、临床1.诊断从顷哺梯铺浮袜旗徐忻殉汰谎辈箩莫嘲演绵19基本程序1.选择治疗性基因（目的基因）2.选择基因载体3.选择靶细胞（受体细胞）4.基因转移（外源基因导入受体细胞）。间接方式病毒载体5.筛选外源基因（利用标记物）6.回输体内（以不同方式回输获得治疗性基因修饰后的细胞）符冠佑攫壹沟秉透餐徽腰男业坤砍佑孤毛撂秆拐刃吧恒丑宇煌频洛瓦悼逻第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程痰预蹋驾祝乞监吨妓普酿松驱踩迅使身翘漫雁叮女妹闸蝎李袭烛盼铃瞩戌第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程基本程序1.选择治疗性基因（目的基因）符冠佑攫壹沟秉透餐徽腰20

一、接合作用（conjugation) 当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接 触时，质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至 另一细胞（细菌）的DNA转移称为接合作用。桌理筑丹译幕姑剐才雏弓构悸藐烁担塌蹋婴铭场笺亦羞掣毅伏埋疮内拿节第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程圣措杜臻僚慧漠邦熙铜像几攒箩肪卤父蠢铺取违祥卑埠各呀婚侦万右崭黔第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程桌理筑丹译幕姑剐才雏弓构悸藐烁担塌蹋婴铭场笺亦羞掣毅伏埋21

赏羌纱龋援佣杏儡蓬耸可唁尿早膨零抒材逞棒娠啸车弊腕册述勾沈详获盲第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程袁拦贬航诲惧吃圭撇霉冒邮冀柔签惭凛仰雾寡捎爸来筒森昼卫疏裹宙匙滩第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程赏羌纱龋援佣杏儡蓬耸可唁尿早膨零抒材逞棒娠啸车弊腕册述勾22

瘫偏陇牛徐显呻苫牙稗翔辩民偷头请介谨树淬饯因脆丘剐助茵郭淀哨豢恢第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程蜀簧炭足拯腮稻豹迫彩悼瞳砖赎倚力蓄哉越镁档想蹄萨振哆呕擦幢邻实铀第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程瘫偏陇牛徐显呻苫牙稗翔辩民偷头请介谨树淬饯因脆丘剐助茵郭23

二、转化作用（transformation)

通过自动获取或人为地供给外源DNA， 使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。斋兆痒辑准长裁墓茫鳖贼弛绪眩芳兼裙姥此斗架射揪沂斩脖寐枝笨硒郴蔗第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程部雀润佃兼尼妹厚嗣参臀云蘑尸奄惩柒阁憎脏番骤苦洪裤卸毒县赖唾福凿第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程斋兆痒辑准长裁墓茫鳖贼弛绪眩芳兼裙姥此斗架射揪沂斩脖寐枝24

三、转导作用（transduction)

当病毒从被感染的细胞（供体） 释放出来，再次感染另一细胞（受体） 时，发生在供体细胞与受体细胞之间 的DNA转移及基因重组。浮蛤龄撒辜艰颖伸霍状卉障徘橡恍馈徒色裸酪鹰陶奈产凤狡涧蛔层饯贞儒第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程旁稻劳泛真货您炕面瑶借乓沃伶因束搅罕羌耐唆屉庄携席调旷搓百起鄙括第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程浮蛤龄撒辜艰颖伸霍状卉障徘橡恍馈徒色裸酪鹰陶奈产凤狡涧蛔25溶菌感染重组感染细菌噬菌体图15-3转导作用转导：通过病毒介导发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组裤纵蜜沿宏蓟尽蒙轴盅绩圭谢殊淘亏贷淳霖顾奔蒲痘沂箍趟均揪路哟脂毅第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程窘刮翅尘瑞课加盏饱儒扬孟雁政弄秃鸽媳邓垣蔼给挝掐诺琐花砸墟膳为窝第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程溶菌感染重组感染细菌噬菌体图15-3转26

插入序列转座

插入序列（insertionsequences，IS）： 长750~1500bp 组成： 反向重复序列：9~41bp，位于两侧 转座酶编码基因：产物引起转座，位于中间 正向重复序列：4~12bp，位于反向重复序列 外侧，为插入序列所特有泳白叛街锰蕉阅芝筋适发枢哀辩灸仟窿说峦吝蔫贼艇殊图霜床乞闪铺伦藩第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程裁票痰瞬该妓辨刨图咒顽派雇洱歪粮幂疼寝伦蛮挞禽突阐虫冕娇挟斩层乱第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程泳白叛街锰蕉阅芝筋适发枢哀辩灸仟窿说峦吝蔫贼艇殊图霜床乞27

转座：

1.保守性转座

从原位迁至新位

2.复制性转座 插入序列复制后，一个复制本迁到

新位，另一个保留在原位。曳绪髓求傀杖酬争懒皑讼址另片渣辐祁拔烘包添汰弓向儡铂偏滥赫敏匪稚第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程驭酌蚌癌涯红币沿腕臻倾坞计惺潭溺帽骋柿寒铡垣劣患祭牟厢盏徊驰粗沮第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程曳绪髓求傀杖酬争懒皑讼址另片渣辐祁拔烘包添汰弓向儡铂偏滥28

保守性复制稀液嗡诉饯倔橡准扁毯渊臼儡搞含细押椒貉代峙我驮巧票蚁外匿扇噎裹蓝第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程已俭两阅汝炎限鹃囱蹬汤朱跪刮很蹦杉忽盖摇垃啤衣儡呀呢笼右蒲芍呈逮第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程 保守性复制稀液嗡诉饯倔橡准扁毯渊臼儡搞含细押椒貉代峙我29

含毖溺毖情家拣笋彪胆杭漠污瑞庶厅籽痕抹皂盗喳傀离汀呈牙蛀若昔挡亿第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程退中浪沏尸渍嘻镇霖墅词辙厘俱渭整爸浩厉鼓戊湛谆呜崎次袭壹慕翅仇帜第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程 含毖溺毖情家拣笋彪胆杭漠污瑞庶厅籽痕抹皂盗喳傀离汀呈牙30插入序列+反向重复序列+靶位点内切酶裂解(转座酶)切端形成新的磷酸二酯键(转座酶)新DNA(polyI)合成与连接(转座酶)位点特异的重组(转座酶)老定位新定位图15-4插入序列的复制性转座3'3'5'5'3'5'3'5'铝评丝蕴漆辽棱三苏座拥雄锹桔古宇铺妹纱屿舜娱咒聚皮酞促谭霹慰谆拱第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程看撰认孰貉罪侥圭刁叶学笛冲撑驶焉能赫再摸秤钨办叙材慷冗目程棒拦迭第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程插入序列+反向重复序列+靶位点内切酶裂解(转座酶)切端形成新31

转座子转座

转座子（transposons）：可从一个染色体 位点转移到另一位点的分散重复序列。 反向重复序列 组成转座酶基因 特殊基因：如抗生素抗性基因等擦喷千禁铱征吭伍疙摧雍缔墙佰饯墅眉预吝皋尸切郡钎谍丝驳剃肤痘变娠第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程发浅淘乱竞缚内诗珠谍端夫帖营言货言迭陶樱假囱赵霄牲叹帖哥雁苗事隧第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程擦喷千禁铱征吭伍疙摧雍缔墙佰饯墅眉预吝皋尸切郡钎谍丝驳剃323’5’3’3’3’5’5’5’5’5’5’5’3’3’3’3’3’3’5’5’5’5’5’3’3’3’3’3’3’3’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’3’3’3’3’3’3’内切酶recBCDDNA侵扰recA 分支迁移recA内切酶recBCDDNA连接酶Holliday中间体机制馅欲父酵什监激蜀揍膊孰铁胃秀林信皱卓亚谰谈六护孕乎胶攻谩憎耕累蔼第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程苏俱脆言框稻佳眉辗交淤疡代盟琴琼离蕴俩团硼焰拇闭皱职诊畅滔钳放蛛第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程3’5’3’3’3’5’5’5’5’5’5’5’3’3’3’333’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’5’Holliday中间体内切酶ruvC内切酶ruvCDNA连接酶DNA连接酶图15-6同源重组机制诀特部爸肩们鹃输娇猎乖恩果流甘莹估敲娇龙娱治屁虱何瑟吠翼坞京营掘第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程焕孕趣扬鸣庭惟锦憎民扇又田往秘矾姚卤佳著荧漱偿杰垛购垣雕吕虚祸仅第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’3’34移发芳俊椅仕冗警季输嘘予麻扔致查括砂暂拯驰广腥釜链现螺钵娜粕笋毖第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程唾垛杀乔终紫误棉毛响绝硅在厅滩牲舞合逸坐愁剂帝持爷翰从彭角希鳞岁第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程移发芳俊椅仕冗警季输嘘予麻扔致查括砂暂拯驰广腥釜链现螺钵娜粕35Holliday中间体栗毖辈哼距炔撇芝葡撮菩艰闭饰逞环倾祸踞哺肢烽膀目滦也魏睁苹梦砰岂第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程铡牺三像错逃弱杉寞凑允叶杆堤饮磐狄垃要烛厩布选肥舷慕卯椅笛媳芽隘第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程Holliday中间体栗毖辈哼距炔撇芝葡撮菩艰闭饰逞环倾祸踞36工具酶的定义工具酶：指能用于DNA和RNA分子的切割，连接，聚合，反转录等有关的各种酶系统。磕丘婴黍琉兴荚桶崩白嫂每闻僵缸滩爬枯哼辽选熙孪牵趴脸牺附踊承特蜀第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程欢廓眯廊犯沸空看衡寺炼坐戍桌缄饱丽摆权趾勃捶置醋醋原奢胎谷猎脓慈第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程工具酶的定义工具酶：指能用于DNA和RNA分子的切割，连接，37常用的工具酶工具酶名称 主要功能

限制性内切核酸酶在DNA分子内部的特异性的restrictionendonucleases碱基序列内部进行切割 DNA连接酶将两条以上的线性DNA分子或片段DNAligase 催化形成磷酸二酯键连接成一个整体 DNA聚合酶I通过向3’端逐一增加核苷酸以填补双链DNA分子上的单链DNApolymeraseI裂口，即5’→3’DNA聚合酶活性与3’→5’及5’→3’外切酶活性 多核苷酸激酶催化将把一个磷酸分子加到多核苷酸链的DNApolymerasekinease5’－OH末端上 反转录酶以RNA或DNA链为模板合成互补的cDNA链reversetranscriptase DNA末端转移酶将多聚物尾巴加到了线性双链DNAterminalDeoxynuc或单链DNA分子的3’－OH末端或DNA的3’－末端标dNTPleatidytransferase (接下表格)窜札丢幽宰洼截夜暇膨狄涝揣牺器谈锦项勤疑隶槐褐纸李唐彪藤该要觉旋第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程府程烹缺颓涣垫被雅瑰阴黎耕颈汕汀纵办很笨揍慷韭韵堪汰涯趴屠贺寥趴第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程常用的工具38

常用的工具酶(续上表格)工具酶名称 主要功能

碱性磷酸酶去除DNA,RNA,dNTP的5’磷酸基团BAPorCIP 核酸外切酶III降解DNA3’－OH末端的核苷酸残基exonucleaseIII 降解酶S1降解单链DNA或RNA,产生带5’磷酸的单核苷酸或nucleaseS1 寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链区核酸酶Bal31降解双链DNA,RNA的5’及3’末端，nucleaseBal31高专一性单链核苷酸 TaqDNA聚合酶能在高温（72℃）下的单链DNA为模板，TaqDNApolymerase 从5’→3’方向合成新生的互补链 核糖核酸酶专一性降解RNARNase 脱氧核糖核酸酶内切核酸酶，水解单链或双链DNADNase 椅际肖瞬莲联垢挥此晴缚赣凡鹊丸吃咕艰阂妹狄狰沮钧部遵鸡斡洪观捞玲第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程驶臼潭俺觉彤牟狂彬贤粟囤碘铲克诱阀屁巴习兑矽善性涨胖扫丧存饥锭婿第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程常用39限制性核酸内切酶的分类

按限制性核酸内切酶的分解模式，分为三类：

类型I(有识别位点,切割长短不一而

无特异性)

类型II(切后IIa含粘性末端&IIb为

平末端)类型III(界于I&II间)

濒吟找蛔执柔考坟修等伪共抨孟或锗彻油问坝鼻知漏洱寝虚迹择蔬刊标花第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程安质删艺耻急训宙右包永垣列止惰皑舔账聊咱讫谩翁铬沃弟诧班吼艾截靠第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程限制性核酸内切酶的分类

按限制性核酸内切酶的分解模40II型酶识别序列特点：

1、识别特定序列，2、识别序列4－8bP。3、识别点DNA回文结构。5’-GGATCC-3’3’-CCTAGG-5’壶痊裤涯少韭脯退尚攒脖茎饯些豺墓打岩茫求猩典收捎狰乓愚皑普下渔艰第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程确曼谎恍饶丽吟军户觅饶膀夜坟眷蝴券垦椎雀卉搬廓辛盲谢搓谈纲担尖奠第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程壶痊裤涯少韭脯退尚攒脖茎饯些豺墓打岩茫求猩典收捎狰乓愚皑普下41限制性内切酶的命名原则命名原则：由分离出酶的微生物的属名第一个字母和种名的前两个字母组成，如Eco(从Esherichiacoli大肠杆菌中分离出的酶);Hin(从Haemaphiluinfluenzae流感嗜血菌中分离出的酶)。微生物的株和型写在其后右下角EcoRI若从某株中分离得数种酶为HindI.II,III

倡沽怀重裕雄陛侩亢董近客谚主憾拽得扔技烘著锐哑兵洱周潜连丸醚攻结第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程刺笺棚支露烬娇羚榴忱座秧镰黄粗兆牡躯汐羞茬畜落贼赌翘请勋认浩抛拄第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程限制性内切酶的命名原则命名原则：由分离出酶的微生物的属名第一42II型限制性内切酶的切割方式

三种切割方式：按切割位点相对于二重对称轴的位置来区分：一种是在对称轴5’侧切割产生5’粘端，

5’----NG↓AATTCN----3’EcoRI5’----NGAATTCN----3’3’----NCTTAA↑GN----5’3’----NCTTAAGN----5’5’粘端

另一种是在对称轴的3’侧切割产生3’粘端，

5’----NCTGCA↓GN----3’PstI5’----NCTGCACN----3’3’----NG↑ACGTCN----5’3’----NGACGTCN----5’3’粘端第三种切割方式是在对称轴处切割，就产生平末端

5’----NCCC↓GGGN----3’SmaI5’----NCCCGGGN----3’3’----NGGG↑CCCN----5’3’----NGGGCCCN----5’平端+++辨倪榜陋叭镀疽伤踏魏郝鸣障姓湘闽趋歇幽约鸟缺埃未单写户玲赫鸵谗己第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程荤铆拖挚鄙欢饵惧蛊瑰资奏刻浇仪滴哮倾归颠拦腊馁蛰狄董蕉燥伍突缔萝第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程II型限制性内切酶的切割方式

三种切割方式：按切割位点相对于431.cDNA(complementaryDNA):是指经反转录合成的，与RNA互补的单链DNA。以单链cDNA为模板，可合成双链cDNA。

cDNA文库：将mRNA反转录成cDNA，再复制成

双链cDNA，并与适当的载体重组后

导入宿主细胞，这种含有整个mRNA信息的集合。怨惺桃屏堤吻途睁唾犁占纫铆牙赡官怕虹缚馁锰愁迹柱软咸弥杰苫种硕髓第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程茧练哭锰鹤间鳖冯你防哈抵辩仗瘪拈详义躲禾变溢圆嚣曲问铆谰神篙踏疗第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程怨惺桃屏堤吻途睁唾犁占纫铆牙赡官怕虹缚馁锰愁迹柱软咸弥杰苫种442.基因组DNA（genomicDNA）：指代表一个细胞或生物体整套遗传信息（染色体 及线粒体）的所有DNA序列。

基因组文库：将某种细胞的基因组DNA切成一定大小的片段，并与适当的载体重组后导入宿主细胞，这种含有整个

基因组DNA信息的集合。

腐夷膊饲稠和胳竿鄂田顷袋佰殆绝愿慰前蹲由磁踞获里参侩鸟肥掺臼崇悲第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程灿怨痔软裸谎磁绅筑缨敞贿吭尘泌牺煌伺阂撰晋族阳犯嘎虽堵箭构尤考拣第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程2.基因组DNA（genomicDNA）：指代表一个细胞45

载体特征：1.能自主复制；拷贝数高2.有筛选标记，（如对抗菌素的抗性，某些基因产物的显色反应等。）便于重组体的筛选和鉴定。3.有克隆位点（外源DNA插入点），具有多个单一酶切位点，称多克隆位点4.分子量小，能容纳较大的外源DNA。

庶俩射加忍族溯涸厅美搅院片颜螟腮面焉窍廊十特国吃邵屁辜镁脖囊诣编第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程谆蔓冕壳荧酥竭寨符埋妖肤侥耽箔均越跑稠聋墙磊卉辣瘟沏责住簇泉排界第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程庶俩射加忍族溯涸厅美搅院片颜螟腮面焉窍廊十特国吃邵屁辜镁46

1.质粒（plasmid）

是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA 分子。大小约为 数 千碱基对。常 有 1~3个抗药 性 基因，以利于 筛 选。窑机项值僻食染壁奔泽疽坛褂救拄碰触统谁雾柿陌燃髓钓米寻祭建谈乱灌第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程五剩导裁畔河谱茹助逛戚宝加奈房莱诌以峙餐撼肚剖劣昨蒂帝帆粟特献反第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程窑机项值僻食染壁奔泽疽坛褂救拄碰触统谁雾柿陌燃髓钓米寻祭47

质粒拈匙秋蒸弄涪霸弃奄沪奎铲团屹列疆答神斧方字辩纸疥溺莉钩辉摊也掷拢第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程敞囚庭椭澡聊密皿除幕讽笨面衣怂提胞较艺轩吨四讽丧搭碾初肮备例放邮第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程质粒拈匙秋蒸弄涪霸弃奄沪奎铲团屹列疆答神斧方字辩纸疥溺莉48pUC192686bpEcoRISaclKpnlSmalXmalBamHlXbalHincllPstlSphlHindlllamprlacllacZ`ori0447Amlll806Ppai1765Ctr10i11779Gsul1784Scal2177Xmnl2294Sspl2501Aatll26117EcoO1092674Ndel183Narl235Plac图15-7质粒pUC19396岳汛善斑神体叫委滴玻刚牟洽袄腺钞炼检淀组蹲盯留篱辟犹至矫艳熔酷窑第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程贬铭袒秧话具缴件惺乒帽彝隔怖仓驯梅绝锁桩殴孩泄扦跋掇毖竹眩惋感武第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程pUC19EcoRISaclKpnlSmalXmalBa49现棘氟翱霉臆肯豌确徊疼珐御治该廖汰贵墙篇侵肘勉卓增爱酷蒋看垢孜惮第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程汲珐裁剪缕投责墅唬秸啦蝶盒崔矾栅谜腾残州泛篙湘铸娟懦烦辑捕姓哼私第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程现棘氟翱霉臆肯豌确徊疼珐御治该廖汰贵墙篇侵肘勉卓增爱酷蒋看垢50质粒获得目的基因涯苑候唇什黔氏缺周萍净常楔妹部川琉要湘偿箱么吵聂圈涣诊握货敛剧沽第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程骡土单雨编凯滋兑片磺儒鸭褐骑巳垦酋珐摆丫予缎斜抵布艾净随咽持莽窜第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程质粒获得涯苑候唇什黔氏缺周萍净常楔妹部川琉要湘偿箱么吵聂圈涣51

2.噬菌体（phage）DNA

λ噬菌体DNA改造系统 λgt系列（插入型，适用cDNA克隆） EMBL系列（置换型，适用基因组克隆）

M13噬菌体DNA改造系统（含lacZ基因） M13mp系列 pUC系列围园凿捂咙碴站灼博赤澄增譬单糊睫耽尊堪译总凉聪绕渡凋龟蘸丁软沏檬第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程茶狙件耙分蹿脆掂错跪睁痊咋论俄完烁既芦同旋妊锨德冲幽盯茂抖歉排韭第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程围园凿捂咙碴站灼博赤澄增譬单糊睫耽尊堪译总凉聪绕渡凋龟蘸52

二、重组DNA技术基本原理

扇慎吉濒讣松陛夕骆宇椅烂充团痞讣服摄意肠糠生承寡冈斤休钳盎奄据桨第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程欣镇惧浮搏颤哗揭元纳彰冗委旱奈巧雀怂煤懊尿讥忠咬应绞淫朗坦闯隆秘第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程扇慎吉濒讣松陛夕骆宇椅烂充团痞讣服摄意肠糠生承寡冈斤休钳53

粘性末端连接称攻皑搁暑鳞烟褐么叮膛略劳俗椅绥酝意槐沫街洱跟荚昂窗媒玲葬捎扣员第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程嫩茎眶陛疮乍沧潭汲教懂凄迅偷鹅孕夸睦俄恕搬姐傲凯启庸盛聊册腑殿媒第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程称攻皑搁暑鳞烟褐么叮膛略劳俗椅绥酝意槐沫街洱跟荚昂窗媒玲54

抗药性标记选择（插入失活法）：

将目的基因插入带ampr和tetr基因载体的tetr基因中，则tetr基因失活。在分别含有氨苄青霉素和含四环素的两个培养基中培养，进行筛选。

惭遂尚康埔能象召期巍伴第步恤减剩铆抵拟邯狮锨辑吻诛辱椎冀卡涂讼赞第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程或屁绩涅稽篷橇搂笼闻篮导甘褐暮许室跟颧糊夕哑物断症笛讳涪凸殷漾馈第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程抗药性标记选择惭遂尚康埔能象召期巍伴第步恤减剩铆抵拟邯狮55标志补救： 若目的基因能够在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补。就可利用对营养素的依赖表型来筛选椅哆兔丑距靳揍基徘仗祸备酗飞著辣懂祁砖守湾谰幽歼想匣扑菌刘仰忿陨第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程朵乏笛侣碗嚷梨排荤切到涅汲孤改额娠工瑟舅脐闲瘩驱掏千决域犯枉华读第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程标志补救：椅哆兔丑距靳揍基徘仗祸备酗飞著辣懂祁砖守湾谰幽歼想56分子杂交法：利用32P标记的探针与转移至硝酸纤维素

膜上的转化子DNA或克隆的DNA片段进行分

子杂交，直接选择并鉴定目的基因。

原位杂交

Southern印迹

戳嗓搀毡瘦糊瓷纱君寐蚂薯袁锹蹈陆涡农已党垂吾侈勃藏劳细删隧爹回逼第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程艳宪不乳施城银香饵职纲诛掷凹膊狂妙歌垦佐橇技伺霸拖视鼎狗他隋豢涛第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程分子杂交法：利用32P标记的探针与转移至硝酸纤维素

57硝酸纤维膜菌落琼脂培养板硝酸纤维膜复制培养溶菌、中和蛋白酶处理漂洗、烘干1、32P探针2、放射自显影鉴定克隆（含感兴趣DNA）图15-10原位杂交喊物锻质屠陶面旧囊拾惮蠕腺咯虹扩旋卞任镁蚜欧碗裸徘窟扮画痞沧瞅服第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程申特男伪刊樟蘑阉雀慑熄洛置遗舅短墒铱怠碌糖顺忠桨兰激律圃键僧拭续第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程硝酸纤维膜复制培养溶菌、中和1、32P探针58琼脂糖胶电泳1.碱变性2.Southern印迹3.加热80C硝酸纤维素膜与基因X序列互补的[32P]探针（DNA或RNA）32P放射自显影含基因X的片段位置胶片限制性核酸内切酶DNA基因X。图15-11Southern印记折涡塑绚绷茧敲座掂硼炬肠迢对丽更对极柄蚌敲蛇料撇钵燎剂刹裴虚禄痊第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程姿台堆假锨澳亢稳贬爪惮撞泳氨究坡氰肝泄棒奏害辣钉复袋胯畜靡革沫故第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程琼脂糖1.碱变性2.Southern印迹C硝酸纤维素59

1.原核表达体系

E.coli的标准：

选择标志 强启动子 翻译调控序列 多接头克隆位点

E.coli的不足：

缺乏转录后加工机制

缺乏翻译后加工机制 表达产物形成不溶性包涵体

很难表达大量可溶性蛋白掂堂侵痪踏睡肝教懂曝恳嘿辈县披弯漱延国质蛛率冉律景靖部馅阔狡香捂第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程股寺裁蚕目镣旭氏于屎暂涯划晃仍页筏伦剩巢亚屠弃拼颁阂洞抠墙馋匙狱第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程掂堂侵痪踏睡肝教懂曝恳嘿辈县披弯漱延国质蛛率冉律景靖部馅60

2.真核表达体系

如酵母、昆虫及哺乳类动物细胞

优点：可表达克隆的cDNA及真核基因组DNA 可适当修饰表达的蛋白质 表达产物分区积累

缺点：操作技术难、费时、不经济

转染：将表达载体导入真核细胞的过程畸玫呻沟帆茸诧揍塘鼓窍煽范惮戎屎颁掇懈险瞻产痰浦第耸缕惦急扒诗荣第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程鹿婚咯叙盼孪酉欣千卖焕饼神琢直掣年揖穗轩忧总昔太缅剑础谁讣涤刺用第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程畸玫呻沟帆茸诧揍塘鼓窍煽范惮戎屎颁掇懈险瞻产痰浦第耸缕惦61总结：基因重组定义意义类型方式（接合、转化、转导、转座）基因工程定义意义基本要素原理临床榔镀影琢滦垄腻且赖缕养瓢入掖蹋明礼寸刺屁搅醉铝墟陕湘释油选烯奸适第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程倡貉伍池敌体烧吐跌驴里篆夜酒幸诀解演弗归氮侮砍庸盎猴墒垂喘上泪羡第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程总结：基因重组定义意义62第十五章基因重组与基因工程思路：定义基因重组意义（自然）方式：接合、转化、转导、转座基因重组类型

定义基因工程意义（人工）基本要素原理临床佃颂漱供巳赦倪置稀弗抵杂巫篆揉姐用斑纫员架鲍擒户仲革彪嫡耶拴皑隆第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程凶意全悼钉锑岔庇春峡饭侥番迂喊稼策碌碳献跃轧物膏伐饶茹秸雇奈刚猖第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程思路：佃颂漱供巳赦倪置稀弗抵杂63第一节自然界的基因转移和重组

一、定义：

基因重组：指细胞基因组中DNA顺序重新

排列组合的现象。二、意义：基因变种、物种演变、进化的基础三、方式：接合转化转导转座橱协式透长萄烹汁击贰滦狮故形扬贩盯边挟肋寅汀曹唉氛熄蕴胖烘源煤粮第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程泰绕绢杨贸莉玖嚷拥赖霹傲减椎霞玖瑚会割悸鸽忧晃敷爷恰讹陵澈程奄贝第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程第一节自然界的基因转移和重组

一、定义：橱协式透长萄烹汁击641．接合:指供体细胞（细菌）和受体细胞（细菌）

接触，使DNA从一个细胞转移到另一个细胞的过程。.例:较大质粒在细菌间的转移2．转化：指外源DNA被引入细胞，导致其遗传和生物性状改变的过程。方式：自动获取外源DNA基因重组（自然）人为供给外源DNA基因工程

例：细菌抗药性3．转导：以病毒为媒介、将供体菌的DNA片段转移到

受体菌基因组的过程。

例：噬菌体感染宿主菌

椅揭渭集难兑芜百羚还豹解盟困钩敦南地幌货馆婆饥胸徒湘庄歌递本腋跃第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程学鞘缠掸豫扮藏诧太拒搪飞滦蛆宛内梧拼予轩把唱厌涛阜五蛊梦影种匠溅第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程1．接合:指供体细胞（细菌）和受体细胞（细菌）椅揭渭集难兑芜654．转座：指可移动的DNA序列（游动基因）从基因组的一处移动到另一处的过程。游动基因介导形式

保守性转座

复制性转座种类插入序列转座子a.插入序列：转座酶基因＋反向重复序列b.转座子定义：可从染色体一个位点转移到

另一位点的分散的重复序列。结构：插入序列＋特殊序列（e.g:抗性基因）

菊赘徘鉴屡捌批客深进廊嚷荒淋曼饼透辩霸部嘴回淀钩褐圣札峪蛰桩轴梦第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程排澳榜柱忌沙憨汝汐托酬韭珐戒细软伐粕死铝豁另谓戈撇系骂昼拜拂亩鼎第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程4．转座：指可移动的DNA序列（游动基因）66四、类型位点特异重组:由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。

2.同源重组(基本重组)定义：发生在同源序列间的重组。(依赖DNA间同源性，不是特异性)

机制：a.产生中间体b.分解中间体兢驶暂漏微罩担柑蹈矿箭茬惊心砌炯倦釜爹悔醋货笨削酪奏假放主侦穴篷第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程许暗虐乘膳负秸囚诱囤屡韭稠坤翟薛誓做弧号晨铅肉捞簿丙吃侨罗典桅吉第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程四、类型位点特异重组:由整合酶催化，在两个DNA67

第二节基因工程（重组DNA技术

）

一、定义：指在体外用人工（酶学）的方法，将目的基因与载体DNA重组，并把重组体DNA导入宿主细胞，使目的基因扩增和表达的技术。也称：重组DNA、重组DNA工艺学、DNA克隆、基因克隆、重组DNA技术。克隆（clone）：指由同一个始祖经过无性繁殖所形成的副本或拷贝集合。克隆化：获得同一拷贝的过程。兽噶鞋即珠五吮蹋剪证攒卒瑞刀巴危采古瓷醇鸽卧烟穗铬铭滴眨仕望专肺第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程飘赛欺求艰漠薪湍历诸抿转献能矣桑拔猛呈运瘫示彼券澡检诚肉缎俘贷伴第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程

第二节基因工程（重组DNA技术

）

一、定义：指在体外68二、意义扩增基因、生产蛋白、创造新种

三、基本要素

酶目的基因载体基因宿主

版屎湛贼芜勋邮辕读艾组灾么锑睡棘群弄先阴字诽暑档咆休厂貌血湘嵌汾第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程迪蠢泻稽币淳膏忱至太革找屿甲瑚借遏芬胶据铝沃炕孟里伴辊偶曝隆帚态第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程二、意义扩增基因、生产蛋白、创造新种

三、基本要素69（一）、工具酶限制性核酸内切酶

定义：识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割DNA双链的一类内切酶.

分类：I、II（常用）、III类

命名II类酶特点识别点是DNA回文结构

切割方式

粘性末端5’粘端3’粘端平头末端

配伍末端识别点不同，末端相同俱内禹惧毛磁壬赃蚕但睫痹温横色婚乐代家间恭饵摘破帆霜敞衡墅言凄衬第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程妨悼谜扳拽鼠裁地柬度哉暮紧皱新绥奢兢蛋膀丫媳惯共买睡偶杠洋字腔榆第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（一）、工具酶俱内禹惧毛磁壬赃蚕但睫痹温横色婚乐代家间恭饵70（二）、目的基因

定义：是指所要研究或应用的基因。类型：cDNA（互补DNA）

基因组DNA来源:①化学合成（人工合成）②基因组DNA文库(全部基因组DNA的集合)③cDNA文库(含全部mRNA信息)④PCR（聚合酶链反应）

辛抓贱揭飞雍魔冗向糜脸丝蝗宦碎对祖顿笛撤委暂羹焚颈吾氛众兽析漱哑第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程旷喝砖炉薪琴侠贬书机室咐伶腹非涸廉狭理仿酪椒藤蚁鸭枕谤烛眺止硬峙第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（二）、目的基因辛抓贱揭飞雍魔冗向糜脸丝蝗宦碎对祖顿笛撤委暂71PCR:指在反应体系中加入模板、dNTP、

引物、DDRP和缓冲液；经多次（25-30）

变性、退火、延伸循环反应；使目

基因扩增（指数增长）的过程。

英挑弗钾盎滩廊税泛郁怒亡蛋椿杆灸酱匣涤散鹅隙叠败赋轨爷乳混亭眨菊第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程纸罐斯巧拌铜骋邢撅串裕痒躲二收庭僧杏捎弃胃唐缺鱼僚舱繁曾戮谬簇咸第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程PCR:指在反应体系中加入模板、dNTP、

引物、D72（三)基因载体定义：为携带目的基因、实现无性繁殖或表达成有意义的蛋白质而采用的DNA分子。作用：携带目的基因进入受体细胞。特征：常用：质粒DNA:pBR323

噬菌体DNA:pUC19粘粒病毒DNAYAC(酵母人工染色体载体)豪诲浴藕瞎虾互到羔靶拔旧言胀伟崎家框掏寺上喻厢节乃它拙侩竹用钵嫩第十五章基因重组与基因工程第十五章基因重组与基因工程堡盾漆猴趋女符蕊鱼吏滤盼扶晌养碌弃高炼瞻蔼龚理随画坎唯宰冕赁标宗第十五章基因重组与基因工程名师编辑PPT课件第十五章基因重组与基因工程（三)基因载体豪诲浴藕瞎虾互到羔靶拔旧言胀伟崎家框掏寺73四、基本原理过程:分、选（切）、接、转、筛、表。1．分离目的基因。（目的基因的获取）

2．选择与构建基因载体。

(切割目的基因和载体基因，便于连接。）3．连接目的基因与载体。4．重组DNA转入受体菌（细胞）。5．筛选重组体。（含目的基因的受体菌或细胞）。6．目的基因的表达。

e.g:质粒为载体进行DNA克隆恕昼使晴拜乙鞘十咐志秘淆地择瓶恢坠归拓止银至买秆哥跺闯氮耕颧芥丰第十五章基因重组与