2020国自然资源d14、供阅读范例xu

自然科学基金申2010版)查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作：1)ord2000,orword2003Word自然科学基金申2010版)查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作：1)ord2000,orword2003Word附注说明：宏的安全性设为:"中"方法:Word菜单->工具->宏->安全性->安全级,设置为"中"项目名称：(如果您是Word97用户，继续执行以下步骤)：(如果word左上角"安全警告"处"选项"依托：中的"启用此内容")通讯地址：2)：3)宏"按钮，即可开始填写本文档或打印了申报日期：2010年3月6日自然科学基金委员会申请代码受理部门收件日期受理编号基本信息男19454申学位学士教授每年工作时间（月）4请电电子邮箱人传国别或地区中国信哈尔滨市南岗区 号息工作名称依托单位信息人郭松电子邮箱guosong0451－86669470地址单位 名称合作研究单位信息项目名称项资助类别面上项目亚类说明目附注说明基H0203:心肌细胞/细胞损伤、申请代码H0109:肺循环及肺疾病本基地类别科技部和黑龙江省生物工程\部门开放信研究年限1—201312研究属性基础研究息400肺动脉高压(PAH)可导致右心肥大、衰竭甚至。PAH摘亡和心肌肥大的发生。但是，CaSR与PAH发生发展的关系，迄今国内外尚无CaSRCaSR表达增加。一个新机制。为证实这一假说，收缩和重构，这可能是缺氧性肺动脉高压的要PAH的防治提供新靶点。PAH缺氧性肺动脉高压；钙敏感受体；肺动脉平滑肌；鼠重构；大(用分号52页基本信息男19454申学位学士教授每年工作时间（月）4请电电子邮箱人传国别或地区中国信哈尔滨市南岗区 号息工作名称依托单位信息人郭松电子邮箱guosong0451－86669470地址单位 名称合作研究单位信息项目名称项资助类别面上项目亚类说明目附注说明基H0203:心肌细胞/细胞损伤、申请代码H0109:肺循环及肺疾病本基地类别科技部和黑龙江省生物工程\部门开放信研究年限1—201312研究属性基础研究息400肺动脉高压(PAH)可导致右心肥大、衰竭甚至。PAH摘亡和心肌肥大的发生。但是，CaSR与PAH发生发展的关系，迄今国内外尚无CaSRCaSR表达增加。一个新机制。为证实这一假说，收缩和重构，这可能是缺氧性肺动脉高压的要PAH的防治提供新靶点。PAH缺氧性肺动脉高压；钙敏感受体；肺动脉平滑肌；鼠重构；大(用分号52页项目组主要参与者（注:项目组主要参与者不包括项目申请人，说明:高级、中级、初级、博士后、博士生、 生数由申请人负责填报（含申请人，总人数由各分项自动加和产生。3页总人数高级中级初级博士后博士生生1013123编号姓名出生年月学位名称电子邮箱项目分工（月）11976-12-19女讲师哈尔滨医科大物学421977-03-08女讲师博士哈尔滨医科大ihongzhu19780308@126.com细胞内钙测定431970-03-05男博士生哈尔滨医科大i肺 重构的信号传导641984-11-18女生学士哈尔滨医科大a肌张力检测651975-12-22女主治医师哈尔滨医科大疫组化361975-8-1女博士生哈尔滨医科大胞周期671985-7-28女生学士哈尔滨医科大生化测定481984-2-8女生学士哈尔滨医科大型691978-10-15女助教哈尔滨医科大物学4项目组主要参与者（注:项目组主要参与者不包括项目申请人，说明:高级、中级、初级、博士后、博士生、 生数由申请人负责填报（含申请人，总人数由各分项自动加和产生。3页总人数高级中级初级博士后博士生生1013123编号姓名出生年月学位名称电子邮箱项目分工（月）11976-12-19女讲师哈尔滨医科大物学421977-03-08女讲师博士哈尔滨医科大ihongzhu19780308@126.com细胞内钙测定431970-03-05男博士生哈尔滨医科大i肺 重构的信号传导641984-11-18女生学士哈尔滨医科大a肌张力检测651975-12-22女主治医师哈尔滨医科大疫组化361975-8-1女博士生哈尔滨医科大胞周期671985-7-28女生学士哈尔滨医科大生化测定481984-2-8女生学士哈尔滨医科大型691978-10-15女助教哈尔滨医科大物学4经费申请表（金额：万元）4页科目申请经费备注（计算依据与说明）一.研究经费29.64001.科研业务费7.2000（1）测试/计算/分析费2.2000mRNA 、引物 镜检查费等（2）能源/动力费（3）会议费/差旅费1.9000学术会议0.4×4人次,科研调研差旅费0.3（4） 物/文献/信息 费2.3000国内外 0.3,答辩评审费0.3,信息 费0.3（5）其他0.8000不可预见费2.实验材料费20.7000（1）原材料/试剂/药品购置费18.5000PCR（2）其他2.2000标准实验动物 及饲养3.仪器设备费0.9400（1）购置0.9400氮气发生器（2）试制4. 改装费0.80005.协作费二.国际合作与交流费3.80001.项目组成员出国合作交流2.400012. 来华合作交流1.4000短期来华合作交流国际旅费和生活费三.劳务费3.8000参加课题的 和博士后的劳务和生活补助费四.1.96005％为合 计39.2000经费申请表（金额：万元）4页科目申请经费备注（计算依据与说明）一.研究经费29.64001.科研业务费7.2000（1）测试/计算/分析费2.2000mRNA 、引物 镜检查费等（2）能源/动力费（3）会议费/差旅费1.9000学术会议0.4×4人次,科研调研差旅费0.3（4） 物/文献/信息 费2.3000国内外 0.3,答辩评审费0.3,信息 费0.3（5）其他0.8000不可预见费2.实验材料费20.7000（1）原材料/试剂/药品购置费18.5000PCR（2）其他2.2000标准实验动物 及饲养3.仪器设备费0.9400（1）购置0.9400氮气发生器（2）试制4. 改装费0.80005.协作费二.国际合作与交流费3.80001.项目组成员出国合作交流2.400012. 来华合作交流1.4000短期来华合作交流国际旅费和生活费三.劳务费3.8000参加课题的 和博士后的劳务和生活补助费四.1.96005％为合 计39.2000其他经费来源其他计划资助经费其他经费资助（含部门匹配）其他经费来源合计0.0000报告正文（一）立项依据与研究内容1.项目的立项依据肺动脉高压(pulmonaryarterialhypertension，PAH)是不同病因导致的以肺动脉和肺血收缩、3】。通管阻力升高为特点的一组疾病或临床综合征，和率很高，其发病机制主要为重构和血栓形成【1，2】。如果PAH不加治疗，最终导致右心衰竭、容量负荷增加直至常肺动脉高压的判定标准为：平均肺动脉 在静息状态下>25mmHg，运动状态下>30mmHg。性肺动脉高压(PPH)和继发性肺动脉高压(SPH)两大2003年第3届PAH会议，将PAHPAH(IPAH)；②性PAH(FPAH)；PAH(APAHPAH(PPHN)。根据美国疾控中心的资料，各类型PAH患病率已超过3O～5O人／100万人【4，5】。囊泡性纤维化/支不良综合症神经肌肉病等；（4）睡眠 吸：睡眠呼吸暂停等；（5）久居高山或高原；（6）【6】。性PAH主要与BMPR2等 变有关【7】。众所周知，肺PAH的发生机制复杂。特发性和收缩是PAH的早期组分，由细胞内钙增加触发，信号传导通路主要包括PKC、Rho激酶和环磷酸腺苷（cAMP和cGMP），钙库 性钙通道和电压门控性钾通道报告正文（一）立项依据与研究内容1.项目的立项依据肺动脉高压(pulmonaryarterialhypertension，PAH)是不同病因导致的以肺动脉和肺血收缩、3】。通管阻力升高为特点的一组疾病或临床综合征，和率很高，其发病机制主要为重构和血栓形成【1，2】。如果PAH不加治疗，最终导致右心衰竭、容量负荷增加直至常肺动脉高压的判定标准为：平均肺动脉 在静息状态下>25mmHg，运动状态下>30mmHg。性肺动脉高压(PPH)和继发性肺动脉高压(SPH)两大2003年第3届PAH会议，将PAHPAH(IPAH)；②性PAH(FPAH)；PAH(APAHPAH(PPHN)。根据美国疾控中心的资料，各类型PAH患病率已超过3O～5O人／100万人【4，5】。囊泡性纤维化/支不良综合症神经肌肉病等；（4）睡眠 吸：睡眠呼吸暂停等；（5）久居高山或高原；（6）【6】。性PAH主要与BMPR2等 变有关【7】。众所周知，肺PAH的发生机制复杂。特发性和收缩是PAH的早期组分，由细胞内钙增加触发，信号传导通路主要包括PKC、Rho激酶和环磷酸腺苷（cAMP和cGMP），钙库 性钙通道和电压门控性钾通道（见图1）【8】。图1收缩、 单核巨噬细胞PAH发生的机制与激活 促炎反应等有关（图3）【9】。【7】气体信号 调节等已成为PAH的研究热点 ，杜军保等已开展了系列研究。Notch35页发展中作用开始受到人们重视（LiXDetal,naturemedicine2009;15:1289-1299）近年来，哈医大朱大岭等对15-HETE在低氧性PAH的作用和机制进行了系统研究【10，11】。图2各种细胞在肺动脉高压时重构中作用发展中作用开始受到人们重视（LiXDetal,naturemedicine2009;15:1289-1299）近年来，哈医大朱大岭等对15-HETE在低氧性PAH的作用和机制进行了系统研究【10，11】。图2各种细胞在肺动脉高压时重构中作用图3（PAH）发生机制PAH发生的Kv开放剂、TRP通道抑制剂、负性生存素、他汀类 、PPARγ激动剂、各种生长因子受体的抑制剂、肾上腺髓质素、Rho激酶抑制剂、内皮祖细胞、环孢霉素A等治疗【9】。自然科学基金委5年内得到自然科学基金委资助的有关“肺动脉高压”研究项目合计377项，089项，0914项），研究内容主要涉及上述提到的有关因素【7-11】。但是，肺动脉高压的研究虽有100多年的历史，其发病机制至今尚未阐明【1，7，12】。尽管现代化的，但其 率仍高达50%【13】。这就要求人们从治疗明显改善了PAH患者的生理功能和延长了6页新的视觉，进一步阐明肺动脉高压的发生机制，以便为其有效防治提供新靶点。calcium-sensingreceptor,CaSR)是GC﹐BrownetalCaSR。CaSR（EC、7（TCD胞内羧基尾部所组成（见图4CaSR组织以及其他细胞（例如，中枢和外周神经、肝脏，血细胞、胰腺β细胞等）。其功能主要是维持Ca2+、Gd3＋、新霉素、精胺（spermine）等多价阳离子亦是CaSR的激动剂[14]。新的视觉，进一步阐明肺动脉高压的发生机制，以便为其有效防治提供新靶点。calcium-sensingreceptor,CaSR)是GC﹐BrownetalCaSR。CaSR（EC、7（TCD胞内羧基尾部所组成（见图4CaSR组织以及其他细胞（例如，中枢和外周神经、肝脏，血细胞、胰腺β细胞等）。其功能主要是维持Ca2+、Gd3＋、新霉素、精胺（spermine）等多价阳离子亦是CaSR的激动剂[14]。4钙敏感受体机构示意图心领域CaSR的研究开展较晚。项目申请人与WangRui教授合作，首次在国际上证al.Calciumandpolyamineregulatedcalcium-sensing[15]EurJ.Biochem.2003，2702680–2688) 。迄今，该文被SCI等人报告，CaSR[16]。近年来，其他实验小组也提供了一些证据，表明CaSR在主动脉等 的内皮细胞和平滑肌有功能性表达[17－18]。最近，Masih-ulAlam等证实性肾衰时的 失【19】。平滑肌细胞功能性钙敏感受体的丢20043：1）《大鼠心肌细胞钙敏感受体代谢规律和"双刃剑"作用机制的研究》（30470688，2005-2007）；（3）《钙敏感受体对动脉粥样（30871122009-211在上述项目的资助下，本课题组首次发现：(1)CaSR在大鼠心肌组织中存在及不同鼠龄的表达规（2）CaSR激活通过G蛋白-PLCIP3通路引起[Ca2+]（3）CaSR-再iFas（4）PKCε介导CaSR（5）CaSRAngII诱导的大鼠（6CaSR表达增加可使动脉粥样硬化大鼠对心肌梗死的敏感性增加【15，20-28】表相关2008年黑龙江省自然科学二7页等奖（申请人排名第一）。目前已成为国际的研究热点，在我国也开始得到关注。迄今为止，关CaSR的研究项目共9项（见下表）：自然基金委资助有尽管国内外学者在心系统的钙敏感受体（CaSR）方面开展了一些研究，但是肺动脉平滑肌细胞有无CaSR的功能表达及其病理生理意义，迄今未见有PubMed收录。PubMed8106、1314、472、1274篇论文，但是将“钙敏感受体”与其他检索词检索，则检索结果均为“0（。Mo-JunLin等观察到，慢性缺氧时瞬时受体电位(TRPC)负责编码的钙库性阳离子通道和受体 通道在肺动脉平滑肌表达上调，并认为这可能是缺氧性PAH的一个新机制等奖（申请人排名第一）。目前已成为国际的研究热点，在我国也开始得到关注。迄今为止，关CaSR的研究项目共9项（见下表）：自然基金委资助有尽管国内外学者在心系统的钙敏感受体（CaSR）方面开展了一些研究，但是肺动脉平滑肌细胞有无CaSR的功能表达及其病理生理意义，迄今未见有PubMed收录。PubMed8106、1314、472、1274篇论文，但是将“钙敏感受体”与其他检索词检索，则检索结果均为“0（。Mo-JunLin等观察到，慢性缺氧时瞬时受体电位(TRPC)负责编码的钙库性阳离子通道和受体 通道在肺动脉平滑肌表达上调，并认为这可能是缺氧性PAH的一个新机制【29】。鉴于CaSR普遍在机体各系统、、组织和细胞中有表达，而且CaSR引起细胞内钙升高的机制也是通过钙库性钙通道（SOCC）和受体性钙通道（ROCC），因此，我们推测CaSR在肺动脉平滑肌细胞有功能表达，并可能参与缺氧性肺动脉高压的发生。这种假说已在预实验中得到了初步证实（详见工作基础）：8页我们研究小组和同济医学院胡清华研究小组在国内同时开展了肺动脉CaSR的研究，并分别证明肺动脉有CaSR的表达：胡清华教授的博士罗友根了他的“新的细胞外钙感受机制在缺氧引起肺动脉平滑肌细胞胞桨钙离子浓度变化中的作用（2009.5.2李光伟在《第七届海峡心（2009.8.14-17,）也作了“钙敏感受体在大鼠肺动脉平滑肌细胞的功能性表达”的学术报告（KM222，目前英文稿件已投出【0。慢性呼吸系统疾病或缺氧情况在临 很常见。例如，慢性阻塞性肺疾病(COPD)在我国的北方地区（尤其农村）十分常见。慢性支炎→阻塞性肺气肿→缺氧性肺动脉高压→右心肥大→右心(COPD)不仅给患者带来了巨大的痛苦，也给家庭和带来了沉重的经济负担。我们的研究将进一步揭示缺氧性肺动脉高压的发生机制，为其有效防治提供新理论和新靶点。参考文献我们研究小组和同济医学院胡清华研究小组在国内同时开展了肺动脉CaSR的研究，并分别证明肺动脉有CaSR的表达：胡清华教授的博士罗友根了他的“新的细胞外钙感受机制在缺氧引起肺动脉平滑肌细胞胞桨钙离子浓度变化中的作用（2009.5.2李光伟在《第七届海峡心（2009.8.14-17,）也作了“钙敏感受体在大鼠肺动脉平滑肌细胞的功能性表达”的学术报告（KM222，目前英文稿件已投出【0。慢性呼吸系统疾病或缺氧情况在临 很常见。例如，慢性阻塞性肺疾病(COPD)在我国的北方地区（尤其农村）十分常见。慢性支炎→阻塞性肺气肿→缺氧性肺动脉高压→右心肥大→右心(COPD)不仅给患者带来了巨大的痛苦，也给家庭和带来了沉重的经济负担。我们的研究将进一步揭示缺氧性肺动脉高压的发生机制，为其有效防治提供新理论和新靶点。参考文献LoscalzoJ．Pathogenicmechanismsofpulmonaryarterialhypertension．JMolCellCardiol，2008，44(1)：14-30StenmarkKR,McMurtryIF.Vascularremodelingvesusvasoconstrictioninchronichypoxicpulmonaryhypertension:atimeforreappraisal?CircRes2005;97:95-98FarberH,LoscalzoJ.Pulmonaryarterialhypertension.NEnglJMed2004;351:1655–654.张颖，刘双，杨京华。肺动脉高压诊断及分类。心肺病杂志2008，27（3）：191-193王伟，王玉林.肺动脉高压发病机制研究进展.实用儿科临床杂志2008，23（13）：1036-1038RedaE.Girgis,StephenC.Mathai.PulmonaryHypertensionAssociatedwithChronicRespiratoryDisease.ClinChestMed28(2007)219–232MainaliPrabha,JINHong-fang,TIANYue,TANGChao-shuandDUJun-bao.Mechanismsresponsibleforpulmonaryhypertension.ChinMedJ2008;121(24):2604-2609AngelCogolludo,LauraMoreno,EduardoVillamor.MechanismsControllingVascularToneinPulmonaryArterialHypertension:ImplicationsforVasodilatorTherapy.Pharmacology2007;79:65–75MarleneRabinovitch.Molecularpathogenesisofpulmonaryarterialhypertension.TheJournalofClinicalInvestigation10.LeiGuo,2008,118(7):2372–2379Tang,XiaojieChu,LihuaSun,LeiZhang,ZhaopingQiu,ShuoChen,YumeiLi,XiaodongZheng,DalingZhu.RoleofproteinkinaseCin15-HETE-inducedhypoxicpulmonaryvasoconstriction.Prostaglandins,LeukotrienesandEssentialFattyAcids80(2009)115–12311.ShuangWang,YaliWang,JingJiang,RuifangWang,LisaLi,ZhaopingQiu,HongWu,DalingZhu.15-HETE9页protectsratpulmonaryarterialsmoothmusclecellsfromapoptosisviathePI3K/Aktpathway.Prostaglandins&otherLipidMediators91(2010)51–60ZaimanA,FijalkowskaI,HassounPM,TuderRM.OnehundredyearsofresearchintheprotectsratpulmonaryarterialsmoothmusclecellsfromapoptosisviathePI3K/Aktpathway.Prostaglandins&otherLipidMediators91(2010)51–60ZaimanA,FijalkowskaI,HassounPM,TuderRM.Onehundredyearsofresearchinthepathogenesisofpulmonaryhypertension.AmJRespirCellMolBiol2005;33:425-431WangXX,ZhangFR,ShangYP,ZhuJH,XieXD,TaoQM,etal.Transplantationofautologousendothelialbebeneficialinpatientswithidiopathicpulmonaryarterialhypertension:apilotrandomizedcontrolledtrial.JAmCollCardiol2007;49:1566-1571.M.,andR.JohnMacLeod.ExtracellularCalciumSensingandExtracellularCalciumSignaling.PhysiolRev81:239–297,2001WangR,XuCQ,ZhaoWM,etal.Calciumandpolyamineregulatedcalcium-sensingreceptorsincardiactissues.Eur.J.Biochem.270,2680–2688(2003)Tfelt-HansenJ,HansenJL,SmajilovicS,etal.Calciumreceptorisfunctionallyexpressedinratneonatalventricularcardiomyocytes.AmJPhysiolHeartCircPhysiol.2006;290(3):H1165-71RoyC.Ziegelstein,YaliXiong,ChaoxiaHe,etal.Expressionofafunctionalextracellularcalcium-sensingreceptorinhumanaorticendothelialcells.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications342(2006)153–163JakobLercheHansen,TueE.H.Christoffersen,etal.Extracellularcalciumsensinginrataorticvascularsmoothmusclecells.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications348(2006)1215–1223Masih-ulAlam,JohnPaulKirton,FionaL.Wilkinson,etal.Calcificationisassociatedwithlosscalcium-sensingreceptorinvascularsmoothmusclecells.CardiovascularResearch(2009)81,260–26820.徐长庆（）李弘时飒赵雅君韩丽萍张红雨。不同鼠龄大鼠心肌组织中钙敏感受体的表达2006，22（8）：1506－150921.ZhangWH,FuSB,LuFH,WuB,GongDM,PanZW,LvYJ,ZhaoYJ,LiQF,WangR,YangBF,XuCQ（ Involvementofcalcium–sensingreceptorinischemia/reperfusion–inducedapoptosisinratcardiomyocytes.BiochemiacalandBiophysicalResearchCommunications2006,347:872-88122．SunYH,LiuMN,LiH,ShiS,ZhaoYJ,WangR,XuCQ（）.Calcium-sensingreceptorinducesratneonatalventricularcardiomyocyteapoptosisBiochemicalandBiophysicalResearchCommunications350(2006)942–94823.JiangCM,HanLP,LiHZ,QuYB,ZhangZR,WangR,XuCQ（）,LiWM.Calcium-sensingreceptorsinduceapoptosisinculturedneonatalratventricularcardiomyocytesduringsimulatedischemia/reperfusion.CellBiologyInternational32(2008)792-800吴博,张伟华,李全凤,高秀香,张力,杨金霞,王秀丽,张明爽,张卓然,徐长庆（ ）.钙敏感受体对大鼠心肌缺氧－复氧损伤时细胞凋亡的影响.中国病理生理杂志2007,23(7):1249-1253LuF,TianZ,ZhangW,ZhaoY,BaiS,RenH,ChenH,YuX,WangJ,WangL,LiH,PanZ,TianY,YangB,WangR,XuC（）.Calcium-SensingReceptorsInduceApoptosisinRatCardiomyocytesviatheEndo(sarco)plasmicReticulumPathwayduringHypoxia/Reoxygenation.BasicClinPharmacolToxicol.2009Dec22.[Epubaheadofprint]26.ZhangWH,LuFH,ZhaoYJ,WangLN,TianY,PanZW,LvYJ,WangYL,DuLJ,SunZR,YangBF,WangR,XuC（.Post-conditioningprotectsratcardiomyocytesviaPKC-mediatedcalcium-sensingreceptors.BiochemiacalandBiophysicalResearchCommunications2007,361:659-66427.WangLN,WangC,LinY,XiYH,ZhangWH,ZhaoYJ,LiHZ,TianY,LvYJ,YangBF,XuCQ（）.Involvementofcalcium-sensingreceptorincardiachypertrophy-inducedbyangiotensinIIthroughcalcineurin10页pathwayinculturedneonatalratcardiomyocytes.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications2008,369(2):584-58928.GuoJ,LiHZ,ZhangWH,WangLC,WangLN,ZhangL,pathwayinculturedneonatalratcardiomyocytes.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications2008,369(2):584-58928.GuoJ,LiHZ,ZhangWH,WangLC,WangLN,ZhangL,LiGW,LiHX,Yang,BF，WuLY,WangR,XuCQ（Increasedexpressionofcalcium-sensingreceptorsinducedbyox-LDLamplifiesapoptosisof）.cardiomyocytesduringsimulatedischaemia–reperfusion.ClinicalandExperimentalPharmacologyandPhysiology(2010)37,e128–e13529.Mo-JunLin,GeorgeP.H.Leung,Wei-MinZhang,etal.ChronicHypoxia–InducedUpregulationofReceptor-OperatedCa2+ChannelsinPulmonaryArterialSmoothMuscleCells–ANovelMechanismofHypoxicPulmonaryHypertension.CircRes.2004;95:496-50530.LiGW,WangQS,HaoJH,XingWJ,GuoJ,LiHZ,BaiSZ,LiHX,YangBF,WuLY,WangRandXuCQ（）.Functionalexpressionoftheextracellularcalcium-sensingreceptorinratpulmonaryarterysmoothmusclecells.AMJPHYSIOL-LUNGC(insubmit)2.项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键科学问题研究内容（1）大鼠肺动脉平滑肌钙敏感受体的分布、表达和功能（已基本完成）CaSRPR-PCRBlotCaSRCaSR[Ca2+iCaSR对肺动脉平滑肌张力的影响。慎密分组，应用各环节激动剂或抑制剂，以确保结论可靠（下详。（2）缺氧时大鼠肺动脉平滑肌钙敏感受体表达的变化及其对收缩和重构的影响氧（缺氧不同时间）对大鼠肺动脉平滑肌的CaSR表达、肌张力、组织重构（细胞增殖和细胞凋亡）的影响，揭示CaSR表达增加和激活对肺收缩、重构的影响和信号传导途径，以便阐明CaSRi在缺氧性肺动脉高压中的作用和殖和细胞凋亡作为反映重构的指标，观察形态学、增殖（凋亡）率、相应信号传导通路关键分子表达的变化。具体的研究内容、方法和路线，详见下面的研究方案。研究目标（1）证实大鼠肺动脉平滑肌有功能性钙敏感受体（CaSR）的表达。（2）揭示缺氧时肺动脉平滑肌CaSR表达增加，通过促进收缩、重构参与缺氧性肺动脉高压（PAH）的形成，从新的视觉揭示其机制，为缺氧性PAH的防治提供新思路和新靶点。拟解决的关键科学问题需用 学方法和功能性检验证实：(1)[Ca2+]增加可引起[Ca2+]增加；(2)[Ca2+]增加来源于o i i11页钙库动员；(3)；(4)Gd3+Ca2+是激动剂；(5)CaSR达的存在(用P-PCRnorthernblot,westernblot（K.Woneberger,钙库动员；(3)；(4)Gd3+Ca2+是激动剂；(5)CaSR达的存在(用P-PCRnorthernblot,westernblot（K.Woneberger,M.A.Scofield,P.Wangemann.Evidenceforacalcium-sensingreceptorinthevascularsmoothmusclecellsofthespiralmodiolarartery.JMembrBiol.20001;175(3):203-12。我们通过研究内容（）所示各种相关实验，将充分证实肺动脉平滑肌细胞有CaSR的功能性表达。（2）一般认为，肺收缩、重构和原位血栓形成是肺动脉高压（PAH）发生发展的重要病理生理基础。本实验拟通过实验证实缺氧（尤其慢性缺氧）能使肺动脉平滑肌CaSR表达增多，后者又通过细胞内钙增加促进肺收缩，通过调节细胞凋亡和细胞增殖引起重构，进而导致缺氧性“CaSR的实验依据。研究成果将具有重要理论意义和潜在的应用前景。3.拟采取的研究方案及可行性分析自身前后对照，并进行相应的统计分析。（1）实验设计和技术路线1）正常大鼠肺动脉平滑肌CaSR的功能性表达Wister200-250g,雌雄不拘，清洁级，哈医大动物中心提供。每组n=7-13(视具体情况而定)。②重要试剂的使用浓度：CaSR激动剂：CaSR抑制剂GdCl3NPS23900.3mM–1mM10μM（SR）钙泵抑制剂：Thapsigargin10μMU73122的类似物U73122U73343NiCl2CdCl2Coffeine10μM10μM10mM0.2mMSR钙库耗竭剂：10mM（后详）④技术路线：12页图1正常大鼠肺动脉和肺动脉平滑肌细胞CaSR的表达、、功能检测和机制探讨2）慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌CaSR表达变化及其与肺动脉高压的关系①实验动物：同上②重要试剂的使用浓度：同上（后详）④技术路线：A.CaSR图1正常大鼠肺动脉和肺动脉平滑肌细胞CaSR的表达、、功能检测和机制探讨2）慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌CaSR表达变化及其与肺动脉高压的关系①实验动物：同上②重要试剂的使用浓度：同上（后详）④技术路线：A.CaSR图2CaSR激动剂和抑制剂对急性缺氧条件下肺动脉环肌张力的影响13页B.CaSR3慢性缺氧时大鼠肺动脉CaSR的表达与肺动脉高压相关参数的变化B.CaSR3慢性缺氧时大鼠肺动脉CaSR的表达与肺动脉高压相关参数的变化C.缺氧时肺动脉CaSR重构的影响及其机制14页图4缺氧对培养肺动脉平滑肌细胞CaSR表达和细胞增殖及凋亡的影响及其信号传导通路（2）研究方法1）肺动脉张力的测定图4缺氧对培养肺动脉平滑肌细胞CaSR表达和细胞增殖及凋亡的影响及其信号传导通路（2）研究方法1）肺动脉张力的测定：15页Wister2%（2g/kg4℃Hepes0.3-0.7mm周围脂肪和结缔组有4mlKrebs95%O2-5%CO230min内逐渐给肺动脉环负荷0.3g的基础张力，平衡1h后，分别测定不同条件下的张力。,RomanRJ,JacobsER(1998)TissuesourcesofcytochromeWister2%（2g/kg4℃Hepes0.3-0.7mm周围脂肪和结缔组有4mlKrebs95%O2-5%CO230min内逐渐给肺动脉环负荷0.3g的基础张力，平衡1h后，分别测定不同条件下的张力。,RomanRJ,JacobsER(1998)TissuesourcesofcytochromeP4504Aand20-HETExynthesesinrabbitlungs,AmJRespirCellMolBiol,19,121-128】2）肺动脉平滑肌细胞的原代及传代培养：[2]200g2ml醛麻醉。将麻醉后的大鼠固定于手术台，用棉对大鼠表面皮肤进行。沿着大鼠剑突部位剪开胸腔，心脏和肺部，用镊子轻提心脏，沿处取下肺部，至于PBS缓冲液中。将肺叶固定于硅胶板上，用显微手术剪在体式显微镜下取出远端肺动脉，去内皮后用剪刀将剪成碎块，置于Ⅱ型胶原酶中消化成絮状。用20%DMEM高糖培养液终止消化后，用20005分钟，取下层沉淀，用培养液重悬，放于培养瓶中培养。隔天进行换液，一周后进行鉴定。2-460%左右融合时，换无血清培养24h，进行实验。LÜChang-Lian,YEHong,TANG,ZHUDa-Ling,(2005)ERK1/2signalingpathwayisinvolvedinacid-inducedhypoxiapulmonaryvosoconstriction,ActaPhysiologicaSinica,57(5):606-611.】3）肺动脉平滑肌细胞鉴定α-actin免疫组化染色)：取正常培养，未加任何处理的肺动脉平滑肌细胞培养在多聚赖氨酸处理的盖玻片上，纯固定15min后，PBS，0.5%H2O2稀释的甲醇室温作用20min，灭活内源性酶，PBS两次。滴加正常山羊血清，室温作用20in。滴加抗鼠α肌动蛋白抗体（1：104℃过夜。PS3次，滴37℃孵育30min，PBS洗3次。滴加SABC，37℃孵育20min，DAB显色10min。自来水冲洗，苏木素复染，二甲苯透明，封片，光镜下观察摄片。4）大鼠缺氧细胞模型的：培养的肺动脉平滑肌细胞置于的可封闭的有机2495N2、2%O2、3%CO2的混合气体，37恒温浴箱中。5）大鼠缺氧在体模型的：健康雄性大鼠，体重为150-350g，正常组吸入大气,氧气分数为(FiO2)21.0%。缺氧组大鼠置（下图），103d、7d、14d、21d。。缺氧箱上有通气孔可使缺氧箱内外空气相通，氧气器检测缺氧箱内氧浓度，并自动控制氮16页SPB-3SPB-3SPN-300过程产生氮气，氮气经出进入到缺氧箱内，氮气的量由氧气器根据氧气分数的大小而自动CO29dCO2、水蒸气分别用氧化钙和无水氯化钙吸收，排出的氨气由硼酸吸收，大鼠自由采食和饮水。即成为缺氧模型。氧化钙，无水氯化钙，硼酸的量自行掌握，不要出现雾气，气味为宜。缺氧箱示意图al.Toleranceofthedevelopinghearttoischemia:impactofhypoxemiafrombirth.AmJPhysiol,（1995）,268:H1165-11731】3d、7d、14d21d3d明显升高和缺氧性肺7dSPB-3SPB-3SPN-300过程产生氮气，氮气经出进入到缺氧箱内，氮气的量由氧气器根据氧气分数的大小而自动CO29dCO2、水蒸气分别用氧化钙和无水氯化钙吸收，排出的氨气由硼酸吸收，大鼠自由采食和饮水。即成为缺氧模型。氧化钙，无水氯化钙，硼酸的量自行掌握，不要出现雾气，气味为宜。缺氧箱示意图al.Toleranceofthedevelopinghearttoischemia:impactofhypoxemiafrombirth.AmJPhysiol,（1995）,268:H1165-11731】3d、7d、14d21d3d明显升高和缺氧性肺7d14d肥大性改变。【参见：胡瑞成,戴爱国,谭双香,等.缺氧性肺动脉高压发病中肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡变化[J].大学学报,2001,29(5):445-448】检测模型成功的标准：①HE染色观察肺动脉管壁结构的改变。②透射电镜观察肺动脉管壁超微结构的变化。③以右心导管法测定肺动脉脉传感器与powerlab多导生理17页④固定48h,沿沟除去心房及大平称量(RVHI):RVHI=游离壁)×100%。⑤肺小,HE染色,光镜下观察肺小 重塑情况取直径100μm左右的肺动脉,用ICM-100细胞图像分析系统进行形态计量分析,以壁横断面积占(WA%)作为衡量缺氧性肺重塑的指标。,别毕华,张珍祥,等.胰岛素样生长因子在低氧性肺动脉高压大鼠心肺内表达的观察[J].中华结核和呼吸杂志,1999,22(7):422】6）Westernblot4012000为标准，用Bradford20μg蛋白样品，10%SDS-PAGE电泳，100V转移1h至硝酸纤维素薄膜,放入封闭液中37℃封闭1④固定48h,沿沟除去心房及大平称量(RVHI):RVHI=游离壁)×100%。⑤肺小,HE染色,光镜下观察肺小 重塑情况取直径100μm左右的肺动脉,用ICM-100细胞图像分析系统进行形态计量分析,以壁横断面积占(WA%)作为衡量缺氧性肺重塑的指标。,别毕华,张珍祥,等.胰岛素样生长因子在低氧性肺动脉高压大鼠心肺内表达的观察[J].中华结核和呼吸杂志,1999,22(7):422】6）Westernblot4012000为标准，用Bradford20μg蛋白样品，10%SDS-PAGE电泳，100V转移1h至硝酸纤维素薄膜,放入封闭液中37℃封闭1h；一抗4℃过TBST液孵育，作为对照。反复洗膜后，将膜与碱性磷酸酶(AP)标Westernblotting印迹观察，用图像分析测定各带吸(A)值作定量分析。【参见我们已的：21.ZhangWH,FuSB,XuCQ（）etal.Involvementofcalcium–sensingreceptorinischemia/reperfusion–inducedapoptosisinratcardiomyocytes. BiochemiacalandBiophysicalResearchCommunications2006,347:872-88125.LuF,ZhangW,XuC（）etal.Calcium-SensingReceptorsInduceApoptosisinRatCardiomyocytesviatheEndo(sarco)plasmicReticulumPathwayduringHypoxia/Reoxygenation.BasicClinPharmacolToxicol.2009Dec22.[Epubaheadofprint]26.ZhangWH,LuFH,XuCQ（）etal.Post-conditioningprotectsratcardiomyocytesviaPKC-mediatedcalcium-sensingreceptors.BiochemiacalandBiophysicalResearchCommunications2007,361:659-66427.WangLN,WangC,XuCQ（ ）etal.Involvementofcalcium-sensingreceptorincardiachypertrophy-inducedbyangiotensinIIthroughcalcineurinpathwayinculturedneonatalratcardiomyocytes.BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications2008,369(2):584-58928.GuoJ,LiHZ,XuCQ（）etal.Increasedexpressionofcalcium-sensingreceptorsinducedbyox-LDLamplifiesapoptosisofcardiomyocytesduringsimulatedischaemia–reperfusion.ClinicalandExperimentalPharmacologyandPhysiology(2010)37,e128–e1357）RT-PCRCaSRmRNA肺动脉低温充分匀浆后，用Trizol试剂抽提总RNA，取总RNA5μL，在20μL逆转录体系中合成cDNA，以5μLcDNA为模板加入靶上下游引物，在50μL体系中进行PCR扩增。18页【参见我们已的 ：21.ZhangWH,FuSB,XuCQ（）etal.Involvementofcalcium–sensingreceptorinischemia/reperfusion–inducedapoptosisinratcardiomyocytes. BiochemiacalandBiophysicalResearchCommunications2006,347:872-88128.GuoJ,LiHZ,【参见我们已的 ：21.ZhangWH,FuSB,XuCQ（）etal.Involvementofcalcium–sensingreceptorinischemia/reperfusion–inducedapoptosisinratcardiomyocytes. BiochemiacalandBiophysicalResearchCommunications2006,347:872-88128.GuoJ,LiHZ,XuCQ（）etal.Increasedexpressionofcalcium-sensingreceptorsinducedbyox-LDLamplifiesapoptosisofcardiomyocytesduringsimulatedischaemia–reperfusion.ClinicalandExperimentalPharmacologyandPhysiology(2010)37,e128–e1358）免疫荧光技术检测CaSR蛋白表达的组织和细胞细胞（肺动脉平滑肌细胞4%6孔培养板内）0.1MPBS冲洗，4min，山℃)；一抗孵育，4PBS代替一抗；0.1MPBS3IgG371h；PBS3次，荧光显微镜下观察。组织（肺动脉锡箔纸模具中，模具中充满冰冻包埋剂，迅速置于液氮中，冰冻切片机切片，后，PBS，0.5%2220inPBS20min。4℃过夜。PBS3次，滴加生物素标记的山羊抗兔二抗，37℃孵育30min，PBS洗3次，抗荧光淬灭剂封片。荧光显微镜下观察。9）用流式细胞技术检测平滑肌增殖和凋亡情况分别取各组培养的肺动脉平滑肌细胞，经0.25%胰蛋白酶消化后，用PBS洗涤2次，调整细胞密度为1×106/L100μlBindingBuffer和FITC标记的30minPI(50μg/ml)5μl5min400μlPI=(S+G2/M)/(S+G2/M+G0/G1)，计算细胞增殖指数。同时观察细胞凋亡情况。10）激光扫描共聚焦显微镜检测心肌细胞游离钙浓度Ca2+敏观察CaSR不同的激动剂及缺氧对细胞内钙的影响。PASMCs首先用5–10μMFluo-3AM（先用二甲基。正常台氏液含有（mM）：137NaCl,5.4KCl,2CaCl2,1MgCl2,10HEPES,and10glucose,pH7.4NaOH调节)。然后，PASMCs用台氏液彻底冲洗，以便移除细胞外Fluo-3AM，并置于细胞池静止15–30min，使脱脂。最后用ZeissLSM-510倒置激光显微镜激光图像。用488nm氩激光激发，用505nm测量。用行扫描模式（扫描速度：0.075μm/像素，512，2ms间隔），在加药前后对同一培养皿内来自不同细胞的图19页像进行。通过声光可调滤波器将激光减弱到最大功率(25mW)的1%，使漂白作用和激光对细胞的Ca2+损伤降到最低。那些在实验结束时对含有10mM和0.5mM不发生反应的细胞被抛弃。所有的实验均在室温下进行。Wei-MinZhang,Mo-JunLin,andJamesS.K.Sham.Endothelin-1andIP3InducedCa2+SparksinPulmonaryArterialSmoothMuscleCells.JCardiovascPharmacol™2004;44(suppl1):S121–S124】（3）可行性分析1）理论可行性：一般认为，收缩、重构以及血栓形成是肺动脉高压形成的主要病理生理基础。文献报道，慢性缺氧时瞬时受体电位(TRPC)性阳离子通道和受体性阳离子通道在肺动脉平滑肌表达上调，可能是缺氧性肺动脉高压的一个新机制(Mo-JunLin,etal.ChronicUpregulationofStore-OperatedandReceptor-OperatedCa2+ChannelsinPulmonaryArterial像进行。通过声光可调滤波器将激光减弱到最大功率(25mW)的1%，使漂白作用和激光对细胞的Ca2+损伤降到最低。那些在实验结束时对含有10mM和0.5mM不发生反应的细胞被抛弃。所有的实验均在室温下进行。Wei-MinZhang,Mo-JunLin,andJamesS.K.Sham.Endothelin-1andIP3InducedCa2+SparksinPulmonaryArterialSmoothMuscleCells.JCardiovascPharmacol™2004;44(suppl1):S121–S124】（3）可行性分析1）理论可行性：一般认为，收缩、重构以及血栓形成是肺动脉高压形成的主要病理生理基础。文献报道，慢性缺氧时瞬时受体电位(TRPC)性阳离子通道和受体性阳离子通道在肺动脉平滑肌表达上调，可能是缺氧性肺动脉高压的一个新机制(Mo-JunLin,etal.ChronicUpregulationofStore-OperatedandReceptor-OperatedCa2+ChannelsinPulmonaryArterialCellsANovelMechanismofHypoxicPulmonaryHypertension.CircRes2004;95:496-505)。是启动缺氧性肺收缩的关键 活途径和Ca2+进入通路的JeremyPTWard1andIvanFMcMurtry.Mechanismsofhypoxicpulmonaryvasoconstrictionandtheirrolesinpulmonaryhypertension:newfindingsforanoldproblemCurrentOpinioninPharmacology2009,9:287–296)。CaSR激活导致细胞内钙升高的机制，也是通过钙库（SOCC）和受体（ROCC）。我们前期研预实验也初步证实缺氧能使肺动脉平滑肌CaSR表达增多。因此，我们提出的“CaSR通过促进肺在理论上是可行的。收缩和重构而参与缺氧性肺动脉高压的发生”的假说2）方法可行性：课题组所在具有开展本需的一切仪器设备（见下面的工作条件项。拟采用的所有实验 和技术，均为课题组成员所熟悉和掌握【15，20-28。3）可行性：项目申请人徐长庆教授为博士和CaSR的研究方面有一定建树（见研究基础）。现有在研博士85外，还有从事多年肺纤维化发生机制研究的临床医生（实验的要求。）参加，这些构成能完全能满足开展4.本项目的特色与创新之处（1）研究领域的创新：20页中在心脏和体循环系统，对肺动脉的研究还是一片“地”（参加前面立题依据中检索结果）。CaSRCaSR（信号通路）【30】。我们国内这两个小组的研究首次证明肺动脉平滑肌有功能性钙敏感受体的表达，这不仅填补了国内外的研究空白，也拓宽了CaSR的知识内涵，为后续研究奠定了理论和实验基础。（2）揭示缺氧性肺动脉高压发生机制的新靶点：在缺氧性肺动脉高压的发生发展过程中，CaSR是否发挥重要作用,目前国内外还没有相关的研究。胡清华教授的博士罗友根副教授去年中标一项自然科学基金课题“钙敏感受体在缺氧诱Aβ过量生成中作用及其。本课题以大鼠慢性在体缺氧模型和肺动脉平CaSR的表达变化与张力、重构（细胞增殖和细胞凋亡）的关系及其相关信号传导通路。我们的课题和罗友根副教授的课题的研究大方向相同，但是研究的内容和侧重点不同，可谓之“优势互补，相得益彰”。我们的研究成果有望成为揭示缺氧性肺动脉高压发生的一种新机制，也将为缺氧性肺动脉高压的防治提供药物作用新靶点。5.年度研究计划及预期研究结果（包括拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）CaSR在大鼠肺动脉平滑肌和细胞的表达和 i中在心脏和体循环系统，对肺动脉的研究还是一片“地”（参加前面立题依据中检索结果）。CaSRCaSR（信号通路）【30】。我们国内这两个小组的研究首次证明肺动脉平滑肌有功能性钙敏感受体的表达，这不仅填补了国内外的研究空白，也拓宽了CaSR的知识内涵，为后续研究奠定了理论和实验基础。（2）揭示缺氧性肺动脉高压发生机制的新靶点：在缺氧性肺动脉高压的发生发展过程中，CaSR是否发挥重要作用,目前国内外还没有相关的研究。胡清华教授的博士罗友根副教授去年中标一项自然科学基金课题“钙敏感受体在缺氧诱Aβ过量生成中作用及其。本课题以大鼠慢性在体缺氧模型和肺动脉平CaSR的表达变化与张力、重构（细胞增殖和细胞凋亡）的关系及其相关信号传导通路。我们的课题和罗友根副教授的课题的研究大方向相同，但是研究的内容和侧重点不同，可谓之“优势互补，相得益彰”。我们的研究成果有望成为揭示缺氧性肺动脉高压发生的一种新机制，也将为缺氧性肺动脉高压的防治提供药物作用新靶点。5.年度研究计划及预期研究结果（包括拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）CaSR在大鼠肺动脉平滑肌和细胞的表达和 i时完成大鼠慢性缺氧模型的和相应指标检测。2012.1—2012.12继续完成大鼠慢性缺氧模型的和相应指标检测，同时 肺动脉平滑肌细胞缺氧模型，观测CaSR表达规律，揭示它与张力、重构（细胞增殖和细胞凋亡）的关系及其信号传导通路。2013.1—2013.12一步补充相应实验，力求在理论上有所发现、 医科大学主办1次心 系统钙敏感受体的2-3月时间进行课题总结、撰写和成果申报工作。预期研究结果：（1）首次证实在大鼠肺动脉平滑肌组织和细胞有钙敏感受体的功能性表达存在。CaSR收缩和重构的机制，从而从新的视觉阐明缺氧性肺动脉高压的发生机制。21页（3）预期研究2SCI收录，并申报科技成果奖。（二）研究基础与工作条件1、工作基础七五、八五攻关课题、863课题和近20项自然科学基金课题，20（1）在心肌钙敏感受体（CaSR）的研究中的部分成果在多项解心肌细胞和原代培养乳鼠心肌细胞为对象，采用高效液相色谱、流式细胞仪、膜片钳、激光共聚（3）预期研究2SCI收录，并申报科技成果奖。（二）研究基础与工作条件1、工作基础七五、八五攻关课题、863课题和近20项自然科学基金课题，20（1）在心肌钙敏感受体（CaSR）的研究中的部分成果在多项解心肌细胞和原代培养乳鼠心肌细胞为对象，采用高效液相色谱、流式细胞仪、膜片钳、激光共聚、免疫荧光、TUNEL2003（CaSR）的研究中取得了一些研究成果{15.20-28}：1)首次发现CaSR在大鼠心肌组织中存在及不同鼠龄的表达规律；2）首次发现CaSR激活通过G蛋白-PLC-IP3通路引起细胞内钙增加，参与心肌钙稳态和兴奋－收缩偶联的调控，并是细胞钙超载的发生机制之一；3）首次揭示心肌缺血-再灌注时CaSR表达规律和关键作用，通过激活MAPKs（包括p38MAPK,22页JNK和ERK）c-Caspase-3Fas通路，诱导心肌细胞凋亡；MorphologicalchangesofJNK和ERK）c-Caspase-3Fas通路，诱导心肌细胞凋亡；Morphologicalchangesofcardiactissueindifferentgroups(×400).A:control;B:anoxia;C:A/R;D:NiCl2+CdCl2+A/R;E:GdCl3+NiCl2+CdCl2+A/R.ReresentativeillustrationofTUNELstainingincardiomyocytes(×400).A:control;B:anoxia;C:A/R;D:NiCl2+CdCl2+A/R;E:GdCl3+NiCl2+CdCl2+A/R.#P<0.05vs4）首次发现PKCε介导的CaSR活性改变参与了缺血后适应的心肌保护作用；23页5）首次发现CaSR通过神经钙调磷酸酶（CaN）参与AngII诱导的大鼠心肌肥大；6）首次发现动脉粥样硬化大鼠心肌钙敏感受体的表达增加，可促进细胞凋亡，增加对心肌梗死的敏感性。迄今，已相关SCI16（详见申请人简介）。其中自然基金项目《大鼠心肌细胞钙敏感受体的生物学活性及其在心肌缺血/再灌注损伤中的作用》已获20085）首次发现CaSR通过神经钙调磷酸酶（CaN）参与AngII诱导的大鼠心肌肥大；6）首次发现动脉粥样硬化大鼠心肌钙敏感受体的表达增加，可促进细胞凋亡，增加对心肌梗死的敏感性。迄今，已相关SCI16（详见申请人简介）。其中自然基金项目《大鼠心肌细胞钙敏感受体的生物学活性及其在心肌缺血/再灌注损伤中的作用》已获2008年黑龙江省自然科学二等奖。24页（2）有关肺动脉CaSR的前期实验和预实验结果CaSR的假设，本课题开展了有关肺动脉平滑肌细胞有CaSR功能表达的前期实验，并对CaSR在大鼠缺（2）有关肺动脉CaSR的前期实验和预实验结果CaSR的假设，本课题开展了有关肺动脉平滑肌细胞有CaSR功能表达的前期实验，并对CaSR在大鼠缺氧肺动脉收缩及重构作了部分初步预实验，结果如下：（1RTPCR和WesternblotCaSRL-Ca2+呈剂量依赖性引起肺动脉平滑肌肌张力升高。25页QSHaoJHQSHaoJHXingWJ,GuoJ,LiHZ,BaiSZ,LiHXYangLY,WangRandXuCQ（extracellularcalcium-sensingreceptorinratpulmonaryarterysmoothmusclecells.AMJPHYSIOL-LUNGCinsubm）。（2）采取上述方法，观察到急性缺氧（1-5h）或慢性缺氧（12-48h）时大鼠肺动脉平滑肌细胞CaSRMTT（PCNA）CaSR26页激活均可促进细胞增殖。上述这些研究成果，项目的顺利实施创造了条件，打下了良好的基础。2、工作条件申请者所在的为黑龙江省和科技部共建培育基地。本设备(如膜片钳仪，钳仪，数模转换仪，电极拉制器，倒置显微镜，三维推进器，恒温控制系统等，pclamp软件等)；电镜，生物学检测的配套相应设备(如PCR冰箱，DNA仪，DNA仪，细胞培养室所需的各种设备，层析和色谱技术所需的各种设备，制冰机等)，多道生理仪器。仪，双光束紫外分光光度仪，液闪计数仪等进口上述工作条件，完全能满足开展本项目所需的全部实验技术要求。27页激活均可促进细胞增殖。上述这些研究成果，项目的顺利实施创造了条件，打下了良好的基础。2、工作条件申请者所在的为黑龙江省和科技部共建培育基地。本设备(如膜片钳仪，钳仪，数模转换仪，电极拉制器，倒置显微镜，三维推进器，恒温控制系统等，pclamp软件等)；电镜，生物学检测的配套相应设备(如PCR冰箱，DNA仪，DNA仪，细胞培养室所需的各种设备，层析和色谱技术所需的各种设备，制冰机等)，多道生理仪器。仪，双光束紫外分光光度仪，液闪计数仪等进口上述工作条件，完全能满足开展本项目所需的全部实验技术要求。27页3、申请人简介申请人徐长庆教授学历和研究工作简历1965.81970.7，1970.7－1979.21979.2－2006.6黑龙江省拜泉县医院、绥化地区结核医院任内科医师哈医大病生教研室助教、讲师、副教授、教授；副 、；博士生导师2006.6哈医大心脏病理生理研究室、教授、博士生导师1988.12－1990.11994.3－1994.8心脏病研究中心学习膜片钳技术；在生物膜与生物工程，进行丹参酮对豚鼠心肌细胞钙离子电流影响的研究；2001.8－2002.5作为高级学者在RuiWANG从事心肌钙敏感受体等研究，在蒙特利尔大学心研究钾通道与心律失常的关系。ZhiguoWANG学术美国纽约国际；美国科学促进学会国际会员；国际心脏研究会中国分会执行委员；中国病理生理学会理事；中国病理生理学会心专业委员会委员；中国病理生理学会教育工作委兼病理生理学专业委员会委员；黑龙江省对俄科技合作咨询委员会委员；中国病理生理杂志编委；国际杂志“HEARTVESSELS”、中华心病杂志、特约审稿；863；自然科学；黑龙基金课题评审 ；（中华医学）科技奖评审委员；教育部科技进步奖评审江省优秀中青年 。入选世界名人录3、申请人简介申请人徐长庆教授学历和研究工作简历1965.81970.7，1970.7－1979.21979.2－2006.6黑龙江省拜泉县医院、绥化地区结核医院任内科医师哈医大病生教研室助教、讲师、副教授、教授；副 、；博士生导师2006.6哈医大心脏病理生理研究室、教授、博士生导师1988.12－1990.11994.3－1994.8心脏病研究中心学习膜片钳技术；在生物膜与生物工程，进行丹参酮对豚鼠心肌细胞钙离子电流影响的研究；2001.8－2002.5作为高级学者在RuiWANG从事心肌钙敏感受体等研究，在蒙特利尔大学心研究钾通道与心律失常的关系。ZhiguoWANG学术美国纽约国际；美国科学促进学会国际会员；国际心脏研究会中国分会执行委员；中国病理生理学会理事；中国病理生理学会心专业委员会委员；中国病理生理学会教育工作委兼病理生理学专业委员会委员；黑龙江省对俄科技合作咨询委员会委员；中国病理生理杂志编委；国际杂志“HEARTVESSELS”、中华心病杂志、特约审稿；863；自然科学；黑龙基金课题评审 ；（中华医学）科技奖评审委员；教育部科技进步奖评审江省优秀中青年 。入选世界名人录(Who’sWhointheWorld)。承担课题主家自然科学基金课题5项:（5）《钙敏感受体对动脉粥样硬化大鼠急性心肌梗死易感性的影响和保护研究》（3087101，200920；（4在研已结题[（3]；已结题（30470688，2005-200（2（30370577，2004-200（1（39570305，1996-1991项：已结题28页（1）《钙敏感受体在大鼠动脉粥样硬化模型诱发的急性心肌梗死中的作用及机制》在研（20070226012，2008－2010）主持其他省、厅级课题5（略）已结题获奖情况0（9：9）徐长庆，2008，第一名)；8）杜智敏、杨宝峰、周晋、孙建平、张波、徐长庆IK1调节剂对改善心功能的研究》（黑龙江省，2004，第六名）7）徐长庆、朱世军、王孝铭、杨宝峰、傅国辉：《氧自由基在心肌缺血/再灌注损伤中的中心作用及心肌保护研究》(黑龙江省自然科学二等奖，2003，第一名)；6）杨宝峰、罗大力、周晋、何树庄、王志国、徐长庆：（，2001，；（1）《钙敏感受体在大鼠动脉粥样硬化模型诱发的急性心肌梗死中的作用及机制》在研（20070226012，2008－2010）主持其他省、厅级课题5（略）已结题获奖情况0（9：9）徐长庆，2008，第一名)；8）杜智敏、杨宝峰、周晋、孙建平、张波、徐长庆IK1调节剂对改善心功能的研究》（黑龙江省，2004，第六名）7）徐长庆、朱世军、王孝铭、杨宝峰、傅国辉：《氧自由基在心肌缺血/再灌注损伤中的中心作用及心肌保护研究》(黑龙江省自然科学二等奖，2003，第一名)；6）杨宝峰、罗大力、周晋、何树庄、王志国、徐长庆：（，2001，；研究》（2000；4）杨宝峰、何树庄、周晋、李玉荣、徐长庆（黑龙江省2000；3）杨宝峰、李玉荣、徐长庆、杜智敏、罗大力：《几种中药抗心律失常作用与钾离子通道关系的研究》（科技进步三等奖，1999；2）李玉荣、杨宝峰、徐长庆、杜智敏、李宝馨：《几种中药抗心律失常作用与钾离子通道亚型关系的研究》（，1999；1）王孝铭、张力、付国辉、徐长庆、李相忠：《丹参对心肌保护作用的细胞及 机理研究》（黑龙江省科技进步三等奖，1993，第四名）情况5年来，在国内外期刊科研SCI20Yang）.Calcium-SensingReceptorsInduceApoptosisinRatCardiomyocytesviatheReticulumPathwayduringHypoxia/Reoxygenation.BasicClinPharmacolToxicol.200