几丁质酶活性检测试剂盒说明书-微量法UPLC-MS-4231

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页几丁质酶活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：UPLC-MS-4231规格：100T/48S

微量法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体5mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：用前摇匀。2N-2.27mL10μmol/mL产品说明：几丁质酶要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官（例如乌贼的软骨），以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶（EC4）可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与3,5-二硝基水杨酸产生棕红色化合物，在540nm处有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了几丁质酶的活性。Chitin

Chitinase

N-AcetylglucosamineN-Acetylglucosamine+3,5-DinitrosalicylicAcid BrownishRedCompound（540nm）2-3//96//操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1（L为1~10（0.g1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清，置于冰上待测。2104个（为50~10：1建议001L功率20373100020min3、培养液等液体样本的处理：直接测定。二、测定步骤1、可见分光光度计/酶标仪预热30min。波长调至540nm，分光光度计用蒸馏水调零。2、将标准溶液用蒸馏水稀释为5、4、3、2、1μmol/mL的标准溶液备用，具体稀释可参考下表：序号）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL））11050050052104006004310300700341020080025101009001备注：实验中每个标准管需100µL标准溶液。1、在EP管中分别加入：试剂名称测定管对照管标准管空白管样本（μL）100100--标准溶液（μL）--100-蒸馏水（μL）100试剂一（μL）100-100100涡旋混匀，置于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确水浴1h，然后置于沸水浴中煮沸5min试剂一（μL）-100--8000rpm10min160μLEP试剂二（μL）4040404010min（）96540nmAAAAΔA=A-A=A-A和空白管只需测1-2次。三、几丁质酶活的计算1、根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。2、样本重量计算37℃1μmolN-（U/g样样3、蛋白质浓度计算37℃mg1μmolN-（U/mg样样4、细胞数量计算1041μmolN-（U/104样样x5、培养液体积计算mL1μmolN-样样=xV样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，1h；细胞数量：以万计。注意事项：1、反应结束后尽快进行比色。