海藻糖合成酶（TS）活性检测试剂盒说明书-微量法UPLC-MS-5022

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页海藻糖合成酶（TS）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。UPLC-MS-5022100T/48S

微量法试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体6mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体15mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：16mL（）2-8℃2周。2、工作液的配制：临用前将试剂三和试剂四1:1等体积混合，根据样本实际所需用量现配现用。31mL50μmol/mL2-8℃26.25μmol/mL25μL50μmol/mL175μL）海藻糖是功能性低聚糖，具有非还原性、保湿性、热酸稳定性、抗冻结性等特性，是细胞在不良环境条件下产生的一种重要的抗逆应激物之一，它对生物大分子和生物组织有着非特异性的保护作用。海藻糖合成酶（TrehaloseSynthase，TS）能催化麦芽糖生成海藻糖，是海藻糖生物合成的关键途径之一。本试剂盒使用糖化酶分解剩余麦芽糖为葡萄糖，通过葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量，按照麦芽糖减少的量表示海藻糖合成酶的活性。Maltose TS

TrehaloseMaltose（Unreacted）

Glycosylase

GlucoseGlucoseH2O2+4-AminoantipyrinePhenol

GODPOD

GluconicAcid+H2O2ColoredCompound(Quinonemine)(505nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、恒温水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、蒸馏水。一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细胞（功率200W，超声3s，间隔9s，重复30次）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清（若上清不够澄清，建议重复上述离心步骤），置于冰上待检。:1:5~100.1g1mL8000g，4℃10min（1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。2、操作表：（EP）：加入试剂（μL）对照管测定管标准管空白管样本5050--试剂一-50--标准溶液--50-蒸馏水--5010025min--试剂一50试剂二100100100100（12510000g离心10（在EP96）加入试剂（μL）对照管测定管标准管空白管上清液20202020工作液18018018018030505nmAAAAΔA=A-AΔA=A-A注：空白管和标准管只需测1~2次。三、酶活性计算1、按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化1nmol麦芽糖生成1nmol海藻糖定义为一个酶活力单位。TS酶活（U/mgprot）=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（V样×Cpr）÷T×F×1000÷2=26.041×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr×F2、按样本质量计算：g1nmol1nmolTS（U/g）C×ΔA测定÷ΔA样÷（V样样总=26.041×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F3、按细菌或细胞数量计算：单位的定义：每104个细菌或细胞每分钟催化1nmol麦芽糖生成1nmol海藻糖定义为一个酶活力单位。TS酶活（U/104cell）=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（V样÷V样总×cell）÷T×F×1000÷2=26.041×ΔA测定÷ΔA标准÷cell×FC6.25μmol/mL；V1mL；V0.05mL；T120mi