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电话:400-998-2324邮箱:service_uplc_ms@163.com网址:本产品仅供科学研究使用!请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途!-上海液质检测技术有限公司第第页海藻糖合成酶(TS)活性检测试剂盒说明书注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。UPLC-MS-5022100T/48S
微量法试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体6mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体15mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:16mL()2-8℃2周。2、工作液的配制:临用前将试剂三和试剂四1:1等体积混合,根据样本实际所需用量现配现用。31mL50μmol/mL2-8℃26.25μmol/mL25μL50μmol/mL175μL)海藻糖是功能性低聚糖,具有非还原性、保湿性、热酸稳定性、抗冻结性等特性,是细胞在不良环境条件下产生的一种重要的抗逆应激物之一,它对生物大分子和生物组织有着非特异性的保护作用。海藻糖合成酶(TrehaloseSynthase,TS)能催化麦芽糖生成海藻糖,是海藻糖生物合成的关键途径之一。本试剂盒使用糖化酶分解剩余麦芽糖为葡萄糖,通过葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量,按照麦芽糖减少的量表示海藻糖合成酶的活性。Maltose TS
TrehaloseMaltose(Unreacted)
Glycosylase
GlucoseGlucoseH2O2+4-AminoantipyrinePhenol
GODPOD
GluconicAcid+H2O2ColoredCompound(Quinonemine)(505nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、恒温水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、蒸馏水。一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细胞(功率200W,超声3s,间隔9s,重复30次);然后8000g,4℃,离心10min,取上清(若上清不够澄清,建议重复上述离心步骤),置于冰上待检。:1:5~100.1g1mL8000g,4℃10min(1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。2、操作表:(EP):加入试剂(μL)对照管测定管标准管空白管样本5050--试剂一-50--标准溶液--50-蒸馏水--5010025min--试剂一50试剂二100100100100(12510000g离心10(在EP96)加入试剂(μL)对照管测定管标准管空白管上清液20202020工作液18018018018030505nmAAAAΔA=A-AΔA=A-A注:空白管和标准管只需测1~2次。三、酶活性计算1、按样本蛋白浓度计算:单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化1nmol麦芽糖生成1nmol海藻糖定义为一个酶活力单位。TS酶活(U/mgprot)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷(V样×Cpr)÷T×F×1000÷2=26.041×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr×F2、按样本质量计算:g1nmol1nmolTS(U/g)C×ΔA测定÷ΔA样÷(V样样总=26.041×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F3、按细菌或细胞数量计算:单位的定义:每104个细菌或细胞每分钟催化1nmol麦芽糖生成1nmol海藻糖定义为一个酶活力单位。TS酶活(U/104cell)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷(V样÷V样总×cell)÷T×F×1000÷2=26.041×ΔA测定÷ΔA标准÷cell×FC6.25μmol/mL;V1mL;V0.05mL;T120mi
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