高效液相色谱法培训课件

高效液相色谱法高效液相色谱法1第一节概述回高效液相色谱法(HPLC)是60年代末以经典液相色谱法为基础,引入了气相色谱的理论与实验方法,流动相用高压泵输送采用高效固定相和在线检测等手段发展而成的分离分析方法。回与气相色谱法相比具有:适用范围广,样品预处理简单,分离效率高,流动相选择范围广,检测方法多为非破坏性的,流出组分可回收等优点。第一节概述2液-固吸附液一液分配「正相色谱般反相色谱反相色谱离子对色谱离子抑制色谱般离子交换色谱离子交换色谱离子色谱HPLC氨基酸分析凝胶渗透色谱空间排斥色谱凝胶过滤色谱胶束色谱假相色谱环糊精色谱亲合色谱,手性色谱,毛细管电泳液-固吸附3正相色谱(normalphase)流动相极性小于固定相极性的分配色谱法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:氨基柱、氰基柱、硅胶柱。常用流动相为极性小的有机溶剂反相色谱(reversedphase)流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法。常用的分析柱有ODS(C18),C8,C2o常用流动相为甲醇-水,乙腈-水。正相色谱(normalphase)4离子抑制色谱(Ionsuppressionchromatography)-—调节流动相的pH值,抑制组分的解离,增加组分在固定相中的溶解度,改善峰形,以达到分离有机弱酸和弱碱的目的。离子对色谱(ionpairchromatography)将反离子加入流动相中,与呈解离状态的被测物作用,生成脂溶性的中性离子对络合物从而増加了被测物在非极性固定相中的溶解度,改善分离效果,达到分离目的。常用反离子有:季铵盐用于酸类烷基磺酸盐——用于碱类离子抑制色谱(Ionsuppression5回离子色谱法(ionchromatography)离子色谱是由经典的离子交换色谱发展起来的一种液相色谱技术,利用物质在离子交换柱上迁移的差异而达到分离,用于亲水性阴阳离子的测定。根据是否采用抑制柱,可分为抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱。回离子色谱法(ionchromatography)6空间排斥色谱(stericexclusion~)也称凝胶色谱,依据被分离组分分子尺寸与凝胶空径大小之间的相对关系而分离类似于分子筛作用。在一定分子线团尺寸内,分子越大,保留时间越短。凝胶渗透—一以有机溶剂为流动相凝胶过滤——以水溶液为流动相对于相同化学组成的高分子化合物,其分子尺寸大小与分子量成正比,因此凝胶色谱可以研究高分子化合物的分子量分布。空间排斥色谱(stericexclusion~)7胶束色谱(micellarchromatography)回表面活性剂在水中超过某一浓度(临界浓度)时,多余的表面活性剂不再溶解,聚集而成胶束(胶粒)。回以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系,不是真溶液;流动相中不含有机溶剂回因胶束色谱法的流动相是多相分散体系,在整个色谱体系中又增加了一相,故也被称为假相色谱(pseudophasechromatography)胶束色谱(micellarchromatography)8手性色谱(chiralchromatography)用于分离手性药物对映体的一种有效技术,可分为直接法和间接法两类直接法n手性固定相法(chiralstationaryphase;CSP手性流动相法(chiralmobilephaseadditive;CMPA间接法一手性试剂衍生化法chiralderivatizationreagent,CDR)手性色谱(chiralchromatography)9第二节高效液相色谱仪流动相高压泵脱气装置进样阀色谱柱检测器第二节高效液相色谱仪10高效液相色谱法培训课件11高效液相色谱法培训课件12高效液相色谱法培训课件13高效液相色谱法培训课件14高效液相色谱法培训课件15高效液相色谱法培训课件16高效液相色谱法培训课件17高效液相色谱法培训课件18高效液相色谱法培训课件19高效液相色谱法培训课件20高效液相色谱法培训课件21高效液相色谱法培训课件22高效液相色谱法培训课件23高效液相色谱法培训课件24高效液相色谱法培训课件25高效液相色谱法培训课件26高效液相色谱法培训课件27高效液相色谱法培训课件28高效液相色谱法培训课件29高效液相色谱法培训课件30高效液相色谱法培训课件31高效液相色谱法培训课件32高效液相色谱法培训课件33高效液相色谱法培训课件34高效液相色谱法培训课件35高效液相色谱法培训课件36高效液相色谱法培训课件37高效液相色谱法培训课件38高效液相色谱法培训课件39高效液相色谱法培训课件40高效液相色谱法培训课件41高效液相色谱法培训课件42高效液相色谱法培训课件43高效液相色谱法培训课件44高效液相色谱法培训课件45高效液相色谱法培训课件46高效液相色谱法培训课件47高效液相色谱法培训课件48高效液相色谱法培训课件49高效液相色谱法培训课件50高效液相色谱法培训课件51高效液相色谱法培训课件52高效液相色谱法培训课件53高效液相色谱法培训课件54高效液相色谱法培训课件55高效液相色谱法培训课件56高效液相色谱法培训课件57高效液相色谱法培训课件58高效液相色谱法培训课件59高效液相色谱法培训课件60高效液相色谱法培训课件61高效液相色谱法培训课件62高效液相色谱法培训课件63高效液相色谱法培训课件64高效液相色谱法培训课件65高效液相色谱法培训课件66高效液相色谱法培训课件67高效液相色谱法培训课件68高效液相色谱法培训课件69高效液相色谱法培训课件70高效液相色谱法培训课件71高效液相色谱法培训课件72高效液相色谱法培训课件73高效液相色谱法培训课件74高效液相色谱法培训课件75高效液相色谱法培训课件76高效液相色谱法培训课件77高效液相色谱法培训课件78高效液相色谱法培训课件79高效液相色谱法培训课件80高效液相色谱法培训课件81高效液相色谱法培训课件82高效液相色谱法培训课件83高效液相色谱法培训课件84高效液相色谱法培训课件85高效液相色谱法培训课件86高效液相色谱法培训课件87高效液相色谱法培训课件88高效液相色谱法培训课件89高效液相色谱法培训课件90高效液相色谱法培训课件91高效液相色谱法培训课件92高效液相色谱法培训课件93高效液相色谱法培训课件94高效液相色谱法培训课件95高效液相色谱法培训课件96高效液相色谱法培训课件97高效液相色谱法培训课件98高效液相色谱法培训课件99高效液相色谱法培训课件100高效液相色谱法培训课件101高效液相色谱法培训课件102高效液相色谱法高效液相色谱法103第一节概述回高效液相色谱法(HPLC)是60年代末以经典液相色谱法为基础,引入了气相色谱的理论与实验方法,流动相用高压泵输送采用高效固定相和在线检测等手段发展而成的分离分析方法。回与气相色谱法相比具有:适用范围广,样品预处理简单,分离效率高,流动相选择范围广,检测方法多为非破坏性的,流出组分可回收等优点。第一节概述104液-固吸附液一液分配「正相色谱般反相色谱反相色谱离子对色谱离子抑制色谱般离子交换色谱离子交换色谱离子色谱HPLC氨基酸分析凝胶渗透色谱空间排斥色谱凝胶过滤色谱胶束色谱假相色谱环糊精色谱亲合色谱,手性色谱,毛细管电泳液-固吸附105正相色谱(normalphase)流动相极性小于固定相极性的分配色谱法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:氨基柱、氰基柱、硅胶柱。常用流动相为极性小的有机溶剂反相色谱(reversedphase)流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法。常用的分析柱有ODS(C18),C8,C2o常用流动相为甲醇-水,乙腈-水。正相色谱(normalphase)106离子抑制色谱(Ionsuppressionchromatography)-—调节流动相的pH值,抑制组分的解离,增加组分在固定相中的溶解度,改善峰形,以达到分离有机弱酸和弱碱的目的。离子对色谱(ionpairchromatography)将反离子加入流动相中,与呈解离状态的被测物作用,生成脂溶性的中性离子对络合物从而増加了被测物在非极性固定相中的溶解度,改善分离效果,达到分离目的。常用反离子有:季铵盐用于酸类烷基磺酸盐——用于碱类离子抑制色谱(Ionsuppression107回离子色谱法(ionchromatography)离子色谱是由经典的离子交换色谱发展起来的一种液相色谱技术,利用物质在离子交换柱上迁移的差异而达到分离,用于亲水性阴阳离子的测定。根据是否采用抑制柱,可分为抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱。回离子色谱法(ionchromatography)108空间排斥色谱(stericexclusion~)也称凝胶色谱,依据被分离组分分子尺寸与凝胶空径大小之间的相对关系而分离类似于分子筛作用。在一定分子线团尺寸内,分子越大,保留时间越短。凝胶渗透—一以有机溶剂为流动相凝胶过滤——以水溶液为流动相对于相同化学组成的高分子化合物,其分子尺寸大小与分子量成正比,因此凝胶色谱可以研究高分子化合物的分子量分布。空间排斥色谱(stericexclusion~)109胶束色谱(micellarchromatography)回表面活性剂在水中超过某一浓度(临界浓度)时,多余的表面活性剂不再溶解,聚集而成胶束(胶粒)。回以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系,不是真溶液;流动相中不含有机溶剂回因胶束色谱法的流动相是多相分散体系,在整个色谱体系中又增加了一相,故也被称为假相色谱(pseudophasechromatography)胶束色谱(micellarchromatography)110手性色谱(chiralchromatography)用于分离手性药物对映体的一种有效技术,可分为直接法和间接法两类直接法n手性固定相法(chiralstationaryphase;CSP手性流动相法(chiralmobilephaseadditive;CMPA间接法一手性试剂衍生化法chiralderivatizationreagent,CDR)手性色谱(chiralchromatography)111第二节高效液相色谱仪流动相高压泵脱气装置进样阀色谱柱检测器第二节高效液相色谱仪112高效液相色谱法培训课件113高效液相色谱法培训课件114高效液相色谱法培训课件115高效液相色谱法培训课件116高效液相色谱法培训课件117高效液相色谱法培训课件118高效液相色谱法培训课件119高效液相色谱法培训课件120高效液相色谱法培训课件121高效液相色谱法培训课件122高效液相色谱法培训课件123高效液相色谱法培训课件124高效液相色谱法培训课件125高效液相色谱法培训课件126高效液相色谱法培训课件127高效液相色谱法培训课件128高效液相色谱法培训课件129高效液相色谱法培训课件130高效液相色谱法培训课件131高效液相色谱法培训课件132高效液相色谱法培训课件133高效液相色谱法培训课件134高效液相色谱法培训课件135高效液相色谱法培训课件136高效液相色谱法培训课件137高效液相色谱法培训课件138高效液相色谱法培训课件139高效液相色谱法培训课件140高效液相色谱法培训课件141高效液相色谱法培训课件142高效液相色谱法培训课件143高效液相色谱法培训课件144高效液相色谱法培训课件145高效液相色谱法培训课件146高效液相色谱法培训课件147高效液相色谱法培训课件148高效液相色谱法培训课件149高效液相色谱法培训课件150高效液相色谱法培训课件151高效液相色谱法培训课件152高效液相色谱法培训课件153高效液相色谱法培训课件154高效液相色谱法培训课件155高效液相色谱法培训课件156高效液相色谱法培训课件157高效液相色谱法培训课件158高效液相色谱法培训课件159高效液相色谱法培训课件160高效液相色谱法培训课件161高效液相色谱法培训课件162高效液相色谱法培训课件163高效液相色谱法培训课件164高效液相色谱法培训课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