淀粉酶的制备及活力测定课件

项目三淀粉酶的制备及活力测定任务1淀粉酶的制备及活力测定方案的制定生药1121张家敏2011423225一、淀粉酶淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。淀粉酶的种类很多，根据织物不同，设备组合不同，工艺流程也不同，目前所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等，由于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少，可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜明的环保特色。二、实验原理淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质从而被机体利用。淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可随机作用于淀粉中的α-1，4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的黏度降低，因此又称为液化酶。β-淀粉酶可从淀粉的非还原末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。三、实验器材及试剂1、材料萌发的小麦（或稻谷）种子（芽长约1cm）。2、仪器设备

分光光度计；离心机；恒温水浴（37℃，70℃，100℃）；具塞刻度试管；刻度吸管；100mL容量瓶2个；25mL比色管15支；试管8支；电子天平；研钵。3、试剂（均为分析纯）：

标准麦芽糖溶液（1mg/mL）：精确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100mL；3，5－二硝基水杨酸试剂：精确称取1g3，5－二硝基水杨酸1g，溶于20mL1mol/LNaOH溶液中，加入50mL蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水稀释至100mL。盖紧瓶塞，勿使CO2进入。若溶液混浊可过滤后使用；

0.1mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液：A液（0.1mol/L柠檬酸）：称取C6H8O7.H2O21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L；B液（0.1mol/L柠檬酸钠）：称取Na3C6H5O7.2H2O29.41g，用蒸馏水溶解并定容至1L。

取A液13.7mL与B液26.3mL混匀，即为0.1mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液；1％淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100mL0.1mol/LpH5.6的柠檬酸缓冲液中。四、实验步骤1.将萌发好的稻谷种子去壳，注意别把芽去掉，称取1g，置于研钵中。2.加入少量的石英砂和2mL的蒸馏水，研磨匀浆。3.将匀浆倒入离心管中，用6mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15至20分钟。每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。4.然后在3000转/分转速下离心10分钟。5.将上清液过滤，倒入100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即制得α-淀粉酶原液。装入试剂瓶中，贴标签，保存于低温冰箱中，为以后的实验使用。管号1234567麦芽糖标准液00.20.61.01.41.82.0蒸馏水2.01.81.41.00.60.20麦芽糖含量00.20.61.01.41.82.03，5-二硝基水杨酸2.02.02.02.02.02.02.0(三）α-淀粉酶活力测定：取试管3支于每管中各加入酶液1mL，在70℃±0.5℃恒温水浴中准确加热15min，钝化β-淀粉酶。取出后迅速用流水冷却。在对照管中加入4mL0.4mol/L氢氧化钠。在4支试管中各加入1mLpH5.6柠檬酸缓冲液。将4支试管置于恒温水浴中，40℃±0.5℃保温15min，再向各管分别加入40℃下预热的1%淀粉液2mL，摇匀，立即放入40℃恒温水浴准确计时保温5min。取出后向测定管迅速加入4mL0.4mol/L氢氧化钠，终止酶活动，准备测糖。（四）淀粉酶总活力的测定：另取4支试管编号，2支为对照，2支为测定管。然后加入稀释酶液1mL。在对照管中加入4mL0.4mol/L氢氧化钠。4支试管中各加入1mLpH5.6柠檬酸缓冲液。以下步骤重复α-淀粉酶活力测定第五步的操作，同样准备测糖。（五）结果计算：

淀粉酶活力=C×VT/(W×Vs×T)(mg/g/min)