森林脑炎灭活疫苗稳定性检定

森林脑炎灭活疫苗稳定性检定森林脑炎是我国东北林区的一种自然疫源性疾病，传播媒介为一种寄生于林中野生脊椎动物，特别是啮齿类动物的嗜血昆虫——森林硬蜱，在春夏季蜱活动高峰期受到蜱叮咬而感染森林脑炎病毒导致患病，称森林脑炎病。我国森林脑炎属于远东型，患病以中枢神经系统为主要特征，有头痛、恶心、羞明、惊厥、轻瘫为主，死亡率约为30%康复者中约30%-60%T后遗症。森林脑炎灭活疫苗系用森林脑炎（简称森脑）病毒“森张”株接种于地鼠肾单层细胞培养后收获病毒液， 加入甲醛溶液将病毒灭活后制成，用于预防森林脑炎。目前， 国家规定森林脑炎灭活疫苗有效期限为21个月，储存条件为2〜8C避光保存和运输。作者检测了森林脑炎灭活疫苗在规定储存条件下超过有效期12个月效价稳定性和其它检定项目。结果报告如下。材料与方法1材料1.1森林脑炎灭活疫苗生产日期2007年09月11日，有效期2009月08月27日（超过有效期12个月）。1.1.2稀释液为pH（7.8±0.2）的种子液。1.1.3攻击检品毒毒力为lgLD50/1.0ml>9.0的森林脑炎毒种P10代。1.1.4试验动物体重为10〜12g清洁级小白鼠。2方法效价测定[1]:将供试品腹腔免疫体重10〜12g小鼠30只，免疫2次，间隔7d，每只小鼠每次腹腔注射0.3ml，另取同批小鼠30只作为空白对照。初次免疫后第14d以适宜稀释度的“森张”株病毒悬液分别进行小鼠腹腔攻击，每个病毒稀释度分别攻击6只，每只0.3ml。攻击后3d内死亡者不计（动物死亡数量应不超过试验动物总数的 20%），观察21d判定结果。对照组病毒滴度应不低于7.51gLD50/0.3ml，免疫保护指数应＞5.0X105。结果1超过规定有效期12个月疫苗效价的稳定性森林疫苗免疫小白鼠后就可使小白鼠产生免疫力，从而抑制森林脑炎病毒对小白鼠的感染，通过计算免疫疫苗组（试验组）和未免疫组（对照组）在森林脑炎病毒液攻击下的半数致死剂量，依Reed-Muech氏法计算效力保护指数， 以判定疫苗是否合格和有效性，亦可判定该疫苗是否为森林脑炎灭活疫苗[2]。超过规定有效期12个月疫苗效价的稳定性仍保持在国家药品标准的合格水平之上，表明森脑的稳定性良好。2试验组具体数据见表1。表1可见，由此病毒能致半数动物死亡的稀释度介于10-2〜10-3之间，计算方法如下{高于50%的死亡百分数-（50%）}/{高于50%的死亡百分数-低于50%的死亡百分数}=距离比例{75%-50%}/{75%-25%}=0.50；低稀释度的反对数（高于50溉亡率）=-2;距离比例（0.5）X稀释因数（对数10）=-0.5;LD50滴度（试）=-2.5LD50（试）=2.52.3对照组具体数据见表2。表2可见，由此病毒能致半数动物死亡的稀释度介于10-8〜10-9之间，计算方法如下{高于50%的死亡百分数-（50%）}/{高于50%的死亡百分数-低于50%的死亡百分数}=距离比例{100%-50%}/{100%-17%}=0.60;低稀释度的反对数（高于50%死亡率）=-8;距离比例（0.6）乂稀释因数（对数10）=-0.60;LD50滴度（对）二8.60LD50（对）=8.60;对照组lgLD50/0.3ml=8.60>7.5，试验成立。2.4保护指数计算方法对照组lgLD50/0.3ml=8.60，试验组lgLD50/0.3ml=2.5对照组lgLD50/0.3ml-试验组lgLD50/0.3ml=6.10免疫保护指数106.10=12.6X105>5X105，试验成立。其他检定项目按照中国药典（2010版）的检定程序分别对药品鉴别试验、外观、装量、pH值、游离甲醛含量、硫柳汞含量、氢氧化铝含量、热稳定性试验、异常毒性检查、细菌内毒素检查等项目进行检定，结果均合格。讨论森脑疫苗已被临床使用多年，但关于其保存期限与稳定性之间的关系鲜有报道。本试验的目的在于检验森脑疫苗在规定储存期限之外的稳定性，为生产运输和使用该制剂提供试验依据。森脑疫苗是一种预防性制品，因生产周期长，国家规定的有效期较短（21个月），是必造成市场供需方面的矛盾。造成供求