菊花的组织培养

关于菊花的组织培养第1页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六课题1菊花的组织培养第2页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六第3页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六1、熟悉植物组织培养的基本过程2、了解植物组织培养的影响因素3、掌握植物组织培养的操作过程

示标第4页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？.植物组织培养应用的理论基础是什么?愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？组织培养的过程？脱分化、再分化？植物组织培养的基本过程影响组织培养的因素？菊花组织培养的过程，及注意的问题？躬学第5页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六1、细胞分化2、细胞的全能性3、愈伤组织4、脱分化5、再分化6、外植体需要了解的几个概念第6页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六1、细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因选择性表达的结果。2、细胞的全能性：已分化的植物细胞仍然具有发育成为完整个体的潜能。3、愈伤组织：由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过脱分化过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。4、脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为脱分化，又叫去分化。5、再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。6、外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。第7页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞通过脱分化形成的疏松而无规则的，高度液泡化的呈无定形状态的,未分化的薄壁细胞2-3周，愈伤组织开始形成。第8页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成根和芽等器官的过程。

3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。第9页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根芽植物体植物组织培养的基本过程第10页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六（二）影响植物组织培养的因素

材料的选择、营养成分、激素、一定的外界因素（温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等）。第11页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六MS固体培养基成分及比例同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？第12页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六

微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。阅读课文，思考以下问题1.同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？

组织的脱分化及愈伤组织的再分化。

植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化的最重要因素是植物激素。第13页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六激素配比对组织培养的影响在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。

高利于根分化、抑制芽的形成生长素/细胞分裂素低利于芽的形成适中利于愈伤组织的形成

第14页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六活动2：用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来?（提示：怎样配制MS培养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题?）第15页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六二、实验操作（一）制备MS培养基（二）外植体消毒（三）接种（四）培养（五）移栽（六）栽培实验操作流程：第16页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六2、实验具体操作二、实验操作（1）制备MS固体培养基

实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备①配制各种母液

配制母液时，大量元素浓缩__________，微量元素浓缩__________，常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照__________的质量浓度单独配制母液。

用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。1mg/ml410倍100倍第17页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六二、实验操作②配制培养基。2、实验具体操作（1）.制备MS固体培养基实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备4植物激素在菊花组织培养中，可以不添加_________________，原因是菊花茎段组织培养___________________。比较容易配制培养液调PH培养基的分装第18页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六二、实验操作③灭菌将分装好的培养基连同其他器械一起进行_________________。2、实验具体操作（1）.制备MS固体培养基实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备4高压蒸汽灭菌第19页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六2、实验具体操作二、实验操作（2）外植体消毒

①选取菊花茎段时，要取________________。流水冲洗酒精无菌水氯化汞无菌水②消毒流程：浓度______摇动_____次时间_____s浓度______时间_____min至少清洗___次漂净_______生长旺盛的嫩枝70%2～36～70.1%1～23消毒液第20页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。

在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？

思考？第21页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六2、实验具体操作二、实验操作（3）接种

①前期准备：用_________________消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用_________________灭菌。②接种操作：插入外植体时_________________端朝上，每个锥形瓶接种_________________个外植体。70％的酒精火焰灼烧形态学上6～8第22页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？思考？

每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。第23页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六2、实验具体操作二、实验操作（4）培养

接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期进行_________，温度控制在_________℃，并且每天用日光灯光照_________h。无菌箱18～2212消毒了解：光照条件第24页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六2、实验具体操作二、实验操作（5）移栽

移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗___________，将幼苗移植到____________________等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。根部培养基消过毒的蛭石或珍珠岩第25页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思考？第26页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六三、结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格第27页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？污染物如何处理？思考？第28页，共32页，2022年，5月20日，7点34分，星期六1、外植体带菌2、培养基及接种器具灭菌不彻底3、接种操作时带入4、环境不清洁结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈组织培养污染的主要途径及怎样预防污