微生物基础培训-试验卡药敏测试与clsi

试验卡药敏试验与CLSI标准试剂研发部

何开大2主要内容CLSI

M100-S23/S24的主要更新点试验卡药敏试验与CLSI标准的关系药敏试验的定义定义：使用体外方法测定抗菌药物抑制病原微生物生长的效力。药敏试验的目的使用体外试验的方法检测细菌的耐药性，疗效果，并为临床医生针对某一特定的临床抗菌药物的临床治问题选用药物提供依据----实施 化治疗。由于细菌耐药性的快速增长，单纯依赖经验选用药物经常无效，在 的时候需要参考药敏实验的结果。用于流行病学及院内的，减少耐药菌株的流行。药敏试验的结果(定量与定性)最低抑菌浓度（

Minimum

inhibitory

concentration，MIC）在体外达到抑制细菌生长所需要的最低的药物浓度。临床治疗要求的血药浓度一般为MIC值（μg/ml）的4-8倍。对于不同部位的不同药物，其浓度可能更高或更低。敏感（Susceptible，S）对

部位使用推荐剂量时，该菌株被通常可达到的抗菌药物浓度水平所抑制提示患者对该种抗微生物药物治疗有反应的可能性大耐药（，R）用常规用量治疗不能抑制细菌的生长MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度提示用该抗微生物药物治疗可能失败药敏试验的结果(定量与定性)中介(Intermediate，I)MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗反应率低于敏感株药物生理浓集部位有效(如：尿——喹诺酮类和β-内酰胺）加大用药剂量可能有效（如：β-内酰胺）缓冲区：防止操作的系统误差造成重大结果的判定错误剂量依赖型敏感(Susceptible-Dose

Dependent

，SDD)是否敏感取决于用药剂量对于SDD分离株，需要提高用药剂量或者用药频率或者二者兼有在CLSI

M100-S24首次提出天地人生化药敏试验卡种类肠杆菌科细菌生化·药敏试验卡微球菌科细菌生化·药敏试验卡非发酵菌生化·药敏试验卡链球菌科细菌生化·药敏试验卡奈瑟菌/

杆菌生化·药敏试验卡弧菌科细菌生化·药敏试验卡芽胞杆菌生化·药敏试验卡棒状杆菌生化·药敏试验卡酵母样真菌生化·药敏试验卡厌氧菌生化·药敏试验卡（在研）生化药敏试验卡与CLSI的关系？1998年，将CLSI制定的药敏标准定为我国的部颁标准，依照CLSI所制定的药敏试验执行标准作为选药指南。CLSI的主要内容药物分组细菌/药物敏感性折点相关注释与药物推导测试方法质量控制1、药物种类的选择？2、药物浓度的选择？3、结果的报告？生化药敏试验卡抗菌药物/浓度组合的选择CLSI

M100CLSI

M45Performance

Standards

for

Antimicrobial

Susceptibility

TestingMethods

for

Antimicrobial

Dilution

and

Disk

Susceptibility

testing

ofinfrequently

Isolated

or

Fastidous

BacteriaReference

Method

for

Borth

Dilution

Antifungal

Susceptibility

Testing

of

YeastsCLSI

M27《抗菌药物临床应用管理办法》药敏试验药物种类的选择药物分组：临床疗效、耐药菌株的流行、尽可能减少耐药性的出现、价格、FDA批准药物临床应用指征、目前关于首选与次选药物的一致推荐意见。CLSI对抗菌药物的分组A组：首选，常规试验和报告B组：首选抗生素，在下列情况下选择使用细菌对A组同类药物耐药严重对A组抗生素过敏、不耐受或无效或多部位、多种细菌混合的抗菌药物控制传染病流行C组：备选抗生素，在下列情况下使用对一个或多个首选药耐药的地区流行株对基本药物过敏的患者对不常见菌 的治疗控制传染病的流行U组：包含某些仅用于或首选治疗泌O组：一般

常规测试与报告的药物InV组：正在进行研究药敏试验药物种类的选择根据药物分组进行确定（国际）兼顾中国

（国内）和欧盟

的要求以及临床药物的实际情况客户定制肠杆菌科细菌生化药敏试验卡药物的选择非发酵菌生化药敏试验卡药物的选择链球菌科细菌生化药敏试验卡药物的选择奈瑟菌/杆菌生化药敏试验卡药物的选择弧菌科细菌生化药敏试验卡药物的选择天地人生化药敏试验卡不包括霍乱弧菌棒状杆菌生化药敏试验卡药物的选择芽胞杆菌生化药敏试验卡药物的选择天地人生化药敏试验卡不包括炭疽芽胞杆菌酵母样真菌生化药敏试验卡药物的选择氟康唑、伏立康唑、卡泊芬净、氟胞嘧啶、伊曲康唑浓度参考CLSI

M27-S3制定；两性霉素B、制菌霉素、咪康唑、酮康唑和特比萘芬，CLSI无相关标准。试验卡药物浓度的选择试验卡药物浓度的选择结果的报告特殊细菌结果的报告结果的报告特殊部位结果的报告结果的报告天然耐药结果的报告结果的报告与治疗有关的注释肠球菌引起的严重，如心内膜炎，除非高水平耐庆大霉素和链霉素，可选用氨苄西林、青霉素或万古霉素（敏感株）与氨基糖苷类进行联合治疗。这种联合治疗可起协同杀菌效果。药物的推导在药物分组表格中用“或”连接的药物，如1A表格对于肠杆菌科细菌中的“头孢曲松”或“头孢噻肟”。解释表格中的注释，如2D中的氨苄西林 可用于预报不产β-内酰胺酶肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林等的结果。结果的报告34试验卡药敏试验与CLSI标准的关系主要内容CLSI

M100-S23/S24的主要更新点近年来CLSI标准重要的变化增加天然耐药判断折点（更新、删除）增加新的抗菌药物删除某些药物检测方法变更增加给药方案2011年增加肠杆菌科细菌天然耐药附表B-B12013年–删除了克氏枸橼酸杆菌对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦R–进一步阐明2013年新增非肠杆菌科细菌固有耐药附录B-B22014年新增2013年新增葡萄球菌固有耐药附录B-B32013年新增肠球菌固有耐药附录B-B4CLSI

M100-S23/S24折点的变化新增注释折点的设置基于每8h

1g的剂量或者每6h

500mg的剂量折点的变化——头孢吡肟变更原因1、先前的折点基于较高的剂量设置；2、临床发现，当分离株的MIC为4-8ug/ml时，治疗常常失败，尤其是使用较低的剂量时；3、由于目前对于多重耐药的革兰氏 菌具有疗效的新药有限，优化目前可用药物的使用是有必要的；基于敏感性设计用药剂量有助于达到这一目的。第五代头孢——ceftaroline广谱，具有抗MRSA活性头孢菌素杀菌是通过与青霉素结合蛋白(PBPs)结合而介导。能与金黄色葡萄球菌PBP2a以及

链球菌与PBP2X

结合，所以对MRSA、青霉素耐药的

链球菌有效。头孢洛林一种具有体外抗GP和GN活性的头孢菌素。GP：金黄色葡萄球菌（

MSSA和MRSA

）、化脓性链球菌、无乳链球菌、

链球菌制药研制仅有静脉制剂头孢洛林2010年10月，FDA批准的适应症急性细菌性皮肤及皮肤结构–MRSA、MSSA、化脓性链球菌、无乳链球菌–大肠、

克雷伯菌、产酸克雷伯菌社区获得性细菌性

（CABP)–

链球菌、MSSA、流感

杆菌–大肠、

克雷伯菌、产酸克雷伯菌头孢洛林对产ESBLs、AmpC和碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌无抗菌活性对铜绿无抗菌活性对厌氧菌有部分抗菌活性（对脆弱类杆菌无活性）葡萄球菌—2013将CLSI

M100-S22

表2C中所有的头孢菌素/青霉素被删除，除了青霉素、苯唑西林、头孢西丁和头孢洛林以外。检测结果推测结果青霉素苯唑西林SS所有青霉素类、ß-内酰胺类/酶抑制剂复合物、头孢菌素和碳青霉烯类敏感RS耐药：不耐酶青霉素类敏感：耐酶青霉素ß-内酰胺类/酶抑制剂复合物头孢菌素碳青霉烯类RR