07第七章芳香胺类药物的分析2课件

第二节

苯乙胺类药物Phenethylamine第二节

苯乙胺类药物Phenethylamine结构(Structure)拟肾上腺素类药物，分子结构中具有苯乙胺基本结构肾上腺素(adrenaline)盐酸克伦特罗(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)盐酸麻黄碱(ephedrinehydrochloride)

R1

R2

R3HX结构(Structure)拟肾上腺素类药物，分子结2化学性质(feature)弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性，游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。光学活性：手性碳原子，具有旋光性。苯环取代基特性：如盐酸克伦特罗芳伯氨基；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。化学性质(feature)弱碱性：3鉴别试验(identification)与三氯化铁反应、与甲醛－硫酸反应药物三氯化铁甲醛－硫酸肾上腺素Adrenaline0.1mol/L盐酸液中显翠绿色，加氨试液显紫色，紫红色红色重酒石酸去甲肾上腺素Noradrenalinebitartrate翠绿色，加碳酸氢钠试液显蓝色，红色淡红色盐酸去氧肾上腺素Phenylephrinehydrochloride紫色玫瑰红，橙红，深棕红盐酸异丙肾上腺素Isoprenalinehydrochloride深绿色，滴加新制5%碳酸氢钠液，显蓝紫色，红色棕色，暗紫色盐酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨绿色，滴加1%氨溶液，显紫红色鉴别试验(identification)与三氯化铁反应、与4鉴别试验(identification)氧化反应（酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色）肾上腺素碘或过氧化氢中性或酸性肾上腺素红放置棕红色多聚体盐酸异丙肾上腺素偏酸性条件碘异丙肾上腺素红硫代硫酸钠重酒石酸去甲肾上腺素酒石酸氢钾饱和液pH3.56碘试液放置5min硫代硫酸钠溶液为无色或仅显微红色或淡紫色肾上腺素或盐酸异丙肾上腺素明显的红棕色或紫色淡红色溶液鉴别试验(identification)氧化反应（酚羟基，5鉴别试验(identification)紫外特征吸收药物溶剂浓度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)重酒石酸间羟胺水0.10272盐酸异丙肾上腺素水0.052800.50盐酸多巴胺0.5%硫酸0.03280盐酸芬氟拉明0.1mol/L盐酸0.25263,270盐酸苯乙双胍水0.012340.60盐酸克伦特罗0.1mol/L盐酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274盐酸伪麻黄碱水0.50251,257,263红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱进行鉴别。鉴别试验(identification)紫外特征吸收药物溶6鉴别试验(identification)与亚硝基铁氰化钠反应(Rimini试验)

重酒石酸间羟胺水溶解亚硝基铁氰化钠试液丙酮数滴，碳酸氢钠少量△红紫色脂肪伯氨基的专属反应丙酮不含有甲醛重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基鉴别试验(identification)与亚硝基铁氰化钠反7鉴别试验(identification)双缩脲反应 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。

例：Chp2000，鉴别盐酸麻黄碱 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸铜试液2滴与20%氢氧化钠液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。鉴别试验(identification)双缩脲反应8特殊杂质检查(Detectionofspecificimpurities)酮体检查生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。药物检查的杂质溶剂样品浓度(mg/ml)测定波长(nm)

A肾上腺素肾上腺酮HCl(9→2000)2.0310不得过0.05盐酸去氧肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.20重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺酮水2.0310不得大于0.05盐酸异丙肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.15盐酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06紫外分光光度法检查酮体的条件及要求特殊杂质检查(Detectionofspecific9特殊杂质检查(Detectionofspecificimpurities)TLC法检查有关物质例：盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇－氯仿－浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。特殊杂质检查(Detectionofspecific10特殊杂质检查(Detectionofspecificimpurities)盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查（Chp2000版）

有关双胍取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录ⅤA）试验，精密吸取上述溶液0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条(7.5cm×50cm)上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为0.5～1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1)为展开剂，展开至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（取10％铁氰化钾溶液1ml，加10％亚硝基铁氰化钠溶液与10％氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15min，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录ⅣA），在232nm的波长处测定吸收度，不得过0.48。

特殊杂质检查(Detectionofspecific11含量测定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法提取容量法紫外分光光度法高效液相色谱法含量测定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法比色法12含量测定

(Assay)1、非水溶液滴定法－弱碱性

冰醋酸为溶剂 醋酸汞消除氢卤酸的干扰 结晶紫为指示剂（盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇，也可电位法指示终点） 若碱性较弱则加醋酐使突跃明显例：重酒石酸去甲肾上腺素－－直接滴定盐酸克伦特罗－－加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。含量测定(Assay)1、非水溶液滴定法－弱碱性例：重酒石13含量测定

(Assay)2、溴量法

基本原理：测定方法：取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于3.395mg的C9H13NO2·HCl。含量测定(Assay)2、溴量法测定方法：取本品约0.1g14含量测定

(Assay)3、比色法

测定原理：注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。含量测定(Assay)3、比色法注意：由于偶合剂（N-(115比色法含量测定例：盐酸克伦特罗栓（Chp2005） 【含量测定】对照品溶液的制备精密称取盐酸克仑特罗对照品适量，加盐酸溶液(9→100)制成每1ml中含7.2μg的溶液。

供试品溶液的制备取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的氯仿20ml使溶解，用盐酸溶液(9→100)振摇提取3次(20ml、15ml、10ml)，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸溶液(9→100)稀释至刻度，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。

测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加盐酸溶液(9→100)5ml与0.1％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置3分钟，各加0.5％氨基磺酸铵溶液1ml，混匀，时时振摇10分钟，再各加0.1％盐酸萘乙二胺溶液1ml,混匀，放置10分钟，用盐酸溶液(9→100)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录ⅣB），在500nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。比色法含量测定例：盐酸克伦特罗栓（Chp2005）16含量测定

(Assay)4、提取酸碱滴定法

原理：溶解性－盐酸盐或硫酸盐可溶于水，游离碱不溶于水，溶于有机溶剂。

方法：供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。

例：硫酸苯丙胺→加水溶解→加氢氧化钠试液8ml→加氯化钠使饱和→乙醚多次提取→合并乙醚液→精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振摇→低温蒸去乙醚→放冷至室温→加甲基红指示液2滴→用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于18.42mg的C18H26N2·H2SO4。含量测定(Assay)4、提取酸碱滴定法17含量测定(Assay)5、荧光分光光度法

基本原理：肾上腺素含有的邻苯二酚结构，被弱氧化剂氧化，生成肾上腺素红，发生转位为N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚（THI）。(Tri-Hydroxyl-Indole-)本法还可用于测定微量儿茶酚胺类药物。含量测定(Assay)5、荧光分光光度法本法还可用于测定微18含量测定(Assay)6、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性－可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液－甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min检测波长：280nm测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。含量测定(Assay)6、高效液相色谱法19含量测定(Assay)6、高效液相色谱法

例1：HPLC-EChD法测定血浆中儿茶酚胺类药物 色谱条件：色谱柱：ODS型键合相 流动相：离子对试剂 检测器：电化学检测器 供试品溶液的制备：氧化铝吸附－洗脱含量测定(Assay)6、高效液相色谱法20含量测定(Assay)7、衍生化气相色谱法

例：盐酸芬氟拉明(fenfluraminehydrochloride)由于结构中的仲胺基极性极强，使得气相色谱法测定值波动较大，因此将样品溶解后经碱化乙酸乙酯提取，加入内标，提取液用三氟乙酸酐进行酰化衍生化，将衍生化产物在5%SE-30的色谱柱上分析，用FID检测器检测。含量测定(Assay)7、衍生化气相色谱法由于结构中的仲胺21第三节芳氧丙醇胺类药物典型药物：氧烯洛尔(Oxprenolol,别名烯丙氧心胺，心得平，Tracosal,Trasacor,Trasieor)－β肾上腺素受体阻滞药

盐酸卡替洛尔(Carteololhydrochloride)－β受体阻滞药

第三节芳氧丙醇胺类药物典型药物：22鉴别反应(identification)化学鉴别氧烯洛尔：取本品0.1g，加乙醇2ml溶解后，滴加0.1mol/L高锰酸钾溶液1ml，振摇数分钟，高锰酸钾颜色消褪，并产生棕色沉淀。盐酸卡替洛尔：取本品约0.1g，加水5ml使溶解，加硫氰酸铬铵试液5滴，即生成淡红色沉淀。紫外吸收峰特征氧烯洛尔水溶液(40μg/ml):在275nm的波长处有最大吸收。盐酸卡替洛尔(8μg/ml):在215nm与252nm的波长处有最大吸收。鉴别反应(identification)化学鉴别紫外吸23盐酸卡替洛尔的有关物质检查TLC法，自身对照法 检查方法：取本品0.20g，加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱法(附录ⅤB)试验，吸取上述两种溶液备10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨溶液(50:20:1)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。盐酸卡替洛尔的有关物质检查TLC法，自身对照法24含量测定

盐酸卡替洛尔原料

取本品约0.5g，精密称定，加冰醋酸30ml，在水浴上加热溶解，放冷，加醋酐70ml，照电位滴定法(附录ⅦA)，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于32.88mg的C16H24N2O3·HCl。

含量测定盐酸卡替洛尔原料25含量测定盐酸卡替洛尔滴眼液精密量取本品适量，用水定量稀释制成每1ml中约含盐酸卡替洛尔16μg的溶液，照分光光度法(附录ⅣA)，在252nm的波长处测定吸收度；另取盐酸卡替洛尔对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含盐酸卡替洛尔16μg的溶液，同法测定，计算，即得。含量测定盐酸卡替洛尔滴眼液26含量测定人血浆中氧烯洛尔及其异构体的分析

色谱条件：预柱：ODS填料，分析柱：手性OD-R柱（手性选择剂为3,5-二甲苯氨基甲酸酯纤维素） 流动相：NaClO4(0.45mol/L)-乙腈(70:30)的磷酸盐缓冲溶液(pH6.0)

检测波长：273nm

血浆处理方法：醋酸纤维膜透析→用预柱纯化、富集→手性柱分离分析。含量测定人血浆中氧烯洛尔及其异构体的分析27ThankYou!ThankYou!28第二节

苯乙胺类药物Phenethylamine第二节

苯乙胺类药物Phenethylamine结构(Structure)拟肾上腺素类药物，分子结构中具有苯乙胺基本结构肾上腺素(adrenaline)盐酸克伦特罗(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)盐酸麻黄碱(ephedrinehydrochloride)

R1

R2

R3HX结构(Structure)拟肾上腺素类药物，分子结30化学性质(feature)弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性，游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。光学活性：手性碳原子，具有旋光性。苯环取代基特性：如盐酸克伦特罗芳伯氨基；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。化学性质(feature)弱碱性：31鉴别试验(identification)与三氯化铁反应、与甲醛－硫酸反应药物三氯化铁甲醛－硫酸肾上腺素Adrenaline0.1mol/L盐酸液中显翠绿色，加氨试液显紫色，紫红色红色重酒石酸去甲肾上腺素Noradrenalinebitartrate翠绿色，加碳酸氢钠试液显蓝色，红色淡红色盐酸去氧肾上腺素Phenylephrinehydrochloride紫色玫瑰红，橙红，深棕红盐酸异丙肾上腺素Isoprenalinehydrochloride深绿色，滴加新制5%碳酸氢钠液，显蓝紫色，红色棕色，暗紫色盐酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨绿色，滴加1%氨溶液，显紫红色鉴别试验(identification)与三氯化铁反应、与32鉴别试验(identification)氧化反应（酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色）肾上腺素碘或过氧化氢中性或酸性肾上腺素红放置棕红色多聚体盐酸异丙肾上腺素偏酸性条件碘异丙肾上腺素红硫代硫酸钠重酒石酸去甲肾上腺素酒石酸氢钾饱和液pH3.56碘试液放置5min硫代硫酸钠溶液为无色或仅显微红色或淡紫色肾上腺素或盐酸异丙肾上腺素明显的红棕色或紫色淡红色溶液鉴别试验(identification)氧化反应（酚羟基，33鉴别试验(identification)紫外特征吸收药物溶剂浓度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)重酒石酸间羟胺水0.10272盐酸异丙肾上腺素水0.052800.50盐酸多巴胺0.5%硫酸0.03280盐酸芬氟拉明0.1mol/L盐酸0.25263,270盐酸苯乙双胍水0.012340.60盐酸克伦特罗0.1mol/L盐酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274盐酸伪麻黄碱水0.50251,257,263红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱进行鉴别。鉴别试验(identification)紫外特征吸收药物溶34鉴别试验(identification)与亚硝基铁氰化钠反应(Rimini试验)

重酒石酸间羟胺水溶解亚硝基铁氰化钠试液丙酮数滴，碳酸氢钠少量△红紫色脂肪伯氨基的专属反应丙酮不含有甲醛重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基鉴别试验(identification)与亚硝基铁氰化钠反35鉴别试验(identification)双缩脲反应 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。

例：Chp2000，鉴别盐酸麻黄碱 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸铜试液2滴与20%氢氧化钠液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。鉴别试验(identification)双缩脲反应36特殊杂质检查(Detectionofspecificimpurities)酮体检查生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。药物检查的杂质溶剂样品浓度(mg/ml)测定波长(nm)

A肾上腺素肾上腺酮HCl(9→2000)2.0310不得过0.05盐酸去氧肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.20重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺酮水2.0310不得大于0.05盐酸异丙肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.15盐酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06紫外分光光度法检查酮体的条件及要求特殊杂质检查(Detectionofspecific37特殊杂质检查(Detectionofspecificimpurities)TLC法检查有关物质例：盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇－氯仿－浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。特殊杂质检查(Detectionofspecific38特殊杂质检查(Detectionofspecificimpurities)盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查（Chp2000版）

有关双胍取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录ⅤA）试验，精密吸取上述溶液0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条(7.5cm×50cm)上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为0.5～1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1)为展开剂，展开至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（取10％铁氰化钾溶液1ml，加10％亚硝基铁氰化钠溶液与10％氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15min，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录ⅣA），在232nm的波长处测定吸收度，不得过0.48。

特殊杂质检查(Detectionofspecific39含量测定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法提取容量法紫外分光光度法高效液相色谱法含量测定

(Assay)原料：非水溶液滴定法、溴量法比色法40含量测定

(Assay)1、非水溶液滴定法－弱碱性

冰醋酸为溶剂 醋酸汞消除氢卤酸的干扰 结晶紫为指示剂（盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇，也可电位法指示终点） 若碱性较弱则加醋酐使突跃明显例：重酒石酸去甲肾上腺素－－直接滴定盐酸克伦特罗－－加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。含量测定(Assay)1、非水溶液滴定法－弱碱性例：重酒石41含量测定

(Assay)2、溴量法

基本原理：测定方法：取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于3.395mg的C9H13NO2·HCl。含量测定(Assay)2、溴量法测定方法：取本品约0.1g42含量测定

(Assay)3、比色法

测定原理：注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。含量测定(Assay)3、比色法注意：由于偶合剂（N-(143比色法含量测定例：盐酸克伦特罗栓（Chp2005） 【含量测定】对照品溶液的制备精密称取盐酸克仑特罗对照品适量，加盐酸溶液(9→100)制成每1ml中含7.2μg的溶液。

供试品溶液的制备取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的氯仿20ml使溶解，用盐酸溶液(9→100)振摇提取3次(20ml、15ml、10ml)，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸溶液(9→100)稀释至刻度，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。

测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加盐酸溶液(9→100)5ml与0.1％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置3分钟，各加0.5％氨基磺酸铵溶液1ml，混匀，时时振摇10分钟，再各加0.1％盐酸萘乙二胺溶液1ml,混匀，放置10分钟，用盐酸溶液(9→100)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录ⅣB），在500nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。比色法含量测定例：盐酸克伦特罗栓（Chp2005）44含量测定

(Assay)4、提取酸碱滴定法

原理：溶解性－盐酸盐或硫酸盐可溶于水，游离碱不溶于水，溶于有机溶剂。

方法：供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。

例：硫酸苯丙胺→加水溶解→加氢氧化钠试液8ml→加氯化钠使饱和→乙醚多次提取→合并乙醚液→精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振摇→低温蒸去乙醚→放冷至室温→加甲基红指示液2滴→用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于18.42mg的C18H26N2·H2SO4。含量测定(Assay)4、提取酸碱滴定法45含量测定(Assay)5、荧光分光光度法

基本原理：肾上腺素含有的邻苯二酚结构，被弱氧化剂氧化，生成肾上腺素红，发生转位为N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚（THI）。(Tri-Hydroxyl-Indole-)本法还可用于测定微量儿茶酚胺类药物。含量测定(Assay)5、荧光分光光度法本法还可用于测定微46含量测定(Assay)6、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性－可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液－甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min检测波长：280nm测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。含量测定(Assay)6、高效液相色谱法47含量测定(Assay)6、高效液相色谱法

例1：HPLC-EChD法测定血浆中儿茶酚胺类药物 色谱条件：色谱柱：ODS型键合相 流动相：离子对试剂 检测器：电化学检测器 供试品溶液的制备：氧化铝吸附－洗脱含量测定(Assay)6、高效液相色谱法48含量测定(Assay)7、衍生化气相色谱法

例：盐酸芬氟拉明(fenfluraminehydrochloride)由于结构中的仲胺基极性极强，使得气相色谱法测定值波动较大，因此将样品溶解后经碱化乙酸乙酯提取，加入内标，提取液用三氟乙酸酐进行酰化衍生化，将衍生化产物在5%SE-30的色谱柱上分析，用FID检测器检测。含量测定