简介抗菌肽课件

简介抗菌肽

2011年3月抗菌肽来源动物产生抗菌肽动物源抗细菌肽这个研究领域最为火热，主要来源是动物的皮肤，分泌腺，肠道，肺，血管，等黏膜面和白细胞。马艳.黄芪等四种中药诱导小鼠肺组织β－防御素2、3的基因表达[D].四川大学，2006.举例：黄芪等四种中药诱导小鼠肺组织β-防御素2、3的基因表达选择健康小鼠，雌雄各半，分为4个实验组和2个对照组（每组6只），4个实验组分别为黄芪、鱼腥草、板蓝根及香菇多糖4个药物组，每个药物组再分成2个剂量组。对照组分为脂多糖阳性对照和生理盐水阴性对照组。24小时后处死小鼠，取右肺组织约50mg，提取总RNA，以β-防御素2和β-防御素3为引物及β-肌球蛋白为内参引物，使用二步法RT-PCR扩增得到特异性产物。半定量检测小鼠肺组织B．防御素2，3的表达水平，各样本防御素2、3的mRNA水平用防御素2，3与β-actin的校正光密度值之比表示。结论：1、β-防御素2、3在小鼠肺组织呈诱导表达。2、中药黄芪能够诱导β-防御素2、3在小鼠肺组织表达增加，且呈剂量依赖性。3、没有检测到中药鱼腥草、板蓝根和香菇多糖诱导小鼠肺组织β-防御素2、3基因表达上调。。郭雅静.黄芪等中药诱导大鼠子宫组织β－防御素的基因表达及其分子克隆[D].兰州大学，2009.郭雅静用黄芪注射液、苦参注射液、红芪注射液、双黄连口服液和黄芩口服液灌胃大鼠每天0.3ml，于第7天处死大鼠提取子宫组织RNA，用RT-PCR法检测大鼠β－防御素－2基因的表达情况，并对扩增产物进行了纯化、克隆及测序。研究显示黄芪、红芪和苦参等中药可以诱导大鼠子宫β－防御素－2基因的表达，提示可以利用这些中药来增强局部组织的免疫力，以达到杀灭病原微生物的作用，这可能是中药抗感染的作用机理之一。赵玉蓉、陈清华、贺建华等.牛膝多糖对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1mRNA表达的影响[J].动物营养学报，2008，20（1）：80－84.

赵玉蓉等研究了牛膝多糖对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1mRNA表达的影响。仔猪基础日粮中分别添加0.05%牛膝多糖、0.10%牛膝多糖、0.15%牛膝多糖，饲喂28d。提取股骨骨髓中的RNA，采用半定量RT-PCR法，以18SrRNA为内标，检测PG-1mRNA相对表达量。结果表明，日粮中添加牛膝多糖均不同程度地促进了断奶仔猪骨髓抗菌肽PG-1mRNA的表达。与空白对照组相比，0.05%、0.10%、0.15%牛膝多糖组分别使断奶仔猪PG-1mRNA的表达量增加14.9%、36.4%和7.3%；即牛膝多糖显著促进了断奶仔猪骨髓中抗菌肽PG-1mRNA的表达。启示：既然动物抗菌肽是通过诱导产生，是否可以在动物饲料开发上使用中药这种诱导剂，诱导动物机体抗菌肽例如肺脏β-防御素2、3基因表达，产生β-防御素2、3，提高机体抗病能力

中药与酵母发酵或与双歧杆菌发酵饲喂家禽来检测家禽体内抗菌肽及检测家禽的免疫指标，从而开发动物饲料。黄粉虫抗菌肽韩静菲.黄粉虫抗菌肽的诱导、生物学活性测定及初步分离纯化[D],吉林农业大学采用不同的诱导方法对黄粉虫进行诱导，分别采用了紫外线诱导法、超声波诱导法、针刺诱导法、菌液浸泡诱导法、饥饿诱导法、菌液注射诱导法等方法，每种诱导方法分别采用不同剂量或不同的诱导时间，且诱导后分别培养不同的时间，之后取其血淋巴并通过进行抑菌圈试验确定其是否已经产生抗菌活性物质，若产生则观察其抗菌活性的强弱，从而筛选出较优的诱导方法。以最佳诱导方法诱导后取血淋巴进行抗菌肽生物学活性的测定。分别进行了对热稳定性、反复冻溶的稳定性、蛋白酶稳定性、pH值及有机溶剂对抗菌肽抑菌活性影响的测定。

中药与酵母菌后产物用来诱导黄粉虫产抗菌肽植物抗菌肽植物防御素磷脂转运蛋白核糖体失活蛋白蛋白酶抑制剂寡肽大环寡肽环肽植物防御素堇菜科茜草科葫芦科微生物抗菌肽1、Nisin抗茵肽：Nisin抗菌肽又可称为乳球菌肽或乳链菌肽，是由乳酸链球菌(Streptococcuslactis)和乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)在代谢过程中合成、分泌的具有很强杀菌作用的天然生物活性抗菌肽，它对许多G+具有抑菌活性，在络合剂联合作用下对G-有一定抑制作用。2、多粘菌素：多粘菌素类是由多粘菌素（Bacilluspolymyxa）产生的，是由多种氨基酸和脂肪酸合成的碱性多肽。根据结构差异将其分为多黏菌素A、B、C、D、E和M等组分，主要作用于革兰氏阴性杆菌，同时与磺胺药，四环素连用有协同作用。3、杆菌肽：杆菌肽又名枯草菌素、枯草菌肽、崔西杆菌素，由苔藓样杆菌发酵获得，它对革兰氏阳性菌有杀菌作用，但是对肾毒性很大，所以一般不用于全身感染，欧盟从2000年开始禁用本品作为促生长剂。4、酵母菌产生的嗜杀毒素（Ki11ertoxins）：1963年，人们首次发现酿酒酵母在生长过程中能向菌体外分泌一种毒蛋白(即嗜杀毒素)，可以杀死同族或亲缘酵母，但自身具有免疫力。此后又在假丝酵母属、德巴利酵母属、克鲁维氏酵母属、毕赤酵母属和圆酵母属的真菌中发现了嗜杀毒素。目前研究最为深入的是来自酿酒酵母的K1毒素。5、植物内生菌抗菌肽内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。化学合成抗菌肽化学合成：对于氨基酸组成较少的抗菌肽来说可以通过化学合成方法进行较为方便合成。然而以天然抗菌肽为模板设计合成的人造抗菌肽克服了天然抗菌肽的种种缺点和不足，不仅可以直接通过计算机辅助设计得到比天然抗菌肽更精短的肽序列，避免分离纯化等复杂步骤，同时经过设计改造还可增强天然抗菌肽的抗菌活性、稳定性、降低或消除溶血性等副作用，但通过固相合成法得到的抗菌肽每克费用高达上百甚至上千美元，这种高价合成方式阻碍了化学合成脚步。基因工程抗菌肽基因工程手段随着基因工程技术的飞速发展，抗菌肽基因的克隆与表达成为大规模生产抗菌肽的主要途径，具有广阔的前景。目前基因工程手段研究抗菌肽大体有以下两个方向:1、直接利用基因工程手段将抗菌肽基因导入动植物经转化进入微生物表达系统(其主要通过质粒载体转移到生物体基因组),得到抗病的植物和动物。例如：Yarus等将牛气管黏膜抗菌肽构建入由鼠乳清酸性蛋白序列控制的表达载体中，然后通过显微注射的方法转入小鼠乳腺组织中，结果在mRNA与蛋白水平均检测到了该肽，抑菌试验表明其对大肠杆菌、肺炎克雷白菌以及白色念珠菌均具有抗菌活性。2、另一个方向是根据已知的天然抗菌肽氨基酸顺序，设计并合成指导抗菌肽合成的基因做抗菌肽的表达。目前现有酵母菌、大肠杆菌、杆状病毒表达系统和哺乳动物细胞表达体系。其中利用原核表达系统产生的抗菌肽分子小，易被宿主菌中的蛋白酶降解，而且表达产物对原核宿主菌具有杀伤作用，难以在原核表达体系中直接表达具有天然生物活性的抗菌肽。酵母表达系统产生抗菌肽虽然有很多优势，但酵母表达系统仍有部分问题有待解决，如抗菌肽被蛋白酶降解:表达出的小分子抗菌肽易被分离纯化等等。杆状病毒体系虽是一个高效的体系,但其最大缺点是外源蛋白处在极晚期病毒启动与调控下,而此时细胞已经开始死亡,因此依靠此体系大量制备抗菌肽还有许多问题有待解决。

1、根据目前文献的报道，利用真菌提取