艾滋病实验室生物安全

艾滋病实验室生物安全艾滋病实验室生物安全艾滋病实验室生物安全V:1.0精细整理，仅供参考艾滋病实验室生物安全日期：20xx年X月艾滋病实验室生物安全HIV的生物危害第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原微生物。HIV相关检测的生物安全级别HIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其它需要应用活病毒的研究工作，应在Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）中进行。HIV核酸提取和检测均应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。HIV病毒株应保存在符合Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）要求的艾滋病实验室；HIV阳性样品，包括全血、血清、血桨和其他组织（液）、核酸提取物应保存在符合BSL-2要求的艾滋病实验室。生物安全保证措施建立安全制度实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP）。意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。内容包括应急处理、登记和报告、调查和处理。信息安全及保密制度：与HIV/AIDS检测相关的所有资料均应严格保密，包括送检单、检测记录、样品登记、报告单及工作人员年度检测结果等，不得对无关人员透露检测结果。培训和管理实验室应进行全员安全培训并强化“普遍性防护原则”安全意识，所有的血液、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在的传染性，都应以安全的方式进行操作。所有管理和检测人员都应接受省级以上艾滋病检测实验室主持的安全培训，包括上岗前培训和复训，并接受管理人员的监督。必须对新上岗人员进行安全教育和培训，使他们清楚实验室工作的潜在危险，通过考核等方式确认他们具备安全操作的能力后方可单独工作。必须对新调入人员、外来合作、进修和学习的人员进行生物安全培训，经实验室主任批准后，方可进入实验室。生物安全培训和监督应有客观详实的记录。实验室主任应详细了解所有工作人员的教育和培训背景、特长、性格特点等。要根据人员特点、工作种类、所涉及的生物材料合理安排工作区域，要定期对实验室环境进行安全检查。个人保健和防护遇有手部皮肤有开放性伤口及其他不适于工作的情况，应暂停工作。皮肤的微小伤口、擦伤等，应用防水敷料严密覆盖。应为每一名在艾滋病实验室工作的人员提供充足的防护服、一次性乳胶手套、口罩、帽子和覆盖足背的工作鞋。应将清洁的防护服和其他个人防护用品置于实验室清洁区内的专用处存放。实验室应设置应急冲洗眼睛装置。工作人员上岗前必须进行HIV抗体和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒标志物检测，应接种乙肝疫苗。应每年对工作人员采血检测HIV抗体，血清应长期保留。进实验室工作前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。严禁在实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。实验操作时应穿合适防护服（白大衣、隔离衣或一次性工作服）、戴手套和口罩、穿实验室专用的工作鞋。如接触物的传染性大、应戴双层手套；含有HIV的液体（样品或病毒培养液）有可能喷溅时，应戴防护眼镜、穿防水（如塑料）围裙。工作完毕，先脱去手套，再脱去防护服，用肥皂和流动水洗手。穿过的污染的防护服应及时放入污物袋中，消毒后方可洗涤或废弃。操作过程中，如发现防护服被污染应立即更换，如手套破损，应立即丢弃、洗手并换上新手套。不能用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。不要将手套清洗或消毒后再次使用，因为使用表面活性剂清洗可使手套对水的通透性增加，消毒剂可以引起手套的破损。禁止使用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验的所有液体。安全操作试剂及样品的管理应严格按要求妥善保存血清及其它体液样品，应按有关规定设立专门储存阳性血清、质控品的血清库和/或毒种库，应上锁并指定专人管理。对存放试剂和有毒有害物质的区域应进行监控，冷藏柜、冰箱、培养箱和存放生物试剂、化学危险品、放射性物质的容器，置于工作人员视线之外的地点时应上锁。实验室的清洁和消毒工作完毕应对工作台面消毒，推荐用0.1～0.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作过程中如有样品、检测试剂外溅，应及时消毒。如有大量高浓度的传染性液体溅出，在清洁之前应先用1%的次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦净。样品的采集和处理抽取静脉血液（或以其它方式收集血液样品）时要注意安全，应使用一次性注射器，戴手套，谨慎操作，防止血液污染双手。应小心防止被针头和其它利器刺伤。如用滤纸采样，应按常规将手指或耳垂局部消毒。刺破皮肤后，迅速把滤纸沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后待血样干燥后再包装送检。离心样品时要使用密闭的罐和密封头，防止离心时液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。样品的带入、带出和操作不得将非实验室物品带入实验室。包装有测试样品的包裹应在实验室的安全柜内打开，不能在收发地点或仓库等地点打开，同时，打开包裹的人员应接受过处理感染源方面的训练并穿戴合适的防护服；实验室应具有处理感染源的设备并准备好可消毒的容器。打开样品容器时要小心，防止内容物泼溅。要核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器进行消毒，同时要按照程序报告有关负责人。要检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如污染过重或者认为不能接受，则应将样品用安全方式废弃，同时将情况通知送样人。常规处理血液、体液样品可在工作台上进行，如样品有可能溅出，则应戴手套、口罩和防护眼镜，在生物安全柜中操作。将样品转送到其他实验室时，应防止对工作人员、患者或环境造成污染。护送样品的人应清楚接收地点和接收人，实验室负责人或其指定的人员应及时确认样品已送达指定的实验室，被转入安全位置并得到妥善处理。被污染或可能污染的材料在带出实验室前应进行消毒。用后的包裹应进行消毒。用于国际空运的样品要按照国际空运协会（IATA）的规则进行包装和标记，并提交相应的资料。使用利器注意事项应尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺伤。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒。应使用安全针具采血，如蝶形真空针，自毁性针具等，以降低直接接触血液和刺伤的危险性。应将用过的锐器直接放入耐穿、防渗漏的利器盒，用过的针头应直接放入坚固的容器内，消毒后废弃禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接触使用过的针头、刀片等利器。污染物处理艾滋病实验室产生的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，经高压消毒后再进行处理或废弃。艾滋病检测实验室常用的消毒方法物理消毒方法高压蒸汽消毒，121℃，保持15～干燥空气烘箱消毒（干烤消毒）140℃，保持2～3h化学消毒方法含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000～5000mg/L）75%乙醇2%戊二醛艾滋病检测实验室物品常用的消毒方法废弃物缸：5000mg/L次氯酸钠。生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。溢出物：5000mg/L次氯酸钠。污染的台面和器具：2000mg/L次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。生物安全柜生物安全柜处理危险性微生物时所用的箱型空气净化安全装置。I类生物安全柜至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态时保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。Ⅱ类生物安全柜至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出。工作状态下遵守操作规程时既保证工作人员不受侵害，又保证实验对象不受污染。CLASSII级生物安全柜CLASSII级生物安全柜根据结构以及气流分配不同主要是外排气流不同分为：A型:（30%排在室内）B型:B1（70%接管道外排）B2（100%接管道外排）B3（30%接管道外排）CLASSIIA生物安全柜生物安全柜的使用位置操作人员意外事故处理发生意外事故时，应针对事故的类型立即进行紧急处理，主要包括：皮肤针刺伤或切割伤，应立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口。皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。粘膜污染：用大量流水或生理盐水冲洗污染部位。衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。污染物泼溅：小范围污染物泼溅，应立即进行消毒处理和清洗。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场，查清情况，确定消毒的程序。发生空气污染时，可采用低温蒸汽甲醛气体对空气进行消毒，但甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和实验室的常规空气消毒。如果发生重大泼溅事故，应采取以下措施进行：从污染处疏散人员，但要防止污染扩散；控制污染扩散，锁门并禁止人员进入；通知实验室主管领导、安全负责人等，查清情况，确定消毒处理的程序；必要时可进行生物安全柜和/或实验室的低温蒸汽甲醛气体消毒，使用这种方法生物安全柜和/或实验室必须密闭，人员必须离开。具体操作可按说明书执行。溢漏处可用经消毒剂浸泡的吸水物质覆盖；消毒剂作用10－15分钟后，移走吸水性物质，用消毒剂冲洗，用水清洗。意外及事故的登记、报告和检测对重大意外和事故必须进行登记，对职业暴露事故应填写“艾滋病职业暴露人员个案登记表”。对重大意外和事故必须进行报告和检测步骤1：确定暴露级别步骤2：确定HIV传染源头严重程度哪些情况暴露不会导致HIV感染由于职业暴露而导致的HIV感染的概率是很小的，并不是每一次职业暴露都会导致HIV感染的发生，许多情况下可以不必过度紧张担心，如：（1）经证实接触的可疑血液或体液为HIV阴性；（2）完整无损皮肤或无新鲜流血的陈旧性伤口等接触HIV阳性血液、感染性体液；（3）

完整无破损皮肤或无新鲜流血的陈旧性伤口等接触HIV阳性血液、感染性体液且及时冲洗消毒后；（4）

完整粘膜或皮肤粘膜结合部短时接触少量、低滴度（如HIV血浆浓度低于1500拷贝/毫升）HIV阳性血液或感染性体液；感染风险应将职业暴露补救防护药品放在医务人员24小时都能拿取的地方。保证有足够的医疗防护用品贮存，并能随时取用。要求医护人员在发生职业暴露的第一时间按照处置流程进行防护，并及时报告感染办进行职业暴露备案登记存档管理。规范建立健康档案，定期免疫接种。加强过程控制中相关细节的管理改善洗手条件：配备感应或脚踏式洗手装置，以洗手液替代肥皂。洗手标准化：将洗手的步骤、时间以图示方式张贴于洗手处。医疗废物严格按分类处理，明显标识，双层包装，防渗漏，防遗撒。锐器置入锐器盒内。制定减轻职业压力的策略新职员安全操作培训建立暴露后预防和普遍性应急预防方案案例提示1、在处理一次性医疗用品时，要将针头、刀片等锐器与其它物品分开存放和处理，锐器等要装在耐刺的朔料桶中，以免发生被混在污物中的锐器扎伤等事故。2、暴露级别为2级，暴露源级别为重度类型；3、在发生职业暴露后马上进行局部紧急处理是对的；4、发生职业暴露后，最好在4小时内服药，即使超过了24小时仍然要服药。案例提示1、在临床工作中，尤其在为艾滋病人的医疗操作中，一要注意戴口罩，二要戴防护眼镜。2、这属于粘膜的暴露，不要用眼药水滴眼，否则容易损伤粘膜，增加感染的机会。3、在暴露源不明时，先采取必要的预防措施，待暴露源明确后，要根据暴露级别和暴露源类型重新调整用药方案。艾滋病的流行与实验室诊断一、艾滋病简介二、艾滋病流行现状（全球、全国、全省）三、艾滋病实验室诊断四、实验室质量控制五、生物安全与职业暴露预防一、艾滋病简介人类免疫缺陷病毒(HIV)获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的病原体慢病毒属的逆转录病毒感染和破坏CD4+T淋巴细胞，导致免疫系统的损害HIV-1亚型：A-J（M），O和NHIV-2亚型：A-FHIV的传播史来自猿猴免疫缺陷病毒(SIV)-1700B.C.从SIV分离出HIV-1-1930’sAIDS可能开始於非州-1950’s首次报导於中非-1981散播到中美，美国，欧州HIV的构造Gp120壳糖蛋白Gp41壳糖蛋白P17基质蛋白P24内膜蛋白逆转录酶蛋白酶脂质膜层病毒DNA嵌入细胞核的DNA接合体液可能感染脑脊髓液滑膜液胸膜液腹膜液心包液羊膜液脓体液中HIV含量传染源：艾滋病人与艾滋病毒携带者易感人群所有人高危人群：1、多性伴人群，如嫖娼卖淫、同性恋2、经常使用或接触血液者，如血友病人、受血者3、注射吸毒者4、性病病人5、艾滋病毒感染者的配偶、子女6、艾滋病人的密切接触者，如医务人员二、艾滋病流行现状

（全球、全国、全省）报告HIV的传播途径构成流行特点传播方式复杂隐蔽90年代初期，仅在援外人员中发现艾滋病感染者90年代中期，出现了经采供血感染和注射毒品感染的病例-90年代后期，又发现了经性接触传播的病例-艾滋病传播的三种途径在我省都已出现HIV/AIDS:报告人数仅为冰山一角今天艾滋病在中国流行的形势三、艾滋病实验室诊断诊断的重要性及时发现和治疗，延长生命进行防治教育，改变高危行为、预防进一步传播和职业暴露减低母婴传播的危险性早期治疗，保障和稳定免疫系统的应答功能检测病毒-检定抗体，抗原-病毒核酸(DNA/RNA)免疫系统–CD4计数检测HIV的血清学检测 急性期–病毒量与抗体非急性期–抗体HIV感染者的监测病毒量与CD4计数的追踪检测窗口期感染后，血液HIV检测结果阴性期间90%感染者在暴露3个月后，检测结果阳性10%在暴露后3至6个月间，检测结果阳性HIV抗体的检测:检测的可靠性假阴性:输血者1/251,000(0.0004%)结果假阴性的原因-窗口期:期限中数，1个月；很少>6个月

-HIV-1分类亚型(SubtypeO)

-不正常的机体反应结果错误的最主要原因：电脑和工作人员的错误意料外的结果应重复检测急性期/早期感染HIV抗体的适当检测时间-基线(Baseline)-暴露后6周-暴露12周-暴露后26周暴露六个月后，病毒抗体检测结果大致已转阳性艾滋病EIA方法发展病毒量检测血液中病毒量(计数/亳升)PCR(多聚酶链锁反应)或bDNA能影响开始药物治疗的时间与药物的选择(若病毒量>100,000/毫升,能预测病症的发展容许三倍的误差存在：例如30,000可算是介乎10,000与90,000间的任何可能数值同时发生的疾病和新近的疫苗注射可使检测结果反常治疗的目标:病毒量低于测量的限度–“测不到”,=<50/亳升核酸检测对血液安全的影响意大利93家血液中心开展核酸检测2001年至2006年6年来对血液安全的影响结果。资料来源：Transfusion.2008Oct;48(10):2205-13各种诊断检测法的检定HIVCD4计数单位:计数/毫升或淋巴细胞中CD4的百分比%正常计数:600-1200典型的下降:50-100/年-CD4是评估病人的至关重要的基础-是确定HIV感染发展、抗病毒治疗、预防机会性感染的依据当CD4<200，大多数感染开始同时患有其他疾病和新近的疫苗注射可使检测结果反常定期追踪检测是关键AIDS的正式诊断CD4<200或AIDS的临床表现从HIV到AIDS不能治愈药物可局部治疗免疫缺陷并发疾病药物可抑制病毒，延长寿命作病毒量(ViralLoad)和免疫系统(CD4计数)的追踪检验四、实验室质量控制室内质量控制试剂盒内部对照：阳性、阴性对照室内质控品：外部质控品。以此数据绘制质控图-Levey-Jennings质控图是最常用的质控图，该图使用累计和技术或趋势分析技术的图形提供系统偏移和漂移的状况。-“即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可对第3次检验结果进行质控。Levey-Jennings质控图绘制在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数（）和标准差（s）,超出2s或3s的数据不应删除。将均值（）和标准差（s）分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标（Y轴），每一批次试验作横座标（x轴），绘制质控图。从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。实验室质量考评质量控制是对从样品接收到发出报告整个过程每个环节的管理过程，包括：-人员能力；-实验室分区和环境；-仪器设备；-检测过程（试剂、操作过程，外部质控品使用）。考评方式问卷调查与相关信息收集发放外部质控样品现场检查反馈与通报五、生物安全与职业暴露预防生物安全保证措施建立安全制度培训和管理个人保健和防护安全操作使用利器注意事项污染物处理意外事故处理职业暴露后处理原则及时原则报告原则保密原则知情同意原则职业暴露后预防局部急救对暴露级别的评估对暴露源的评估预防性用药报告与保密HIV抗体的实验室检测本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。HIV抗体检测实验室要求应符合《全国艾滋病检测工作管理办法（2006年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。应符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。实验室安全按本规范第八章规定执行。实验室的质量保证按本规范第九章规定执行。HIV抗体检测的目的HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。研究HIV抗体检测的要点根据目的选择检测方法及检测策略。严格遵守实验室SOP。筛查试验阳性，须作确证试验。筛查试验阴性，不应做确证试验。筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。达到保证措施的必要条件贯彻有关HIV检测的法规有效的检测方法和检测试剂常规质量控制和质量保证全国艾滋病检测工作管理1990.全国HIV检测管理规范（试行）1997.9.全国艾滋病检测工作规范2003.5.全国艾滋病检测技术规范（试行）------“规范”------“办法”

2004.8全国艾滋病检测技术规范2009.9全国艾滋病检测技术规范（修订版）2006.6全国艾滋病检测工作管理办法------“办法”艾滋病检测实验室检测信息上报各级艾滋病检测实验室所在机构每月应填写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》（附表6），并于每月10日前完成网络直报。未开展网络直报的单位，由县级疾病预防控制机构收集信息后统一上报。HIV感染的实验诊断检测方法HIV培养，核酸测定，P24抗原检测，血清抗体测定金标准血清HIV抗体测定，HIV感染后平均25天检出，待12周时几乎全检出HIV抗体检测两个阶段（筛查和确证）三个程序（筛查－复检－确证）五种标本（血清，血浆，滤纸干血斑，唾液，尿液，）HIV感染后的血清学动态血清学检测标准的血清学检测指用EIA进行筛查，然后用免疫印迹实验（WB）进行确证。EIA筛查实验需要重复，复测阳性是做WB检测的指征。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应进行随访，必要时考虑进行HIV-1p24抗原或核酸检测。HIV抗体筛查---筛查（-）出具“HIV抗体阴性”报告筛查（+）出具“HIV抗体待复检”，不能出阳性报告---复查填写“HIV抗体复检检测单”，两人签字（检验人员、审核人员）重新采集受检者的血样原样和新样连同送样单送确证实验室做好检测前后咨询初筛试验结果的报告对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具”HIV抗体阴性”报告（可用附表1）；对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复检”报告（附表1）。初筛试验呈阳性反应样品的转送如需送上级实验室进行确，需要填写“HIV抗体复检检测单”（附表2），经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确证实验室。检测的方法一、检测HIV抗体筛查方法1.酶联免疫吸附试验（ELISA/EIA）2.化学发光或免疫荧光试验3.快速检测（RT）及其它检测试验明胶颗粒凝集试验（PA）免疫渗滤试验免疫层析试验二、确证试验方法免疫印迹试验（WesternBlot)条带免疫试验放射免疫沉淀试验（RIPA）免疫荧光试验（IFA）等。酶标免疫技术(EIA)人员培训◎ELISA原理；

◎临床意义；

◎熟悉检测技巧，

◎熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；

◎熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

◎需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。方法间接法Ag+Ab→Ag-AbAg-Ab+IgG＊竞争法Ag+Ab/Ab＊夹心法Ag+Ab→Ag-AbAg-Ab+Ag＊ELISA检测试剂根据其设计原理、抗原制备难易和历史发展可粗分为四代。第一代产品是使用HIV全病毒裂解物为抗原，应用间接法原理检测HIV抗体；第二代产品是使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽HIV抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。第三代试剂使用合成多肽HIV抗原（少数用重组抗原），应用双抗原（或双抗体）夹心法原理检测HIV抗体（或抗原）。第四代试剂是已超出只查抗体的传统酶联方法，可同时测出抗体和抗原。每一代HIVEIA试剂实验原理HIV“窗口期”第一代HIVAb:6-8星期酶联免疫试剂操作步骤试剂盒选择必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。敏感性:是该方法能够检测出最弱阳性标本的能力，

真阳性数敏感度=×100%真阳性数+假阴性数特异性：是该方法能够检测出真阴性标本的能力。真阴性数特异度=×100%真阴性数+假阳性数精密度：ELISA试剂一般指其批内CV，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围试剂盒选择稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于37℃保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为37℃每稳定一天相当于4-10℃保存一个半月。简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性试验中结果判断简单明了，定量试验结果计算也应简单。安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；试剂评价需要有权威的血清考核盘（Panel）进行检测，由于Panel一般实验室不易取得，每进行一次试剂评价也很麻烦。可以通过间接的信息对试剂进行选择。根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。如参考中国CDCAIDS参比实验室组织的《全国HIV抗体诊断试剂临床质量评估》结果对试剂进行选择。仪器质控为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。移液器：ELISA加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；水浴箱

经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；洗板机

每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪

经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。EIA结果判断OD值各孔OD值是通过某一波长的一束光自上而下照射，并检测被液体吸收的光的量。Cut-off值（临界值）是将检测的阳性和（或）阴性对照的OD值代入厂商提供的计算公式计算出来的判断阳性和阴性结果的界值。不同厂商、不同方法的试剂临界值计算公式不同。EIA结果判断有反应：样本的OD值＞CUTOFF值无反应：样本的OD值＜CUTOFF值不确定（灰色区）：CUTOFF值上下10%灰区概念

把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将CO值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告+（阳性）。

灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。灰区的设置有二种：

1）C.O×（1±CV），

CV为该试剂的批内CV

(一般在15-20%间）；

2）C.O±2s，s为实验室做室内质控ROC的s。EIA影响因素反应时间温度酶结合物的稳定性影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法EIA试验的优缺点化学发光或免疫荧光试验这类试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。快速检测（RT）及其它检测试验明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。凝集试验与ELISA的原理比较凝集试验与ELISA操作步骤的比较小结操作简便，不需任何辅助设备可以单人份操作SFDHIV1/2PA可同时检测HIV-1型（包括O群）和HIV-2型抗体。由于使用了重组抗原及明胶颗粒凝集技术，试剂的敏感性和特异性均较高。对HIV血清转化盘的研究显示：敏感性与酶免法相当特异性高于99.8%免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。此法操作简便，不需特殊仪器，出结果快，特别适合在未产前检查的分娩孕妇、高危行为的求诊者、输血前的急诊者、边远地区供血者、VCT、急诊室、解剖室、殡仪馆以及意外暴露时追踪传染源等情况下使用。对于实验条件差，技术人员水平较低的发展中国家也较适用。但其敏感性、特异性均较ELISA法低，且检测结果结果用肉眼判读，易受主观因素的影响，不同的检验人员观察同一个结果可能会得出不同的结论，弱阳性结果常常较难判别。对筛查结果的解释筛查检测的目的是检出所有的阳性者，因此对筛查试剂的质量要求是敏感性必须好，在注重强调敏感性的情况下，特异性不可避免地受到影响。出现假阴性或假阳性结果，同时还有可能出现的技术误差等等。因此分析筛查结果时，必须全面考虑。解释结果要十分谨慎，这也是为什么筛查实验的阳性结果不能最终确定为HIV抗体阳性，必须做确证实验才能下结论。假阳性结果一些含有针对HLA抗原的抗体患自身免疫性疾病（如系统性红斑狼、风湿病等寄生虫（如疟疾等）其他病毒（如病毒性肝炎等）近期疫苗接种（如流感疫苗接种等）高丙种球蛋白症技术误差实验中出现技术误差是难免的，特别是在一次做大批量检测时。血清标本或试剂稀释或配备不正确加样器污染或不正确加错标本临近孔交叉污染洗涤程序错误吸光检测不正确假阴性结果“窗口期”感染者严重的HIV相关免疫紊乱者血清转换期：一些病人在病程的晚期发生血清学转换，可能由于免疫系统的崩溃所致；也可能于HAART治疗导致免疫重建的病人IgG抗体缺乏者抗原量过量对确证结果的解释WB的检测结果是在转印条膜特异性HIV抗原的位置上出现深浅不同的条带，按照不同的的带型，最终结果可以判断为HIV抗体阳性、HIV抗体阴性、HIV抗体不确定。HIV抗体阳性：说明是真正感染了HIV，为HIV感染者或AIDS。HIV抗体阴性：①未感染HIV②“窗口期”感染者对确证结果的解释HIV抗体不确定：是一个比较令人困惑的问题。不仅筛查阳性的标本可以出现不确定的结果，筛查阴性的标本做WB检测时也有大约15%出现一个或几个抗原的不确定结果。早期感染：有过HIV感染危险行为的个体。处在血清转换的过程，出现P24最多见，2—3个月以后可以显示确切的阳性反应。在WB条带中，P24、P31和P55比单独P17预示早期感染的价值高得多。对确证结果的解释AIDS病人：在病程的晚期，可能丧失对P24抗原和其他抗原的反应性而表现为持续的不确定结果。非特异性反应：共同抗体的交叉反应，多见于胶原-血管疾病，自身免疫性疾病、恶性肿瘤、高球蛋白血症及其他病原微生物感染等。对不确定结果如何处理不论是哪种可能都应进行随访，结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。对不确定结果如何处理随访期间可根据需要，检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，根据实际情况需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确证试验或HIV-2核酸检测，以进一步明确HIV-2感染状态，疑难样品送国家艾滋病参比实验室进一步分析。检测与咨询全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）

全国艾滋病检测工作管理办法共八章三十五条本办法由卫生部负责解释，自发布之日起施行二○○六年六月十二日本管理办法适用于全国所有开展艾滋病检测工作的机构第一章总则目的：为加强对全国艾滋病检测工作的监督管理，规范艾滋病检测实验室的设置和验收，确保艾滋病检测工作质量依据：《中华人民共和国传染病防治法》、《艾滋病防治条例》和国家相关法律、法规的规定，卫生部对1997年颁布的《全国艾滋病检测工作规范》进行了补充修改,制订了《全国艾滋病检测工作管理办法》卫生部主管全国艾滋病检测及其监督管理工作，县级以上地方卫生行政部门主管辖区内的艾滋病检测及其监督管理工作。中国疾病预防控制中心及各省、自治区、直辖市疾病预防控制中心承担艾滋病检测的日常管理工作。各级疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、计划生育技术服务机构等承担职责范围内的艾滋病检测工作，并接受中国疾病预防控制中心及省、自治区、直辖市疾病预防控制中心的业务指导。

第二章艾滋病检测实验室的设置省级以上卫生行政部门根据医疗卫生机构布局和艾滋病流行情况，统筹规划确定承担艾滋病检测工作的实验室。国家对艾滋病检测实验室实行分类管理，按照实验室的职能、开展检测工作的性质及范围共分三类实验室，分别是艾滋病参比实验室、艾滋病检测确证实验室、艾滋病检测筛查实验室。艾滋病参比实验室艾滋病参比实验室设在中国疾病预防控制中心。其职能包括：1、承担全国艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导和评价工作。2、建立全国艾滋病检测质量保证及质量控制体系，组织国家级实验室能力验证和艾滋病诊断试剂临床质量评估。

3、承担艾滋病检测疑难样品的分析和确证，对有争议的检测结果进行仲裁，出具最终检测报告。4、开展应用性研究，承担与艾滋病防治相关的病原学鉴定、现场综合防治、调研、监测、临床治疗等工作中的相关检测任务。5、建立国家艾滋病病毒毒种库、样品库、质控品库、基因库和细胞库。6、为艾滋病确证中心实验室开展省级实验室质量管理、省级艾滋病诊断试剂临床质量评估和自愿咨询检测等工作提供技术支持和指导。7、组织全国艾滋病检测相关业务培训，组织制定和修改与艾滋病检测工作有关的技术规范和指南。艾滋病检测确证实验室包括艾滋病确证中心实验室和艾滋病确证实验室。艾滋病确证中心实验室设在省级疾病预防控制中心。艾滋病确证实验室可设在疾病预防控制机构、医疗机构、血液中心、计划生育技术服务机构等。艾滋病确证中心实验室职能负责职责范围内艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导和评价，组织艾滋病检测实验室人员技术培训。建立艾滋病检测实验室质量控制体系，组织省级实验室能力验证和艾滋病诊断试剂的临床质量评估。承担省级卫生行政部门指定区域内的艾滋病病毒抗体确证、抗体筛查和其他艾滋病检测工作。开展应用性研究，承担与艾滋病防治相关的病原学鉴定、现场综合防治、调研、监测、临床治疗等工作中相关的检测任务。建立职责范围内的艾滋病检测样品库和质控品库。收集、整理和分析艾滋病检测数据及相关资料，建立艾滋病检测实验室基本资料库和艾滋病检测资料数据库。定期向省级卫生行政部门和中国疾病预防控制中心报告艾滋病检测数据及相关资料，并配合其做好个案调查、登记等随访工作。负责对开展自愿咨询检测工作的艾滋病检测实验室的技术支持和指导。艾滋病确证实验室职能

承担当地卫生行政部门指定的艾滋病病毒抗体确证、抗体筛查和其他艾滋病检测工作。及时向艾滋病确证中心实验室报告经确证的阳性结果，并配合其做好个案调查、登记等随访工作。承担当地卫生行政部门指定的艾滋病检测筛查实验室的业务技术指导、培训和评价任务。定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病确证中心实验室和同级卫生行政部门。协助艾滋病检测实验室开展自愿咨询检测工作，给予技术支持和指导。艾滋病检测筛查实验室包括艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点。艾滋病筛查中心实验室设在市（地）级疾病预防控制中心；艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点可设在疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、计划生育技术服务机构等。艾滋病筛查实验室职能

（1）开展艾滋病病毒抗体的筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。

（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。

（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。

（4）对自愿咨询检测工作提供技术支持。艾滋病检测点职能

（1）开展艾滋病病毒抗体的筛查试验。

（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。

（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。

（4）开展艾滋病自愿咨询检测工作。第三章艾滋病检测实验室的验收开展艾滋病检测工作的实验室要经过技术和条件验收，未经验收或验收不合格的实验室不得开展艾滋病检测工作。设立艾滋病检测实验室的机构或单位应向省级卫生行政部门提交申请书。省级卫生行政部门组织专家组按照“艾滋病检测实验室基本标准”（见附件），对艾滋病检测实验室人员业务能力、设施、条件等进行验收。艾滋病检测确证实验室的验收

省级卫生行政部门组织专家组对申请材料进行审查，对符合规定、材料齐全的申请者，组织有国家级专家参加的省级艾滋病检测实验室验收专家组进行现场验收。省级卫生行政部门对通过验收者发出合格通知，同时抄送省级疾病预防控制中心，未通过验收者整改后可重新提出申请。艾滋病检测筛查实验室的验收省级卫生行政部门组织专家组对申请材料进行审查，对符合规定、材料齐全的申请者，由省级（或市地级）艾滋病检测实验室验收专家组进行现场验收。省级卫生行政部门对通过验收者发出合格通知，同时抄送省级疾病预防控制中心，未通过验收者整改后可重新提出申请。省级卫生行政部门在组织对采供血机构执业验收时，应选派艾滋病检测实验室验收专家组专家参加对采供血机构实验室的验收。采供血机构取得执业许可后，抄送省级疾病预防控制中心备案。迁移艾滋病检测实验室或变更艾滋病检测实验室的类别，按本办法上述规定重新申请验收。省级卫生行政部门应将艾滋病检测实验室验收情况对外公布，并接受相关部门的监督检查。第四章艾滋病检测工作要求艾滋病检测实验室应在规定的职能范围内开展检测工作，遵守国家法律、法规和有关规范。检测技术及程序应符合《全国艾滋病检测技术规范》的要求。艾滋病检测实验室技术人员需要经过相关的业务培训，经考核合格者由相关机构发给培训证书，持证上岗。非卫生专业技术人员不得从事艾滋病检测工作。艾滋病检测实验室中使用国家规定需要强检的仪器设备，必须由同级或上级计量认证部门定期检定，非国家强检的仪器设备应定期要求厂家或供应部门维护和校准。艾滋病检测实验室中使用的检测试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册、且符合相关要求的试剂。艾滋病检测筛查实验室发现艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品必须及时送艾滋病检测确证实验室，不得擅自处理。艾滋病检测确证实验室收到送检样品后应尽快进行确证试验，最迟不得超过十个工作日，一次性检测大量样品等特殊情况除外。艾滋病检测确证实验室出具的艾滋病病毒抗体确证报告应以保密方式发送。艾滋病病毒抗体确证试验结果应当告知本人；本人为无行为能力人或者限制行为能力人的，应当告知其监护人。艾滋病检测实验室应有专人负责妥善保存检测记录和各种档案，不得擅自修改和销毁。记录保存期不少于十年，国家法律、法规另有规定的，依照有关规定执行。艾滋病检测工作应遵守自愿和知情同意原则，国家法律、法规另有规定的除外。艾滋病自愿咨询检测需按《艾滋病免费自愿咨询检测管理办法（试行）》执行。艾滋病检测实验室工作人员不得泄露艾滋病病人或感染者的姓名、住址、检测结果等有关情况。第五章艾滋病检测工作中的生物安全艾滋病检测实验室应按照国家有关法律、法规的相关规定，对污染场所、物品以及医疗废弃物进行消毒和无害化处置，遵循“标准防护原则”，防止实验室内外污染。艾滋病检测工作中涉及到艾滋病病毒毒种（株）和检测样品的采集、保藏、携带、运输，必须符合卫生部的有关规定。艾滋病检测实验室必须执行《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004）的要求及卫生部的有关规定。艾滋病检测实验室人员发生职业暴露后，应按照《医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则（试行）》及其它相关规定及时处理。第六章实验室质量管理艾滋病参比实验室负责对全国艾滋病检测实验室的检测质量进行检查。艾滋病确证中心实验室负责对职责范围内的艾滋病检测实验室的检测质量进行检查。艾滋病检测实验室应建立健全实验室质量保证和质量控制体系，并有专人负责质量体系的正常运转。艾滋病检测筛查实验室必须参加省级以上实验室能力验证；艾滋病检测确证实验室必须参加中国疾病预防控制中心组织的实验室能力验证。艾滋病检测实验室能力验证结果由组织者定期公开发布。第七章监督管理各级卫生行政部门应当加强对艾滋病检测实验室的监督管理工作。实验室未经验收或验收不合格擅自开展艾滋病