白掌种苗组培快繁技术规程DB50-T 1148-2021

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DB50重 庆 市 地 方 标 准DB50/T1148—2021白掌种苗组培快繁技术规程202120211101发布20220201重庆市市场监督管理局发布DB50/T1148DB50/T1148—2021前  言本文件按照GB/T1.1―2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由重庆市农业农村委员会提出并归口。本文件起草单位：重庆市农业科学院。本文件主要起草人员：杨小艳、谢树章、王忠伟、韩垚、林清、吴红、王虹。IIDB50/T1148DB50/T1148—2021DB50/TXX—DB50/TXX—XXXX下列缩略语适用于本文件。6-BA：6-苄基腺嘌呤（6-benzylaminopurine）IBA：吲哚丁酸（3-indolebutyricacid）MS：一种常用基本培养基（Murashige和Skoog（1962））NAA：萘乙酸（naphthyleneaceticacid）Tween-20：聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯（Polyoxyethy-lene(20)SorbaitanMonolaurate）白掌种苗组培快繁技术规程范围本文件规定了白掌种苗组培快繁的设施设备、操作流程等技术要求。本文件适用于白掌种苗的生产。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8321农药合理使用准则GB19489实验室生物安全通用要求NY/T496肥料合理使用准则通则3术语和定义3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1白掌Spathiphyllumfloribundum又名白鹤芋、苞叶芋、银苞芋，为天南星科白鹤芋属多年生常绿草本花卉。3.2组培快繁tissuecultureandrapidpropagation3.3外植体explant从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。3.4组培苗plantlet利用植物组织、器官或细胞等作为起始材料，通过植物组织培养方式生产获得的植株。4缩略语1设施设备设施要求（生产流水线仪器设备要求包括高压灭菌器、紫外灯、臭氧发生器、电子天平、pH（电热杀菌器（包括日光灯（（量筒、容量瓶等）以及其他常用消耗品等。仪器设备应符合GB19489的规定。6组培快繁操作流程6组培快繁操作流程接种前准备培养基配制和灭菌培养基配制芽诱导培养基：MS+1mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.6～5.8。继代增殖培养基：MS+0.4mg/L6-BA+0.05mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.6～5.8。生根培养基：1/2MS+0.05mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，pH值为5.6～5.8。配制培养基用水应不低于GB/T6682规定的三级水。6.1.1.2培养基灭菌培养基配制完后，分装至组培瓶中。121℃高压灭菌15min～20min，取出冷却备用。超净工作台消毒超净工作台（或洁净无菌接种室）提前30min30minmin～20min75%酒精擦洗超净工作台台面消毒。接种人员准备2（或接种服（或经过风淋室后进入接种室），操作前和操作中经常用75%酒精棉球擦手。外植体接种外植体的选择应选择长势健壮、叶色浓绿有光泽、花朵大、无病虫害的优良植株带侧芽的当年生茎段。外植体的消毒灭菌处理将选好的白掌侧芽茎段去除叶片后，用自来水冲洗干净，切除在外暴露的表皮，用75%酒精浸泡消毒1min，倒出酒精后，用无菌蒸馏水冲洗2次，再用3%次氯酸钠溶液（现配现用、避光）加1滴～2滴Tween-20消毒15min～20min，并不断摇动。将次氯酸钠溶液倒出，用无菌蒸馏水冲洗5次～6次，用无菌滤纸吸干水分。接种器械灭菌接种器械先用75%酒精擦拭，再放在酒精灯外焰上灼烤，时间≥10s。若使用接种用电热灭菌器，接种器械先用75%酒精擦拭，待电热灭菌器温度升至250℃～300℃，再插入接种用电热灭菌器中进行灭菌，第一次灭菌3min～4min，以后每次使用灭菌≥15s。外植体接种将侧芽茎段平放在无菌滤纸上，用解剖刀剥掉外层叶片后，切取顶端0.5cm～0.8cm的芽组织，接培养芽诱导外植体接种到芽诱导培养基后，将组培瓶整齐、均匀摆放在培养架上，温度25℃，光照强度2000lx～3000lx，光照12h，黑暗12h，诱导时间为40d～60d。培养期间定期观察材料生长情况，并作好记载，如发现污染，应及时将污染瓶移出培养室，待高温灭菌后清洗或丢弃。继代增殖快繁提取母瓶应仔细检查，剔除污染母瓶。取苗先打开组培瓶盖，瓶口不应斜向外，将取出的白掌丛生苗放于无菌的碟子上分苗。切苗接种3～4株～8株（团）/瓶。接种完毕后做好标记，注明材料名称、接种3DB50/TXX—XXXX日期、培养基类型等事项。培养室温度为25℃，光照强度2000lx～3000lx，光照12h，黑暗12h，30d继代一次。生根壮苗10/2000lx～3000lx，光照12h，黑暗12h，30d组培苗炼苗与移栽管理组培苗移栽要求生根培养30d后，株高2.5cm～5.0cm；茎干粗壮，不徒长；叶数3片～5片，叶色翠绿，幼苗基部长出3条以上、长1cm～3cm的新根，根系粗壮有活力。炼苗将生根后的瓶苗移出培养室放入驯化室松盖炼苗2d20～28lx～5000lx，保持环境洁净。移栽基质准备用粗细度0mm～10mm泥炭加水搅拌预湿，相对含水量为55%～60%。移栽移栽0.2+0.12min～5min后，种植至装有基质的50（长宽28.5cm×54cm，孔径3cm×3cm）中，再用0.2%多菌灵+0.1%生根粉溶液浇透基