姜黄素对马兜铃酸诱发的膀胱肿瘤的预防作用

姜黄素对马兜铃酸诱发的膀胱肿瘤的预防作用【摘要】目的以马兜铃酸诱发的膀胱癌为模型，观察姜黄素对膀胱组织的病理变化、ras蛋白和p53蛋白及细胞角质蛋白20〔k20〕的变化，评价姜黄素对马兜铃酸诱导膀胱癌的化学预防作用及发活力制。方法50只大鼠随机分为对照组、诱癌组、预防组三组。诱癌组：给予10g〔kg·d〕马兜铃酸给大鼠灌胃,连续诱癌3个月；预防组：在诱癌的同时给予含2%姜黄素粉的饲料进展化学防护；对照组：为正常饮食和饮水。3个月后宰杀全部大鼠，取膀胱组织进展he染色显微镜下观察病理变化，用免疫组化染色技术检测膀胱组织内ras、p53蛋白的变化，荧光定量pr技术检測k20rna。结果经3个月诱癌，膀胱癌的发生率在诱癌组为95%(19／20)，而姜黄素预防组，膀胱癌的发生率仅为10%〔2/20〕，对照组膀胱黏膜组织ras、p53蛋白及k20rna均呈阴性表达，预防组及诱癌组膀胱黏膜组织ras、p53蛋白及k20rna均呈阳性，且以诱癌组更明显，差异具有统计学意义〔p0.001〕。结论姜黄素对马兜铃酸诱导的膀胱癌具有良好的化学预防作用，可能分子机制与抑制ras、p53蛋白的过度表达才能有关。姜黄素有望成为一种有应用前景的膀胱癌预防药物。【关键词】姜黄素;马兜铃酸;膀胱癌;预防作用preventiveeffetsfuruininratbladderturinduedbyaristlhiaidkeyrds：uruin;aristlhiaid;bladdertur;preventingeffet众多的细胞实验和动物试验证实姜黄素具有确切的抗癌活性，并具有抗癌谱广、毒副作用小的特点，是一种具有开发和应用前景的肿瘤预防和治疗新药[1，2]。马兜铃酸(aristlhiaid,aa)主要从马兜铃酸属植物细辛属植物中提取出来,具有镇痛、消炎、祛痰、利尿、调节血压、抗生育活性等作用以及可预防化、放疗引起的白细胞减少，因此在临床上得到了广泛的应用。然而,在使用过程中,发现含有马兜铃酸的药物常并发泌尿系肿瘤,使得马兜铃酸的致癌性成了一个新的研究热点[3]。本研究利用马兜铃酸诱导膀胱癌，应用2%姜黄素粉饲料对大鼠诱发的膀胱癌进展化学防护，观察姜黄素对马兜铃酸诱导膀胱癌的化学预防效果，为寻找马兜铃酸诱导膀胱癌的化学预防药物提供根底性资料。1材料与方法1.2动物模型选用6周龄的清洁级istar大鼠50只，体重170～210g。分为对照组(10只)、诱癌组(20只)、姜黄素预防组(20只)。诱癌组给予10g〔kg·d〕马兜铃酸给大鼠灌胃,连续灌胃诱癌3个月；预防组，同样给予10g〔kg·d〕马兜铃酸给大鼠灌胃,连续灌胃诱癌3个月，诱癌同时给予含2%姜黄素粉的饲料进展化学防护。对照组为正常饮食和饮水。动物饲养在武汉大学附属第一医院spf动物实验室。于３月末宰杀各组所有大鼠，统计大鼠膀胱癌发生率。1.3组织取材宰杀的大鼠迅速取膀胱组织。迅速把部分膀胱组织冻存于液氮罐中，储存备用。剩余的膀胱组织切成大小约为1×1×0.5,4%多聚甲醛固定20～24h。he染色显微镜下观察膀胱组织的病理变化。1.4免疫组化染色每例膀胱组织分别取6点，根据sp系列试剂盒说明进展ras、p53蛋白免疫组化染色。阴性对照的一抗用pbs代替，阳性对照用己知阳性片进展染色。每张切片均观察整体染色情况，选择5个有代表性的区域，每区计数200个细胞。统计每1000个细胞中的阳性细胞数，计算阳性细胞率。阳性细胞数≤10%为阴性，11%～30%为弱阳性，31%～50%为阳性，50%为强阳性。ras蛋白在胞浆，呈黄色；p53蛋白在胞核，呈棕褐色。2结果2.1不同处理组之间肿瘤形成的差异如图1所示，经3个月诱癌，膀胱癌的发生率在诱癌组为95%(19／20)；而姜黄素预防组，膀胱癌的发生率仅为10.0%〔2/20〕，不典型增生的发生率为20%〔4/20〕，显示姜黄素具有良好的化学防护作用。2.2姜黄素对p53、ras基因蛋白的影响10例对照组膀胱黏膜组织ras、p53基因蛋白表达均呈阴性。20例预防组及20例诱癌组的大鼠膀胱黏膜组织ras、p53基因蛋白均呈阳性，且以诱癌组更明显，具有明显统计学意义〔p0.001〕，见表1、2，图1d～i。2.3不同组别k20表达程度的比较3讨论姜黄是一种多年生草本植物，其药用部分为根茎。姜黄素是其中的主要活性成分，生活中可作为调料和食物染色剂。同时姜黄素药理作用广，具有抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂等作用，ra等[4]报道2000pp的姜黄素能明显抑制氧化偶氮甲烷(a)诱导的f344鼠的大肠癌。2%的姜黄根粉也可抑制化学诱癌剂诱发的皮肤癌和胃癌[5]。最近，孙明等[6]报道了姜黄素对膀胱癌ej细胞的抑制作用。同时，姜黄素毒性很低，沃兴德等[7]进展了长期毒性试验，高剂量500g(kg·d)，连续80天，动物各项检测指标未见异常。同时用人一次口服剂量的600倍对大鼠进展最大耐受量试验，动物未见任表1姜黄素对各组p53基因蛋白的影响:p0.001何不良反响。huang等[8]报道了姜黄素的一期临床试验结果，8000g/d,连续口服3个月，自愿者未发现不良反响。因此姜黄素是一种较理想的膀胱癌化学预防药物的候选者。直接把肿瘤发病率降低作为临床化学预防试验的终点指标是不实在际的。随着对肿瘤发生、开展过程中的分子和表型改变的进一步理解，采用中间生物标记物(interedialbiaker)来反映肿瘤的发生开展情况是评价化学预防效果的重要指标之一[12]。理想的中间生物标志物应满足以下条件:〔1〕与肿瘤的发生、开展亲密相关，能反映肿瘤各个阶段特征性的变化;〔2〕容易检测，特别是在早期就能检测到它的变化:〔3〕其变化与预防剂的调控作用相关。一些指标如增殖、分化信号(如肌动蛋白、vientin)和基因/调节的改变(如凋亡、癌基因或抑癌基因的表达)常被用做中间生物指标，评价药物的预防作用[13]。本文采用ras、p53基因蛋白及k20作为姜黄素临床化学预防试验的终点指标，评价姜黄素对马兜铃酸诱导的膀胱癌的化学预防作用，指导治疗，提供马兜铃酸诱导膀胱癌的化学预防药物的根底性资料。【参考文献】[2]aggaralbb,kuara,bhartia.antianerptentialfuruin:prelinialandlinialstudies[j].antianerres,2022,23(1a):363.[7]沃兴德，洪行球，高承