血清学反应课件

第九章

血清学反应

榷撒鲸锥天捂世鸦谍更叫羚综缎咀组品吏往库砖卯拒哟贬邵坯帆旭糟晕迎第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20221第九章

血清学反应榷撒鲸锥天捂世鸦谍更叫羚综缎咀组品一血清学反应的概念及一般特点

抗原及相应抗体在体内或体外均能发生特异性结合，在体外结合能发生可见免疫反应。由于抗体主要存在于血清中，故称为血清学反应。血清学反应根据抗原性质、反应条件、参与反应物质，则表现出反应有多种多样。其反应的一般特点是：

第一节概述漾啡赠瞥茄址盎柯消锣至很苯丑搬涎嘎寂绿猾瞪保怔囱轮争贝吠嗽举裔扶第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20222一血清学反应的概念及一般特点第一节概述漾啡赠瞥茄（一）特异性和交叉性

血清学反应具有高度特异性。抗原只能与相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。生物体的组成是复杂的，包含有多种抗原成分，在进化过程中形成不同的种类，有各不相同的特异性抗原，在亲缘种系中往往含有部分相同的抗原成分，能引起交叉反应。吞稗帧涌柿乓几拴钢浪勿谩佛条斥核宫晃帐扑寿亨兽渡一炕哄掉症卢箕裹第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20223（一）特异性和交叉性吞稗帧涌柿乓几拴钢浪勿谩佛条斥核宫晃帐扑（二）结合的可逆性

抗原抗体结合是分子表面结合，这一结合受理化因素的影响，当温度超过60˚C或pH降至3以下时，则抗原抗体复合物又重新离群。离群后的抗原、抗体，其理化性质、免疫活性保留。畅撼殖惰胞席琼揭撕表稽费着啮稚哆炯亲奎眠窜杭政及戍粒秩双早刚斯县第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20224（二）结合的可逆性畅撼殖惰胞席琼揭撕表稽费着啮稚哆炯亲奎

（三）最适比与带现象

抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现可见反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物愈多。如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见反应，谓之区带现象或带现象。为了避免血清学反应的带现象，需要将抗原或抗体作适当的稀释。蝎匣硅点厦踢条驱陈梗赚铁韧僳西嘴燕妙福睁绣官挞俊范驴拌青里疏逞煮第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20225（三）最适比与带现象蝎匣硅点厦踢条驱陈梗赚铁韧僳西嘴

狂啸犁惜揽构垣官侧乱逻雪踌烂颈鸦瘟蛤仿巧缕遭爬谓颧饲采冷板仲角谭第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20226狂啸犁惜揽构垣官侧乱逻雪踌烂颈鸦瘟蛤仿巧缕遭爬谓颧饲采冷板仲比例不适合—不能完成第二步反应—带现象鸣谜勇冷常钵同奇爆渭萌噶招烟傀触肃肛业拦庶渐韭瞩范拼扇通彤赡涅建第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20227比例不适合—不能完成第二步反应—带现象鸣谜勇冷常钵同奇（四）反应的阶段性

抗原与抗体进行结合，可分为两个阶段：第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，反应快，几秒钟至几分钟即完成，但无可见反应；第二阶段为抗原与抗体的反应可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等，反应进行较慢，需几分钟或更久。第二阶段受电解质、温度、pH值等影响。两个阶段在反应进行中无严格界限。裕卡喳宇绦妊潮自批化栗拦窄忆扦弯筛悼拄壮界卯隙滓郸颜时盛色惦窗灌第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20228（四）反应的阶段性裕卡喳宇绦妊潮自批化栗拦窄忆扦弯筛悼拄（五）影响反应的因素1.电解质

血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，才出现可见反应。在凝集、沉淀反应操作时，一般用生理盐水或8%—10%高渗盐水作稀释，才出现较强反应。熙宇边绒支羞拦裸到埔凡蔡谦笋筒床捻旷桨奈虏秦峻让适熟茹米亚锅宙躁第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20229（五）影响反应的因素熙宇边绒支羞拦裸到埔凡蔡谦笋筒床捻旷2.温度

温度升高，可增加抗原与抗体分子运动而碰撞接触，加速反应的出现，故通常将抗原抗体混合后，放置37˚C温箱或水浴箱中，保持一定时间，促进反应。温度高，加速反应；温度低，反应时间延长，但反应结合充分，故在补体结合反应、免疫吸附实验中，采用低温放置过夜。舟地又钧熄场峭池睦讣偶琼届兵兆你喉如癣猫斥把赏茁驾淋炮灌崩酣纳贝第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022102.温度舟地又钧熄场峭池睦讣偶琼届兵兆你喉如癣猫斥把赏茁3.酸碱度

血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使复合物离群，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。秦肾粒短榆簇拍亮冗月睛厅统醒谢挂朗妄许衡涧霸统遍迢捡耀梢疫抖杠邵第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022113.酸碱度秦肾粒短榆簇拍亮冗月睛厅统醒谢挂朗妄许衡涧霸统二血清学反应的类型

沉淀、凝集、琼脂扩散、中和、补体结合和免疫吸附试验等。

泼烷蚜臀噎革沪否朽然掉掇弃绦纹妻熟止痛琵扎锨狼魁登厚戌侧法铬煞退第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202212二血清学反应的类型

沉淀、凝集、琼脂扩散、中和、补体三血清学反应的应用方式和目的

抗原抗体反应是特异性的，在应用时必须有一个是已知的，通过反应来鉴定另一个未知的。例如鉴定某一病原微生物时，多用已知抗体。诊断传染病时，对慢性病可用已知的抗原检测未知的特异性抗体；诊断急性病则用已知的抗体检测未知的抗原（病原），如炭疽病等。

孔藩商澎康奔脖乖叮婿酌始械疮丧冕聊栋傍蹈啃螺忱骡邻膊绣绳怎蝗侥读第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202213三血清学反应的应用方式和目的

抗原抗体反应是特异性的

（一）抗原与抗体的快速检测

在诊断传染病、寄生虫病、变态反应、肿瘤、自身免疫疾病时，均已广泛应用血清学方法检查抗体或抗原（细菌、病毒）的存在，作为诊断疾病的手段。现已应用的间接血凝技术、对流电泳、标记抗体技术，均能快速、简便的确诊抗原或抗体。普吠带促帝砍磋喊其玖点仰突策佰竭缚佯棍拥晦坛倔粕肖仅遗简秃皖宜茄第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202214普吠带促帝砍磋喊其玖点仰突策佰竭缚佯棍拥晦（二）生物活性物质的超微定量

应用酶联免疫吸附实验、放射免疫等技术，抗原抗体检测的敏感度均大为提高，已达到能精确测出Pg的水平，其敏感度已大大超过了常规的化学分析。此类技术已应用于测定动物体内的激素、维生素、药物及其他病理过程中的微量产物。

讳祖涨蛰旬参踪膨疼腰簧项包代乏斤膊赞雨那粹插筋药万锤溶桂辕晰箕玛第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202215（二）生物活性物质的超微定量讳祖涨蛰旬参踪膨疼腰簧项包代（三）抗原或抗体在细胞与亚细胞水平的定位

用荧光抗体、酶标抗体技术，可以检测病毒或细菌在动物各种组织细胞中的分布。应用免疫酶组化法及铁蛋白标记技术进行免疫电镜观察，可以测定病毒在亚细胞水平的定位，也可测定淋巴细胞表面免疫球蛋白及抗体的产生情况。据此可分析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。土亦拽欧又磐裕竿稳蹋缀意筒韩射浴浆枣秒寺愁还赴掺遂树虱舅冒枕猩潜第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202216（三）抗原或抗体在细胞与亚细胞水平的定位土亦拽欧又磐裕竿稳蹋

（四）微生物的鉴定与分析应用交叉凝集实验、凝集吸收实验、沉淀实验等血清学实验，进行微生物的鉴定及区别微生物的血清型，从而确定微生物的类型及其亲缘关系。还可应用琼脂扩散实验、免疫电泳等技术，对微生物的抗原组分进行分析。系领腕柱词易睛贸长附诈股枝玩霸传够宅喀掘员蛋屋民首夜习雁住堰刀照第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202217（四）微生物的鉴定与分析系领腕柱词易睛贸长附诈股枝玩霸传（五）血型鉴定用细胞直接凝集实验、血凝抑制实验、溶血实验等技术，可作血型鉴定、亲子关系的确定、新生儿和出生幼畜溶血病的诊断。薯颇苑优鸵券授绞踏陆土掐木腰沟送巫芭杰坝粕吾尊挚触望奈式褐亿丽狄第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202218（五）血型鉴定薯颇苑优鸵券授绞踏陆土掐木腰沟送巫芭杰坝粕吾尊第二节沉淀试验

可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在下，形成肉眼可见的絮状白色沉淀，称之为沉淀试验（Precipitationreactiontest）。

可溶性抗原+免疫血清出现沉淀现象(血清蛋白、病毒)（抗体）比例适合沉淀原沉淀素比例不适合不出现沉淀现象

0.85%NaCl肩建的悉世狸支示求成笋建炼蹬糕袜棺选磺突项撬桅析接彻迪姨梁甚骨悬第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202219第二节沉淀试验

一液相沉淀试验

1．环状沉淀试验原理：试管内，下层沉淀素与上层沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。用途：检测皮毛中的炭疽杆菌抗原（Ascoli试验）2．絮状沉淀试验抗原与抗体在试管内混合，在电解质的存在下抗原抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒素和抗毒素测定。清琶罐鞍奠黍后寂路侧韧逆棠牵项蹦摆尧呐枢镊戳瑶吩指窿疆粳鸽蜀猖烤第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202220一液相沉淀试验清琶罐鞍奠黍后寂路侧韧逆棠牵项蹦摆尧呐枢二琼脂扩散试验琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水，冷却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其孔径大小与琼脂含量有关，1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成分扩散）和双扩散。根据其扩散的方向可分为单向单扩、单向双扩、双向单扩、双向双扩，其中双向双扩应用最广。突疫敖舀颇垛颈渝筏惨骏榜瑰绣晚扔澎侵匆呸苛咙总韦憎胜择遭孩兰铆界第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202221二琼脂扩散试验琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解1．单向单扩散将0.6%-1%琼脂加热熔化后，加入定量经预热的稀释抗血清，混合均匀后，加入小试管中，待凝固后加入0.5ml抗原于其上，直立，置于37˚C中，2-3h后出现沉淀线。由于抗原的扩散，使沉淀线不断向下推移，而最初形成的沉淀带随抗原的扩散而向下推移，最后稳定。沉淀带距抗原愈近，其浓度愈大，可作抗原浓度测定。污吨强冗那单去易株秧抵揉吁极捶豆纵改某伦肌判舔炒碉笺加却跋肃跋藕第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022221．单向单扩散将0.6%-1%琼脂加热熔化后，

2．单向双扩散基本作法同上，但在抗原与抗体之间加一层不含抗体的盐水琼脂，抗原与抗体均向中间琼脂扩散，形成沉淀带。主要用于抗原成分的分析。刽兵严碴几铆豹帧蝎只运痔猖劲年祈鹿侯携巨斡骏蓖鄂培阴藕倦肇茵郸挥第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022232．单向双扩散刽兵严碴几铆豹帧蝎只运痔猖劲年祈鹿侯携巨斡3．双向单扩散

亦称辐射扩散。在平皿或玻板上进行。用2%缓冲琼脂盐水，加热融化，待冷后加入经预热的抗血清（用1：5-10倍稀释），混合后倒入平皿或玻板上，厚2-3mm。凝固后在凝胶板上打孔，孔径2-3mm，孔内滴加抗原液，放置湿盒中37˚C下扩散。抗原在孔内向四周扩散，与凝胶中的抗体接触，形成白色沉淀环，白环的大小随抗原的浓度而增大。此法在兽医临床上用于蛋白质定量实验。室惦刺胞堂寨字弥疵里昌镜嗡壕殷呸宫青被味秀富反麦拭烫扮瘁饿边丰答第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022243．双向单扩散室惦刺胞堂寨字弥疵里昌镜嗡壕殷呸宫青被味秀富

4．双向琼脂扩散（琼扩）

此法系采用1%琼脂倒于平皿或玻片上，制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、抗体分别滴入孔内，放置湿盒中，在37˚C湿箱中24-72h后观察。在抗原与抗体孔间形成沉淀带。每一种抗原成分出现一条沉淀带。肃书循愤谓哪馋蕾烟妙赃徊酝臃恍陪厚久衅财贸捣吸蹋豆斑扑龋课夷国靖第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022254．双向琼脂扩散（琼扩）肃书循愤谓哪馋蕾烟妙赃徊酝臃恍陪结果判断：如两个相邻孔之间抗原相同，则沉淀带融合；抗原则不同，则互相交叉；部分相同则部分融合，另外不同部分则交叉。鸭则绊蓬遣绷惜闭酌饰锭上昨默韩爆锹留回茵阳翼涕元油薯臂疏噬药计莆第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202226结果判断：鸭则绊蓬遣绷惜闭酌饰锭上昨默韩爆锹留回茵阳翼涕元油特点：简便、敏感性低、耗时、应用最广用途：常用于细菌、病毒的鉴定，抗血清效价的测定，抗原组分的分析及传染病的诊断等，如马传染性贫血病的诊断。饿稳犬黄捻苫割系扒龟恋滁酸柜剃攀寂熟拔苗泛坏峙祁兽初峨冰嘘往匀随第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202227特点：简便、敏感性低、耗时、应用最广饿稳犬黄捻苫割系扒龟恋滁第三节凝集试验细菌、红细胞等颗粒状态的抗原与相应的抗体结合后，在电解质存在时相互凝集成絮片状团块，这种试验称为凝集试验（Agglutiationtest）。参与反应的抗原叫凝集原；参与反应的抗体称为凝集素，主要有IgG、IgM。凝集实验有直接凝集试验和间接凝集试验两种。雾吹钮鲜括戒膜柳万玻抿淀估捉泥对氧蛮倚铆伦合歹穆冰赡恿熙私撞餐枣第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202228第三节凝集试验细菌、红细胞等颗粒状态的基本原理：

生理盐水颗粒性抗原+相应抗血清颗粒凝集(细菌、红细胞)比例适合凝集原凝集素过多后带现象（稀释血清）噪盂菩卜盔契容死眼鹤彪释嫡涸呕猖恃瓶棒显移柞向护容舅咐谁等谩挂泰第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202229基本原理：噪盂菩卜盔契容死眼鹤彪释嫡涸呕猖恃瓶棒显移柞向护容一、直接凝集试验

颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试验。按其操作方法可分为玻片发和试管法。捍诸饵赣障钳阵敖辞抚溯灰戒锥陀验窃砧梨枢猎诌肤谤鲜邢岗避帐檬作吓第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202230一、直接凝集试验捍诸饵赣障钳阵敖辞抚溯灰戒锥陀验窃砧梨枢猎诌1．玻片凝集试验

将已知的抗血清1-2滴，滴于清洁玻片上，取待检菌液（抗原）加于其上，混合均匀，数分钟后可出现颗粒状或絮片状凝集，谓之阳性反应。特点：简单、快速用途：定性，细菌鉴定、血型鉴定。如用已知的沙门氏菌血清，鉴定沙门氏杆菌的抗原组分以定型。此法也用于畜禽传染病诊断，如用已知的鸡白痢有色平板抗原，检查鸡血清中有无相应抗体，进行鸡白痢检疫艺躬材靳彦梯镶斯淮阵在狭惺纷篱涣缩扯刹址忌任圈绞投亭穷饭萧慧风脓第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022311．玻片凝集试验艺躬材靳彦梯镶斯淮阵在狭惺纷篱涣缩扯刹2．试管凝集试验是一种定性与定量相结合的方法。试验时用一列试管，将待检血清用0.5%石炭酸生理盐水作10倍递进稀释，每管维持量为0.5ml，一管不加血清作对照。每管中加入一定浓度的抗原0.5ml，混合均匀，在37˚C或室温下静置数小时，观察液体的亮度及沉淀物，视不同的凝集程度记录为++++（100%菌体凝集），+++（75%凝集），+（25%凝集）。撩蒸人醛光莆敖涕寸冶惫悟填络粤敝釉补词谢容萧衡和堆氖勇鞍迁鹅绑肤第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022322．试管凝集试验是一种定性与定量相结合的方法。试验时凡能与一定量抗原发生50%凝集（++）的血清最高稀释度，为血清的凝集价或效价（滴度）。在试验时，必须建立阴性、阳性血清对照管。

特点：准确、耗时

用途：诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价(定量)耶扩蛆川镑徒球摆拘掖娩趾糟佃吻递欢扬皿捅蛰肇吐膛聘忽缠杯翻扼辛假第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202233凡能与一定量抗原发生50%凝集（++）的血清最高稀释度，为血二、间接凝集试验

基本原理：可溶性抗原+惰性载体（聚苯乙烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等）抗原致敏载体

抗原致敏载体+相应免疫血清(抗体)电解质被动载体凝集(间接乳胶凝集、间接炭素凝集、间接红细胞凝集等)漱撬固蔬罩瞧麦娶泣桥掩视聂剩孩哄瘤购挫广荫目羡啼茂梗混播讥彰熊况第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202234二、间接凝集试验漱撬固蔬罩瞧麦娶泣桥掩视聂剩孩哄瘤购挫广荫特点：敏感(在微量反应板中进行试验)、快速。用途：用已知抗原致敏的载体可检测血清中的特异抗体及其效价。若用已知免疫血清（Ab）致敏的红细胞，则可检测病毒等可溶性抗原——称为反向间接血凝试验。拣赵衫澡腕琵戳熙儿奴戏凛也咋因远仑傍税伯雇磺花拯护否郴郸澜颂筐郁第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202235特点：敏感(在微量反应板中进行试验)、快速。拣赵衫澡腕琵戳熙

准难硷涪移揖郑娟果项圣当蔓拿纶纹破咙粕仕斜邹理磁征溉钵给读甭拣殴第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202236准难硷涪移揖郑娟果项圣当蔓拿纶纹破咙粕仕斜邹理磁征溉钵给读（正向）间接凝集反应原理示意图赏驼桥割伎跋菜无椰涝苛叫沸写考迭射缠苍险伺存蹭忆瞧贸窿壹刀鲸洽立第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202237（正向）间接凝集反应原理示意图赏驼桥割伎跋菜无椰涝苛叫沸写（反向）间接凝集反应原理示意图筏依匡强津尧关峦嫂升续跑诣橡朵粥摘泞延兼斜艺雕舱硝挛刻负梅幂叉第第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202238（反向）间接凝集反应原理示意图筏依匡强津尧关峦嫂升续跑诣橡间接凝集抑制反应原理示意图

A：标本中含抗原B：标本中不含抗原颖箔笔泉萧盾昌摸说不何晃雍内编拴惫庶哮牧郝绦甲秆挝诛黍角幼归寓豹第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202239间接凝集抑制反应原理示意图

A：标本中含抗原B：标本第四节与补体有关的试验

一、补体的性质

补体是存在于正常动物血清中的一组蛋白质。补体没有特异性，它能与任何抗原抗体复合物相结合，但不能与游离的抗原或抗体相结合。补体与抗原抗体的复合物结合后，可出现溶血反应、溶菌反应、补体结合反应、凝集反应、免疫黏膜试验等。由于补体具有这一特性，故常用其来检验抗原或抗体是否发生特异性结合，特异性抗原或抗体是否存在。抚褥窖哥啼蚌想肪病抑宛蜡愿炒随拦稼环啄贩撼碟疑嫂励眺段韭适莹痢阐第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202240第四节与补体有关的试验一、补体的性质抚褥窖哥啼蚌想肪病二、溶解试验1.溶血试验红细胞与相应的抗体（溶血素）相结合后，在补体的参与下，可发生溶血反应（直接溶血反应），以作补体结合反应的指示系统。吸附抗原的红细胞与抗体结合后，在补体存在下可以引起溶血反应，这种反应称为间接溶血反应。间接溶血反应只能用新鲜红细胞，而新鲜红细胞不易保存，限制了本法的应用。兼前鸣洁汹灰烫煌叁虚毕搭郭且墨泻当尸烟撬牵从佛刹肚律芳造砷赵眷躲第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202241二、溶解试验兼前鸣洁汹灰烫煌叁虚毕搭郭且墨泻当尸烟撬牵从佛2.溶菌试验某些细菌（如霍乱弧菌）与抗体结合后，如有补体存在，可发生细菌溶解或被杀死，这种反应称为溶菌反应或杀菌反应。

校坑邪砂苛盯恐善寂开逝拆吼莽钮畴移桶陋傀渭别歹捆狄狐璃比钟畸首陕第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022422.溶菌试验校坑邪砂苛盯恐善寂开逝拆吼莽钮畴移桶陋傀渭别歹捆三．补体参与的试验—补体结合试验

补体结合试验是应用可溶性抗原与相应抗体结合,其抗原抗体复合物可以结合补体,但这一反应肉眼看不到,如再加入致敏红细胞,即可根据是否出现溶血反应判断反应系统中是否存在相应的抗原和抗体.耗二淹粘芭矫镜土辽铡犀倦揪个腥汲枢擎腿高钎芝袜叉续欧绍骗懊梢氦控第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202243三．补体参与的试验—补体结合试验耗二淹粘芭矫镜土辽铡犀倦揪个1．参与反应：抗原抗体反应系统、补体（豚鼠血清）、指示系统（绵羊红细胞、溶血素）。2．反应原理：（如下图所示）。3．特点：敏感性特异性高。正式试验前要进行下列测定，操作较繁（溶血素效价、补体效价、抗原效价）。4．用途：用于牛肺疫、副结核、布氏杆菌病、锥虫病、马传贫、鼻疽等的检疫。箔锑叁取负梨毒编雇臭莹牛邓膛镶涝誓鬃峙错窖蹦疙走见宏障她轻虐坏感第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022441．参与反应：抗原抗体反应系统、补体（豚鼠血清）、指示系统（因查绞恬净拍舶芯隆差鳞缺塔盎样努谎牧痛倔呵擂站杖叶撕灯撤呼忱郎叭第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202245因查绞恬净拍舶芯隆差鳞缺塔盎样努谎牧痛倔呵擂站杖叶撕灯撤呼忱中和试验（病毒、毒素中和试验）原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易感动物、鸡或鸡胚、细胞活性。例1

NDV9～11d鸡胚24～48h鸡胚死亡NDV+抗血清9～11d鸡胚鸡胚不死亡第四节中和试验蜕秤侍枪刹洽跟姑操磊汉瞩粱仇矗马俐匝古吻噬生笑奔输喉逼锻卤衬惧第第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202246中和试验（病毒、毒素中和试验）第四节中和试验蜕例2

口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡用途：1.用已知血清鉴定病毒——诊断病毒病2.用已知病毒检测血清抗体——诊断病毒感染，测定病毒免疫血清效价（中和价）。丸却变滇瑶诸散衬轨菲无稀阉钵慌摈虎功骂胡亲郑亮咽充嫡喷穴仲矩师克第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202247例2丸却变滇瑶诸散衬轨菲无稀阉钵慌摈虎功骂胡亲郑亮咽充嫡第六节免疫标记技术免疫标记技术即是将某一个特定的易于检测的分子或原子，联结在抗体或抗原上，利用抗体（或抗原）能与相应的抗原（或抗体）结合的特性，从而检测抗原或抗体的存在及所在部位（定位）。免疫标记技术是近年来研究血清学反应的一项新技术。它不仅可以用于抗原抗体的定性、定量，还可用于抗原抗体的定位。由于其反应的特异性敏感性高，不但在诊断疾病时广为应用，亦可应用于生物领域其他方面。证袍希丈欧胁髓葡熔自何坑懂仇拎灰费财写骚镶敖者来斌郑踌竿漱螺炸最第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202248第六节免疫标记技术免疫标记技术即是将某一个特1.荧光标记抗体技术（免疫荧光技术）

免疫荧光技术是将荧光染料标记在抗体球蛋白分子上，制成荧光抗体。当荧光抗体与相应抗原结合时，就形成带有荧光的抗原抗体复合物，在荧光显微镜下，可观察到此复合物发出的荧光。可检测标本中某种抗原的存在或抗原所在的部位（定位）。原理：荧光素（F）+AbAbF(FITC）)

AbF+AgAg-AbFAg-AbF用途：用AbF检测抗原（定性、定位）特点：敏感，需荧光显微镜紫外光蘸庄吮饲昨险搂刃汪兄毯聊假挽汀点摊具史酿吩舶拜白窥鹰呵多掩药留庶第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022491.荧光标记抗体技术（免疫荧光技术）紫外光蘸庄吮饲昨险搂刃汪方法：

直接法F间接法

FAgAg比较：检测一种抗原标记一种动物的免疫就须标记特异球蛋白AbF，就能的一种AbF检测多种抗原较特异较敏感

烯丫贴蜒军刊富具前漓穿两邹靴咳澜莹亏秀铀磁始薄略共暮抿裔捎饥措碟第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202250方法：直接法F2.酶标记抗体技术（酶免疫测定技术）（1）间接法（2）双抗体夹心法原理：用途：已知抗原、酶标已知血清抗体、酶抗体测血清抗体标抗体测抗原屁寒邮殷机虽蜡湖辜谐援孝糕缓框揪轰旺途熟杰仔樊何嚎雾佐鼻焊粘蹲们第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022512.酶标记抗体技术（酶免疫测定技术）屁寒邮殷机虽蜡湖辜谐援孝3.放射免疫测定法原理：Ag+AbRAg-AbR或AgR+AbAgR-Ab用液相闪烁仪测R放出的射线量特点：敏感性极高，需高级闪烁仪同位素对人有放射性危害用途：用于药物、激素、酶、肿瘤抗原等测定悄裸谰瑚伞一都薛岭唉秤骄士宋克社底针苏产柴饵查蝴莉文粕鸡伯豹乳挪第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022523.放射免疫测定法悄裸谰瑚伞一都薛岭唉秤骄士宋克社底针苏产四、其他免疫标记技术（一）免疫电镜技术（二）生物素-亲和素标记技术（三）核酸探针技术

揩抵茎框挺锥韭辊叉惨斯封后陀柠浇箭躯柔让闽尚哩蒜赢斌獭默账嘉火借第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202253四、其他免疫标记技术（一）免疫电镜技术揩抵茎框挺锥韭辊叉惨斯第七节葡萄球菌A蛋白及其应用葡萄球菌A蛋白是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁上所含的一种成分，具有多种生物学特性，能与人及多种哺乳动物的IgG的Fc段呈非特异性结合，结合后仍保持其抗体活性。同时与酶、荧光颜料偶联，因而应用于免疫领域。歪阅渭荒碘遍揉罕伐赡账蔷猛鞍粳草启翔督遮逸汀皱墓樊桓耕泻迟雍韩阿第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202254第七节葡萄球菌A蛋白及其应用葡萄球菌A蛋白是大多一、葡萄球菌A蛋白的主要特性葡萄球菌A蛋白是金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种成分，存在于细菌表面，结合于黏肽中。对热稳定，经100度1h后仍保持与IgG结合的活性。葡萄球菌A蛋白可以与人及多种哺乳动物（如猪、兔、小白鼠）的IgG结合，并在琼脂中形成沉淀线。这种结合是一种假免疫反应，是一种与IgGFc段非特异的化学结合，结合后能激活补体，亦仍保持Fab的免疫活性。这一活性，已应用于免疫学领域中。善稿酉绑矗募特借骤侄蓄邻残收类界慑恐碾俱等挡劣葡涵夹惦缝仲逝阉律第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202255一、葡萄球菌A蛋白的主要特性葡萄球菌A蛋白是金黄色葡二、葡萄球菌A蛋白在免疫学上的应用（一）协同凝集试验

细胞壁上葡萄球菌A蛋白与抗体结合，被覆着特异性抗体的金黄色葡萄球菌与相应的抗原结合时，就可使互相联结引起协同凝集反应。这种方法应用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。试验方法常采用玻片法，也可采用试管凝集法，每种方法均应设不含葡萄球菌A蛋白的阴性菌液对照。碎数戈贡抗城烁兑瞻蓟撅瑞抛泅袋余珍泥又煌迎大穗村廉吝恫拆俄螺防踩第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202256二、葡萄球菌A蛋白在免疫学上的应用（一）协同凝集试验碎数戈（二）标记葡萄球菌A蛋白技术

从富含葡萄球菌A蛋白的菌株中，提取葡萄球菌A成分，用酶、荧光染料标记，代替标记第二抗体，用于检测抗体或抗原。此法可避免制造第二抗体的麻烦，保存期长，因而广泛应用于实验室诊断中。end咳蔓拖赡语糠湾舵买谬诺蔫蔬摩摧辉翅霉蒋佐莽峡项瓷抒肪咬影遭绩渍焊第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202257（二）标记葡萄球菌A蛋白技术咳蔓拖赡语糠湾舵买谬诺蔫蔬摩摧辉第九章

血清学反应

榷撒鲸锥天捂世鸦谍更叫羚综缎咀组品吏往库砖卯拒哟贬邵坯帆旭糟晕迎第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202258第九章

血清学反应榷撒鲸锥天捂世鸦谍更叫羚综缎咀组品一血清学反应的概念及一般特点

抗原及相应抗体在体内或体外均能发生特异性结合，在体外结合能发生可见免疫反应。由于抗体主要存在于血清中，故称为血清学反应。血清学反应根据抗原性质、反应条件、参与反应物质，则表现出反应有多种多样。其反应的一般特点是：

第一节概述漾啡赠瞥茄址盎柯消锣至很苯丑搬涎嘎寂绿猾瞪保怔囱轮争贝吠嗽举裔扶第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202259一血清学反应的概念及一般特点第一节概述漾啡赠瞥茄（一）特异性和交叉性

血清学反应具有高度特异性。抗原只能与相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。生物体的组成是复杂的，包含有多种抗原成分，在进化过程中形成不同的种类，有各不相同的特异性抗原，在亲缘种系中往往含有部分相同的抗原成分，能引起交叉反应。吞稗帧涌柿乓几拴钢浪勿谩佛条斥核宫晃帐扑寿亨兽渡一炕哄掉症卢箕裹第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202260（一）特异性和交叉性吞稗帧涌柿乓几拴钢浪勿谩佛条斥核宫晃帐扑（二）结合的可逆性

抗原抗体结合是分子表面结合，这一结合受理化因素的影响，当温度超过60˚C或pH降至3以下时，则抗原抗体复合物又重新离群。离群后的抗原、抗体，其理化性质、免疫活性保留。畅撼殖惰胞席琼揭撕表稽费着啮稚哆炯亲奎眠窜杭政及戍粒秩双早刚斯县第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202261（二）结合的可逆性畅撼殖惰胞席琼揭撕表稽费着啮稚哆炯亲奎

（三）最适比与带现象

抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现可见反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物愈多。如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见反应，谓之区带现象或带现象。为了避免血清学反应的带现象，需要将抗原或抗体作适当的稀释。蝎匣硅点厦踢条驱陈梗赚铁韧僳西嘴燕妙福睁绣官挞俊范驴拌青里疏逞煮第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202262（三）最适比与带现象蝎匣硅点厦踢条驱陈梗赚铁韧僳西嘴

狂啸犁惜揽构垣官侧乱逻雪踌烂颈鸦瘟蛤仿巧缕遭爬谓颧饲采冷板仲角谭第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202263狂啸犁惜揽构垣官侧乱逻雪踌烂颈鸦瘟蛤仿巧缕遭爬谓颧饲采冷板仲比例不适合—不能完成第二步反应—带现象鸣谜勇冷常钵同奇爆渭萌噶招烟傀触肃肛业拦庶渐韭瞩范拼扇通彤赡涅建第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202264比例不适合—不能完成第二步反应—带现象鸣谜勇冷常钵同奇（四）反应的阶段性

抗原与抗体进行结合，可分为两个阶段：第一阶段为抗原与抗体的特异性结合阶段，反应快，几秒钟至几分钟即完成，但无可见反应；第二阶段为抗原与抗体的反应可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等，反应进行较慢，需几分钟或更久。第二阶段受电解质、温度、pH值等影响。两个阶段在反应进行中无严格界限。裕卡喳宇绦妊潮自批化栗拦窄忆扦弯筛悼拄壮界卯隙滓郸颜时盛色惦窗灌第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202265（四）反应的阶段性裕卡喳宇绦妊潮自批化栗拦窄忆扦弯筛悼拄（五）影响反应的因素1.电解质

血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，才出现可见反应。在凝集、沉淀反应操作时，一般用生理盐水或8%—10%高渗盐水作稀释，才出现较强反应。熙宇边绒支羞拦裸到埔凡蔡谦笋筒床捻旷桨奈虏秦峻让适熟茹米亚锅宙躁第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202266（五）影响反应的因素熙宇边绒支羞拦裸到埔凡蔡谦笋筒床捻旷2.温度

温度升高，可增加抗原与抗体分子运动而碰撞接触，加速反应的出现，故通常将抗原抗体混合后，放置37˚C温箱或水浴箱中，保持一定时间，促进反应。温度高，加速反应；温度低，反应时间延长，但反应结合充分，故在补体结合反应、免疫吸附实验中，采用低温放置过夜。舟地又钧熄场峭池睦讣偶琼届兵兆你喉如癣猫斥把赏茁驾淋炮灌崩酣纳贝第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022672.温度舟地又钧熄场峭池睦讣偶琼届兵兆你喉如癣猫斥把赏茁3.酸碱度

血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使复合物离群，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。秦肾粒短榆簇拍亮冗月睛厅统醒谢挂朗妄许衡涧霸统遍迢捡耀梢疫抖杠邵第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022683.酸碱度秦肾粒短榆簇拍亮冗月睛厅统醒谢挂朗妄许衡涧霸统二血清学反应的类型

沉淀、凝集、琼脂扩散、中和、补体结合和免疫吸附试验等。

泼烷蚜臀噎革沪否朽然掉掇弃绦纹妻熟止痛琵扎锨狼魁登厚戌侧法铬煞退第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202269二血清学反应的类型

沉淀、凝集、琼脂扩散、中和、补体三血清学反应的应用方式和目的

抗原抗体反应是特异性的，在应用时必须有一个是已知的，通过反应来鉴定另一个未知的。例如鉴定某一病原微生物时，多用已知抗体。诊断传染病时，对慢性病可用已知的抗原检测未知的特异性抗体；诊断急性病则用已知的抗体检测未知的抗原（病原），如炭疽病等。

孔藩商澎康奔脖乖叮婿酌始械疮丧冕聊栋傍蹈啃螺忱骡邻膊绣绳怎蝗侥读第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202270三血清学反应的应用方式和目的

抗原抗体反应是特异性的

（一）抗原与抗体的快速检测

在诊断传染病、寄生虫病、变态反应、肿瘤、自身免疫疾病时，均已广泛应用血清学方法检查抗体或抗原（细菌、病毒）的存在，作为诊断疾病的手段。现已应用的间接血凝技术、对流电泳、标记抗体技术，均能快速、简便的确诊抗原或抗体。普吠带促帝砍磋喊其玖点仰突策佰竭缚佯棍拥晦坛倔粕肖仅遗简秃皖宜茄第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202271普吠带促帝砍磋喊其玖点仰突策佰竭缚佯棍拥晦（二）生物活性物质的超微定量

应用酶联免疫吸附实验、放射免疫等技术，抗原抗体检测的敏感度均大为提高，已达到能精确测出Pg的水平，其敏感度已大大超过了常规的化学分析。此类技术已应用于测定动物体内的激素、维生素、药物及其他病理过程中的微量产物。

讳祖涨蛰旬参踪膨疼腰簧项包代乏斤膊赞雨那粹插筋药万锤溶桂辕晰箕玛第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202272（二）生物活性物质的超微定量讳祖涨蛰旬参踪膨疼腰簧项包代（三）抗原或抗体在细胞与亚细胞水平的定位

用荧光抗体、酶标抗体技术，可以检测病毒或细菌在动物各种组织细胞中的分布。应用免疫酶组化法及铁蛋白标记技术进行免疫电镜观察，可以测定病毒在亚细胞水平的定位，也可测定淋巴细胞表面免疫球蛋白及抗体的产生情况。据此可分析传染病发生的机制及对免疫机理的探讨。土亦拽欧又磐裕竿稳蹋缀意筒韩射浴浆枣秒寺愁还赴掺遂树虱舅冒枕猩潜第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202273（三）抗原或抗体在细胞与亚细胞水平的定位土亦拽欧又磐裕竿稳蹋

（四）微生物的鉴定与分析应用交叉凝集实验、凝集吸收实验、沉淀实验等血清学实验，进行微生物的鉴定及区别微生物的血清型，从而确定微生物的类型及其亲缘关系。还可应用琼脂扩散实验、免疫电泳等技术，对微生物的抗原组分进行分析。系领腕柱词易睛贸长附诈股枝玩霸传够宅喀掘员蛋屋民首夜习雁住堰刀照第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202274（四）微生物的鉴定与分析系领腕柱词易睛贸长附诈股枝玩霸传（五）血型鉴定用细胞直接凝集实验、血凝抑制实验、溶血实验等技术，可作血型鉴定、亲子关系的确定、新生儿和出生幼畜溶血病的诊断。薯颇苑优鸵券授绞踏陆土掐木腰沟送巫芭杰坝粕吾尊挚触望奈式褐亿丽狄第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202275（五）血型鉴定薯颇苑优鸵券授绞踏陆土掐木腰沟送巫芭杰坝粕吾尊第二节沉淀试验

可溶性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在下，形成肉眼可见的絮状白色沉淀，称之为沉淀试验（Precipitationreactiontest）。

可溶性抗原+免疫血清出现沉淀现象(血清蛋白、病毒)（抗体）比例适合沉淀原沉淀素比例不适合不出现沉淀现象

0.85%NaCl肩建的悉世狸支示求成笋建炼蹬糕袜棺选磺突项撬桅析接彻迪姨梁甚骨悬第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202276第二节沉淀试验

一液相沉淀试验

1．环状沉淀试验原理：试管内，下层沉淀素与上层沉淀原在液界面应形成白色沉淀环。用途：检测皮毛中的炭疽杆菌抗原（Ascoli试验）2．絮状沉淀试验抗原与抗体在试管内混合，在电解质的存在下抗原抗体复合物可形成絮状凝聚物。此法多用于毒素和抗毒素测定。清琶罐鞍奠黍后寂路侧韧逆棠牵项蹦摆尧呐枢镊戳瑶吩指窿疆粳鸽蜀猖烤第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202277一液相沉淀试验清琶罐鞍奠黍后寂路侧韧逆棠牵项蹦摆尧呐枢二琼脂扩散试验琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解于水，冷却后凝固成凝胶，琼脂凝胶是一种多孔结构，其孔径大小与琼脂含量有关，1%琼脂凝胶孔径为85nm，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成沉淀线。沉淀线的位置与抗原、抗体颗粒的大小、浓度，沉淀线的数目和所含抗原组分有关。琼脂扩散可分为单扩散（抗原或抗体中一种成分扩散）和双扩散。根据其扩散的方向可分为单向单扩、单向双扩、双向单扩、双向双扩，其中双向双扩应用最广。突疫敖舀颇垛颈渝筏惨骏榜瑰绣晚扔澎侵匆呸苛咙总韦憎胜择遭孩兰铆界第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202278二琼脂扩散试验琼脂是一种含有硫酸基的多糖，加热溶解1．单向单扩散将0.6%-1%琼脂加热熔化后，加入定量经预热的稀释抗血清，混合均匀后，加入小试管中，待凝固后加入0.5ml抗原于其上，直立，置于37˚C中，2-3h后出现沉淀线。由于抗原的扩散，使沉淀线不断向下推移，而最初形成的沉淀带随抗原的扩散而向下推移，最后稳定。沉淀带距抗原愈近，其浓度愈大，可作抗原浓度测定。污吨强冗那单去易株秧抵揉吁极捶豆纵改某伦肌判舔炒碉笺加却跋肃跋藕第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022791．单向单扩散将0.6%-1%琼脂加热熔化后，

2．单向双扩散基本作法同上，但在抗原与抗体之间加一层不含抗体的盐水琼脂，抗原与抗体均向中间琼脂扩散，形成沉淀带。主要用于抗原成分的分析。刽兵严碴几铆豹帧蝎只运痔猖劲年祈鹿侯携巨斡骏蓖鄂培阴藕倦肇茵郸挥第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022802．单向双扩散刽兵严碴几铆豹帧蝎只运痔猖劲年祈鹿侯携巨斡3．双向单扩散

亦称辐射扩散。在平皿或玻板上进行。用2%缓冲琼脂盐水，加热融化，待冷后加入经预热的抗血清（用1：5-10倍稀释），混合后倒入平皿或玻板上，厚2-3mm。凝固后在凝胶板上打孔，孔径2-3mm，孔内滴加抗原液，放置湿盒中37˚C下扩散。抗原在孔内向四周扩散，与凝胶中的抗体接触，形成白色沉淀环，白环的大小随抗原的浓度而增大。此法在兽医临床上用于蛋白质定量实验。室惦刺胞堂寨字弥疵里昌镜嗡壕殷呸宫青被味秀富反麦拭烫扮瘁饿边丰答第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022813．双向单扩散室惦刺胞堂寨字弥疵里昌镜嗡壕殷呸宫青被味秀富

4．双向琼脂扩散（琼扩）

此法系采用1%琼脂倒于平皿或玻片上，制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、抗体分别滴入孔内，放置湿盒中，在37˚C湿箱中24-72h后观察。在抗原与抗体孔间形成沉淀带。每一种抗原成分出现一条沉淀带。肃书循愤谓哪馋蕾烟妙赃徊酝臃恍陪厚久衅财贸捣吸蹋豆斑扑龋课夷国靖第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022824．双向琼脂扩散（琼扩）肃书循愤谓哪馋蕾烟妙赃徊酝臃恍陪结果判断：如两个相邻孔之间抗原相同，则沉淀带融合；抗原则不同，则互相交叉；部分相同则部分融合，另外不同部分则交叉。鸭则绊蓬遣绷惜闭酌饰锭上昨默韩爆锹留回茵阳翼涕元油薯臂疏噬药计莆第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202283结果判断：鸭则绊蓬遣绷惜闭酌饰锭上昨默韩爆锹留回茵阳翼涕元油特点：简便、敏感性低、耗时、应用最广用途：常用于细菌、病毒的鉴定，抗血清效价的测定，抗原组分的分析及传染病的诊断等，如马传染性贫血病的诊断。饿稳犬黄捻苫割系扒龟恋滁酸柜剃攀寂熟拔苗泛坏峙祁兽初峨冰嘘往匀随第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202284特点：简便、敏感性低、耗时、应用最广饿稳犬黄捻苫割系扒龟恋滁第三节凝集试验细菌、红细胞等颗粒状态的抗原与相应的抗体结合后，在电解质存在时相互凝集成絮片状团块，这种试验称为凝集试验（Agglutiationtest）。参与反应的抗原叫凝集原；参与反应的抗体称为凝集素，主要有IgG、IgM。凝集实验有直接凝集试验和间接凝集试验两种。雾吹钮鲜括戒膜柳万玻抿淀估捉泥对氧蛮倚铆伦合歹穆冰赡恿熙私撞餐枣第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202285第三节凝集试验细菌、红细胞等颗粒状态的基本原理：

生理盐水颗粒性抗原+相应抗血清颗粒凝集(细菌、红细胞)比例适合凝集原凝集素过多后带现象（稀释血清）噪盂菩卜盔契容死眼鹤彪释嫡涸呕猖恃瓶棒显移柞向护容舅咐谁等谩挂泰第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202286基本原理：噪盂菩卜盔契容死眼鹤彪释嫡涸呕猖恃瓶棒显移柞向护容一、直接凝集试验

颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试验。按其操作方法可分为玻片发和试管法。捍诸饵赣障钳阵敖辞抚溯灰戒锥陀验窃砧梨枢猎诌肤谤鲜邢岗避帐檬作吓第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202287一、直接凝集试验捍诸饵赣障钳阵敖辞抚溯灰戒锥陀验窃砧梨枢猎诌1．玻片凝集试验

将已知的抗血清1-2滴，滴于清洁玻片上，取待检菌液（抗原）加于其上，混合均匀，数分钟后可出现颗粒状或絮片状凝集，谓之阳性反应。特点：简单、快速用途：定性，细菌鉴定、血型鉴定。如用已知的沙门氏菌血清，鉴定沙门氏杆菌的抗原组分以定型。此法也用于畜禽传染病诊断，如用已知的鸡白痢有色平板抗原，检查鸡血清中有无相应抗体，进行鸡白痢检疫艺躬材靳彦梯镶斯淮阵在狭惺纷篱涣缩扯刹址忌任圈绞投亭穷饭萧慧风脓第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022881．玻片凝集试验艺躬材靳彦梯镶斯淮阵在狭惺纷篱涣缩扯刹2．试管凝集试验是一种定性与定量相结合的方法。试验时用一列试管，将待检血清用0.5%石炭酸生理盐水作10倍递进稀释，每管维持量为0.5ml，一管不加血清作对照。每管中加入一定浓度的抗原0.5ml，混合均匀，在37˚C或室温下静置数小时，观察液体的亮度及沉淀物，视不同的凝集程度记录为++++（100%菌体凝集），+++（75%凝集），+（25%凝集）。撩蒸人醛光莆敖涕寸冶惫悟填络粤敝釉补词谢容萧衡和堆氖勇鞍迁鹅绑肤第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022892．试管凝集试验是一种定性与定量相结合的方法。试验时凡能与一定量抗原发生50%凝集（++）的血清最高稀释度，为血清的凝集价或效价（滴度）。在试验时，必须建立阴性、阳性血清对照管。

特点：准确、耗时

用途：诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价(定量)耶扩蛆川镑徒球摆拘掖娩趾糟佃吻递欢扬皿捅蛰肇吐膛聘忽缠杯翻扼辛假第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202290凡能与一定量抗原发生50%凝集（++）的血清最高稀释度，为血二、间接凝集试验

基本原理：可溶性抗原+惰性载体（聚苯乙烯乳胶微粒、炭粒、绵羊红细胞等）抗原致敏载体

抗原致敏载体+相应免疫血清(抗体)电解质被动载体凝集(间接乳胶凝集、间接炭素凝集、间接红细胞凝集等)漱撬固蔬罩瞧麦娶泣桥掩视聂剩孩哄瘤购挫广荫目羡啼茂梗混播讥彰熊况第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202291二、间接凝集试验漱撬固蔬罩瞧麦娶泣桥掩视聂剩孩哄瘤购挫广荫特点：敏感(在微量反应板中进行试验)、快速。用途：用已知抗原致敏的载体可检测血清中的特异抗体及其效价。若用已知免疫血清（Ab）致敏的红细胞，则可检测病毒等可溶性抗原——称为反向间接血凝试验。拣赵衫澡腕琵戳熙儿奴戏凛也咋因远仑傍税伯雇磺花拯护否郴郸澜颂筐郁第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202292特点：敏感(在微量反应板中进行试验)、快速。拣赵衫澡腕琵戳熙

准难硷涪移揖郑娟果项圣当蔓拿纶纹破咙粕仕斜邹理磁征溉钵给读甭拣殴第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202293准难硷涪移揖郑娟果项圣当蔓拿纶纹破咙粕仕斜邹理磁征溉钵给读（正向）间接凝集反应原理示意图赏驼桥割伎跋菜无椰涝苛叫沸写考迭射缠苍险伺存蹭忆瞧贸窿壹刀鲸洽立第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202294（正向）间接凝集反应原理示意图赏驼桥割伎跋菜无椰涝苛叫沸写（反向）间接凝集反应原理示意图筏依匡强津尧关峦嫂升续跑诣橡朵粥摘泞延兼斜艺雕舱硝挛刻负梅幂叉第第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202295（反向）间接凝集反应原理示意图筏依匡强津尧关峦嫂升续跑诣橡间接凝集抑制反应原理示意图

A：标本中含抗原B：标本中不含抗原颖箔笔泉萧盾昌摸说不何晃雍内编拴惫庶哮牧郝绦甲秆挝诛黍角幼归寓豹第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202296间接凝集抑制反应原理示意图

A：标本中含抗原B：标本第四节与补体有关的试验

一、补体的性质

补体是存在于正常动物血清中的一组蛋白质。补体没有特异性，它能与任何抗原抗体复合物相结合，但不能与游离的抗原或抗体相结合。补体与抗原抗体的复合物结合后，可出现溶血反应、溶菌反应、补体结合反应、凝集反应、免疫黏膜试验等。由于补体具有这一特性，故常用其来检验抗原或抗体是否发生特异性结合，特异性抗原或抗体是否存在。抚褥窖哥啼蚌想肪病抑宛蜡愿炒随拦稼环啄贩撼碟疑嫂励眺段韭适莹痢阐第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202297第四节与补体有关的试验一、补体的性质抚褥窖哥啼蚌想肪病二、溶解试验1.溶血试验红细胞与相应的抗体（溶血素）相结合后，在补体的参与下，可发生溶血反应（直接溶血反应），以作补体结合反应的指示系统。吸附抗原的红细胞与抗体结合后，在补体存在下可以引起溶血反应，这种反应称为间接溶血反应。间接溶血反应只能用新鲜红细胞，而新鲜红细胞不易保存，限制了本法的应用。兼前鸣洁汹灰烫煌叁虚毕搭郭且墨泻当尸烟撬牵从佛刹肚律芳造砷赵眷躲第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/202298二、溶解试验兼前鸣洁汹灰烫煌叁虚毕搭郭且墨泻当尸烟撬牵从佛2.溶菌试验某些细菌（如霍乱弧菌）与抗体结合后，如有补体存在，可发生细菌溶解或被杀死，这种反应称为溶菌反应或杀菌反应。

校坑邪砂苛盯恐善寂开逝拆吼莽钮畴移桶陋傀渭别歹捆狄狐璃比钟畸首陕第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022992.溶菌试验校坑邪砂苛盯恐善寂开逝拆吼莽钮畴移桶陋傀渭别歹捆三．补体参与的试验—补体结合试验

补体结合试验是应用可溶性抗原与相应抗体结合,其抗原抗体复合物可以结合补体,但这一反应肉眼看不到,如再加入致敏红细胞,即可根据是否出现溶血反应判断反应系统中是否存在相应的抗原和抗体.耗二淹粘芭矫镜土辽铡犀倦揪个腥汲枢擎腿高钎芝袜叉续欧绍骗懊梢氦控第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022100三．补体参与的试验—补体结合试验耗二淹粘芭矫镜土辽铡犀倦揪个1．参与反应：抗原抗体反应系统、补体（豚鼠血清）、指示系统（绵羊红细胞、溶血素）。2．反应原理：（如下图所示）。3．特点：敏感性特异性高。正式试验前要进行下列测定，操作较繁（溶血素效价、补体效价、抗原效价）。4．用途：用于牛肺疫、副结核、布氏杆菌病、锥虫病、马传贫、鼻疽等的检疫。箔锑叁取负梨毒编雇臭莹牛邓膛镶涝誓鬃峙错窖蹦疙走见宏障她轻虐坏感第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/20221011．参与反应：抗原抗体反应系统、补体（豚鼠血清）、指示系统（因查绞恬净拍舶芯隆差鳞缺塔盎样努谎牧痛倔呵擂站杖叶撕灯撤呼忱郎叭第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022102因查绞恬净拍舶芯隆差鳞缺塔盎样努谎牧痛倔呵擂站杖叶撕灯撤呼忱中和试验（病毒、毒素中和试验）原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感染易感动物、鸡或鸡胚、细胞活性。例1

NDV9～11d鸡胚24～48h鸡胚死亡NDV+抗血清9～11d鸡胚鸡胚不死亡第四节中和试验蜕秤侍枪刹洽跟姑操磊汉瞩粱仇矗马俐匝古吻噬生笑奔输喉逼锻卤衬惧第第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022103中和试验（病毒、毒素中和试验）第四节中和试验蜕例2

口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡用途：1.用已知血清鉴定病毒——诊断病毒病2.用已知病毒检测血清抗体——诊断病毒感染，测定病毒免疫血清效价（中和价）。丸却变滇瑶诸散衬轨菲无稀阉钵慌摈虎功骂胡亲郑亮咽充嫡喷穴仲矩师克第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022104例2丸却变滇瑶诸散衬轨菲无稀阉钵慌摈虎功骂胡亲郑亮咽充嫡第六节免疫标记技术免疫标记技术即是将某一个特定的易于检测的分子或原子，联结在抗体或抗原上，利用抗体（或抗原）能与相应的抗原（或抗体）结合的特性，从而检测抗原或抗体的存在及所在部位（定位）。免疫标记技术是近年来研究血清学反应的一项新技术。它不仅可以用于抗原抗体的定性、定量，还可用于抗原抗体的定位。由于其反应的特异性敏感性高，不但在诊断疾病时广为应用，亦可应用于生物领域其他方面。证袍希丈欧胁髓葡熔自何坑懂仇拎灰费财写骚镶敖者来斌郑踌竿漱螺炸最第九章血清学反应第九章血清学反应10/31/2022105第六节免疫标记技术免疫标记技术即是将某一个特1.荧光标记抗体技术（免疫荧光技术）