项目名称：基于“肝藏血主疏泄”的脏象理论研究首席科学家

1、项目名称：基于“肝藏藏血主疏疏泄”的的脏象理理论研究究首席科学家家：王庆国 北北京中医医药大学学起止年限：2011.1至220155.8依托部门：国家中医药药管理局局二、预期目目标本项目的总总体目标标： 1、系统统梳理肝肝藏血主主疏泄的的脏象理理论，澄澄清其历历史源流流，明确确理论的的含义、内内容及相相互关系系，发展展与创新新肝脏象象理论，探探索脏象象学说及及中医理理论发展展与创新新的新模模式。 2、确立肝肝藏血主主疏泄功功能异常常的主要要宏观表表现及微微观指标标，建立立肝藏血血主疏泄泄功能异异常状态态的判别别模式。 3、阐释肝肝藏血主主疏泄功功能的生生理调控控机制，分分析肝藏藏血与主主疏泄间

2、间的关联联网络。 4、揭示从从肝论治治临床疗疗效产生生的机制制和规律律。 5、阐释肝肝藏血主主疏泄在在神经内分泌泌免疫网网络中特特异的功功能区域域、传导导通路以以及特异异的反应应状态，揭揭示肝藏藏血主疏疏泄的基基本科学学内涵。 五年预期目目标: 1.阐明肝肝藏血主主疏泄的的基本含含义、学学说内容容及两者者间的关关系。阐阐明肝藏藏血主疏疏泄的应应用范围围与原则则。 2.澄清肝肝藏血主主疏泄理理论的演演变史，探探索适合合脏象学学说及中中医理论论发展与与创新的的新模式式。 3、编制健健康人群群调查量量表，完完成3000例正正常健康康人四时时八节的的动态追追踪调查查研究；1200例健康康志愿者者两种应

3、应激状态态前后的的比较研研究。建建立肝藏藏血主疏疏泄调控控机体的的状态判判别模式式，探讨讨肝藏血血与主疏疏泄的内内在调控控机制及及内在相相关性。 4、完成1100只只大鼠、220只树树鼩四时时八节的的动态研研究。5、完成1100例例月经规规律的健健康志愿愿者月经经周期观观测及应应激反应应测试。6、完成1120例例健康志志愿者两两种应激激状态前前后的比比较研究究。建立立肝藏血血主疏泄泄调控机机体的状状态判别别模式，探探讨肝藏藏血与主主疏泄的的内在调调控机制制及内在在相关性性。7、编制四四种疾病病的临床床调查量量表，完完成每种种疾病各各8000例以上上的临床床横断面面调查；建立肝肝藏血主主疏泄功功

4、能异常常状态的的判别模模式。8、完成临临床观测测与干预预，五种种疾病各各3000例；揭揭示五种种疾病从从肝论证证的机制制和证治治规律。9、建立44-8种种可反映映肝藏血血主疏泄泄功能异异常状态态的抑郁郁症等55种疾病病的病证证结合动动物模型型及其判判别方法法。10、完成成动物模模型功能能区神经经元活性性、血管管反应性性、肠敏敏感性、内内分泌腺腺体反应应性等功功能测定定、化学学物质的的含量变变化、化化学物质质的反馈馈作用等等相关指指标的检检测，完完成关键键组织部部位的基基于测序序技术的的转录组组（数字字基因表表达谱）、小小RNAA分析；完成不不少于220个关关键分子子的mRRNA及及蛋白质质水平

5、的的验证；完成关关键分子子相关调调控网络络的分析析，揭示示出与肝肝藏血主主疏泄功功能密切切相关的的共性分分子网络络。 11、完成成养血调调肝方对对抑郁症症等5种种疾病的的反证及及该方对对肝藏血血主疏泄泄功能密密切相关关的共性性分子网网络的作作用机制制研究；完成实实质性肝肝损伤对对肝藏血血主疏泄泄功能密密切相关关的共性性分子网网络影响响的研究究。 12、完成成相关各各项数据据分析及及挖掘；完成信信息管理理系统的的平台建建设；建建立基于于熵理论论分析方方法与隐隐结构分分析方法法的应用用规范。 13、发表表相关学学术论文文3000篇左右右，其中中SCII 200篇左右右，出版版相关学学术著作作2部。

6、 14、培养养博士研研究生550名，硕硕士研究究生800名，博博士后66名；形形成多学学科交叉叉、中青青年为主主的创新新性研究究梯队。三、研究方方案1、以肝藏藏血主疏疏泄为核核心的肝肝脏象理理论研究究本项目应用用历史分分析的方方法进行行中医理理论研究究。即采采用知识识考古学学等思想想史研究究思路与与中医传传统文献献方法结结合，系系统梳理理从先秦秦时期到到新中国国成立前前历代中中医及相相关文献献，以肝肝主疏泄泄为切入入点，分分析肝主主疏泄及及相关专专题的对对象形成成、陈述述方式、概概念的扩扩散、主主题策略略的选择择等内容容，对文文献中肝肝藏血主主疏泄应应含义及及其诊治治体系生生成变化化进行具具体

7、分析析，以发发现构成成某一时时期医学学思想整整体的深深层结构构“知知识型”或“基本信信码”，也就就是话语语，根据据话语的的转变来来分析肝肝藏血主主疏泄应应含义及及其诊治治体系的的演变及及背后的的原因，以以分析其其形成和和转变的的历史；在肝藏藏血主疏疏泄及其其相关理理论学术术发展史史的基础础上，确确立其理理论内涵涵、应用用范围与与原则，论论证其在在脏象学学说、脏脏腑辨证证以及临临床各科科疾病诊诊治中的的地位与与作用，解解决学术术分歧与与争议。1.1 肝肝藏血主主疏泄及及其相关关理论的的知识考考古学研研究话语构成成分析：应用知知识考古古学，对对文献中中肝藏血血主疏泄泄及其相相关研究究单元进进行话语

8、语构成分分析，分分别对肝肝藏血主主疏泄及及其相关关研究单单元在辨辨证论治治体系中中进行对对象形成成、陈述述方式、概概念扩散散、主题题从属等等话语构构成的四四要素分分析。即即：历代代医学文文献中肝肝藏血主主疏泄对对象的形形成，也也就是在在诊治过过程中应应用肝藏藏血主疏疏泄疾病病范围的的确定、肝肝藏血主主疏泄病病症之间间的划分分方法；肝藏血血主疏泄泄在诊治治体系中中陈述方方式，即即肝藏血血主疏泄泄以什么么方式、与与哪些概概念、以以什么次次序关系系出现在在诊治体体系中；肝藏血血主疏泄泄的界定定，即在在诊治体体系中，在在肝藏血血主疏泄泄与肝藏藏血主疏疏泄等其其它概念念、学说说的相互互关系中中，肝藏藏血

9、主疏疏泄是怎怎样被界界定的；肝藏血血主疏泄泄的从属属的主题题，即肝肝藏血主主疏泄是是在论述述什么问问题时才才出现。话语转型型分析：分析肝肝藏血主主疏泄及及其相关关研究单单元知识识型的断断裂点，确确定其话话语形成成系统的的成分转转换、话话语形成成体系特特征性的的关系转转换、各各种不同同话语形形成规则则之间的的转换、各各种实证证性之间间的关系系的转换换。1.2 肝肝藏血主主疏泄及及其相关关理论学学术发展展史的确确立在肝藏血主主疏泄及及其相关关理论等等的关系系中确定定肝藏血血主疏泄泄的含义义与应用用范围、应应用原则则，并在在肝藏血血主疏泄泄临床适适用范围围改变的的基础上上确立其其学术的的演变史史；阐

10、明明其所在在诊治体体系的构构成要素素、诊断断和治疗疗原则、处处方原则则及其从从一个时时期到另另一个是是其转换换的历史史。1.3 肝肝藏血主主疏泄理理论内涵涵的确定定在肝藏血主主疏泄及及其相关关理论学学术发展展史的基基础上，确确立其理理论内涵涵、应用用范围与与原则，论论证其在在脏象学学说、脏脏腑辨证证以及临临床各科科疾病诊诊治中的的地位与与作用，解解决学术术分歧与与争议。2、生理状状态下肝肝藏血主主疏泄功功能的调调控机制制研究2.1 依依据现代代文献提提取的信信息，编编制半开开放式健健康人群群调查他他评量表表。遵循循临床流流行病学学抽样调调查的相相关各项项要求，依依据20005年年全国11%人口

11、口抽样调调查资料料数据，在在全国多多家医院院的体检检中心、学学校及社社区，开开展体检检无器质质性病变变中青年年人群3300例例（男：女=11：1）动动态追踪踪调查，分分别在一一年四时时八节（立立冬、冬冬至、立立春、春春分、立立夏、夏夏至、立立秋、秋秋分），分分时间段段从躯体体症状、情情绪、生生活质量量、生活活事件、相相关指标标（生命命特征、体体质体能能、血常常规、一一滴血、虹虹膜仪、脉脉象仪、舌舌象仪、面面色分析析仪、神神经递质质、退黑黑素等）及及一般情情况等信信息，建建立数据据库。 2.2采用用方差分分析、秩秩和检验验等统计计方法，分分析宏观观表现及及微观指指标的关关联性；在不同同季节的的差

12、异性性；以及及随季节节变化的的动态规规律。 2.3 应应用隐结结构模型型对调查查数据库库进行多多维样本本聚类分分析，由由计算机机自动搜搜索对调调查人群群进行分分类，分分析其中中与肝藏藏血主疏疏泄状态态相关的的人群，而而后提取取该人群群的特征征性症状状与指标标，建立立肝藏血血主疏泄泄功能状状态的判判别模型型。 2.4动物物四时八八节的动动态观测测选取W大鼠鼠1000只，树树鼩200只，根根据北京京市气象象局气象象科学研研究所提提供。220111年1月月-20016年年1月55年的四四时八节节的气候候参数：包括日日照百分分数、平平均温度度、日温温差、平平均气压压、日降降水量、平平均风力力、平均均相

13、对湿湿度、平平均湿度度/平均均温度共共8项。分分别选取取四时八八节（立立冬、冬冬至、立立春、春春分、立立夏、夏夏至、立立秋、秋秋分）八八个时间间点，动动态观察察动物的的表征，进进行褪黑黑素、神神经递质质等多项项指标的的检测，建建立数据据库，描描述动物物四时八八节各项项指标的的动态变变化曲线线，提取取动物状状态的核核心指标标，建立立动态变变化判别别模式，分分析肝藏藏血主疏疏泄功能能与时间间节律的的相关性性。3、健康志志愿者应应激状态态下肝藏藏血主疏疏泄功能能的调控控机制研研究3.1妇女女月经周周期应激激研究：选取月月经规律律的健康康志愿者者1000人，连连续观测测其三个个月经周周期的情情绪、躯躯

14、体症状状以及一一般性指指标的变变化，并并与月经经期、黄黄体期、月月经后期期分别进进行应激激状态测测试，主主要进行行心理认认知测试试，检测测多导脑脑电等指指标，建建立数据据库进行行分析，探探索月经经周期中中肝藏血血状态变变化与疏疏泄功能能的相关关性，并并总结肝肝藏血主主疏泄异异常状态态下应激激变化规规律，探探讨肝藏藏血主疏疏泄的内内在机制制。3.2健康康志愿者者应激刺刺激前后后不同状状态与肝肝藏血主主疏泄关关系的研研究：选选取1220例（男男：女=1：11）健康康志愿者者，采用用情绪图图片、面面孔、音音乐、声声音、文文字和影影片等刺刺激材料料，根据据研究需需要控制制其情绪绪类型以以及愉悦悦度和唤

15、唤醒度水水平。通通过自我我回忆、材材料刺激激、社会会交互作作用等诱诱发手段段使被试试处于一一定情绪绪状态。在在情绪表表达抑制制、认知知重评、向向上和向向下情绪绪调节、情情绪分类类、内隐隐情绪任任务、快快速呈现现、视觉觉掩蔽、线线索靶靶范式、情情感启动动范式、延延迟反应应任务、nn-baack等等经典的的实验范范式中，综综合运用用行为学学测试、生生理多导导仪记录录、事件件相关电电位（EERP）和和功能磁磁共振成成像（ffMRII）等技技术手段段，从反反应时、正正确率、EERP成成分的波波幅和潜潜伏期、脑脑区激活活以及脑脑功能联联结等多多个方面面分析肝肝脏在情情绪产生生、调节节和情绪绪与认知知相互

16、作作用中的的地位及及相应心心理、生生理机制制。 给给予志愿愿者进行行较大强强度的运运动任务务负荷，通通过主观观报告、问问卷调查查和客观观评分确确定和划划分研究究对象的的情绪状状态。进进行运动动前后心心理量表表评测、视视力系统统测定、脑脑电图、脑脑血流图图、肝血血流图的的检测，以以及微循循环系统统指标的的检测，探探讨运动动前后肝肝藏血功功能的调调节机制制。并分分析藏血血与疏泄泄之间的的相关性性。4、信息学学管理系系统及分分析方法法研究4.1 编编写数据据库程序序，应用用现代信信息管理理学方法法，根据据研究中中文献、临临床、实实验各项项研究数数据的特特点，编编制关联联数据库库，对相相关信息息进行统

17、统一规范范、标示示及编码码，从而而形成统统一的数数据库录录入平台台。 4.2针对对研究目目标及相相关研究究数据的的特点，进进行算法法研究，完完善基于于熵理论论的数据据分析方方法及隐隐结构模模型的分分析方法法，并编编写为软软件开展展网络化化运行，为为整体项项目搭建建数据分分析平台台。4.3应用用两种数数据分析析方法，对对四种疾疾病的临临床宏观观表现及及微观指指标进行行综合分分析，提提取与肝肝藏血主主疏泄相相关的病病证结合合下宏观观表现与与微观表表现的共共性特点点和个性性特征。4.4应用用两种数数据分析析方法，对对四种疾疾病提取取肝藏血血主疏泄泄相关的的病证结结合下动动物模型型的宏观观表征与与微观

18、指指标进行行分析，提提取其共共性特点点和个性性特征，建建立动物物模型的的判别模模式。4.5对项项目组脏脏象研究究的各项项数据进进行综合合分析，提提炼肝藏藏血主疏疏泄的共共性生物物学基础础。4.6 应应用信息息平台对对各项研研究进行行实时录录入、盲盲法核对对及质量量监控。5、抑郁症症、经前前期综合合征从肝肝论治的的研究5.1 流流行病学学调查5.1.11编制调调查表。由由专家组组根据研研究目的的，通过过参考大大量文献献，充分分考虑可可行性及及有效性性，设计计抑郁症症（轻中中度）、经经前期综综合征（重重度，PPMDDD）流行行病学调调查内容容，并进进行预调调查，在在此基础础上，修修改制定定研究用用

19、调查表表。5.1.22开展流流行病学学调查。应应用编制制的调查查表，对对符合上上述疾病病诊断和和纳入标标准的患患者开展展流行病病学横断断面调查查，采集集患者的的一般个个人信息息、躯体体症状、情情绪精神神症状、舌舌象、脉脉象，并并对部分分患者进进行相关关微观指指标检测测。5.1.33资料整整理与分分析。建建立流行行病学研研究数据据库，对对资料进进行逻辑辑检查和和处理；运用方方差分析析、Loogisst回归归分析等等方法，确确立肝主主疏泄调调畅情志志功能异异常的主主要宏观观表现及及微观指指标，建建立宏观观与微观观相结合合的肝主主疏泄调调畅情志志功能异异常状态态的判别别模式。5.2 临临床疗效效研究

20、5.2.11从肝论论治抑郁郁症（轻轻中度）临临床疗效效。病例选选择 符合中中国精神神疾病分分类方案案与诊断断标准第第3版（CCCMDD-）的抑抑郁症发发作诊断断标准且且中医辨辨证为肝肝气郁证证、符合合纳入标标准的患患者。分组方方法 采用随随机数字字表将受受试者随随机分配配至方药药对证组组（自拟拟方舒郁郁）、方方药次对对证组（自自拟方舒舒郁加减减）。疗程及及随访 疗程程8周，对对治疗后后临床痊痊愈、显显效及有有效的患患者，治治疗后长长期随访访，观察察是否复复发。临床疗疗效评定定方法 于治治疗前、治治疗1ww、2ww、4ww、6ww、8ww末，采采用汉密密尔顿抑抑郁量表表、临床床疗效总总评量表表、

21、疾病病严重程程度量表表、中医医证候积积分表、副副反应量量表进行行疗效及及副反应应评定。5.2.22从肝论论治经前前期综合合征（重重度，PPMDDD）临床床疗效。病例选择 符合西医经前期综合征（重度，PMDD）诊断标准且中医辨证为肝气逆证、符合纳入标准的患者。分组方法 采用随机数字表将受试者随机分配至方药对证组（自拟方白香丹）、方药次对证组（自拟方白香丹加减）。疗程及随访 疗程2个月经周期，对治疗后临床痊愈、显效及有效的患者，治疗后进行远期随访，观察是否复发。临床疗效评定方法 采用症状严重程度每日报告、经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证症状严重程度医生记录表、副反应量表进行疗效和副反应评定。

22、5.3临床床疗效的的作用机机制5.3.11临床研研究脑功能能区定位位研究 小样样本选取取健康志志愿者，抑抑郁症（轻轻中度）肝肝气郁证证患、经经前期综综合征（重重度，PPMDDD）肝气气逆证患患者，采采用BLLOD-fMRRI技术术，观察察上述研研究对象象治疗前前后相关关脑区（激激活、抑抑制）的的位点及及其数目目、强度度，并与与对照组组比较，探探讨其脑脑功能活活动区的的异同点点。定位下下的脑功功能区血血流灌注注及相关关指标信信号检测测 利利用利用用单光子子/正电电子发射射计算机机断层显显像（SSPECCT/PPET）及及磁共振振波谱成成像（MMRS）技技术，在在研究内内容基础上上，探查查其局部部

23、脑血流流状态及及葡萄糖糖物质代代谢变化化，评估估其脑功功能，揭揭示抑郁郁症（轻轻中度）肝肝气郁证证患、经经前期综综合征（重重度，PPMDDD）肝气气逆证相相关脑区区功能改改变。外周联联系途径径相关指指标变化化 检检测各组组受试对对象血浆浆中相关关微观指指标，并并通过组组间及治治疗前后后对照，比比较各组组疗效差差异，探探讨抑郁郁症（轻轻中度）、经经前期综综合征（重重度，PPMDDD）不同同病证的的神经体体液机制制。5.3.22模型动动物及离离体细胞胞实验。动物模型造模及评价 经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证大鼠模型：应用情志刺激为主多因素造模法制备经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证大鼠

24、模型。动物模型评价：采集模型动物证候表征进行证候归属评价，检测模型动物生物指标进行疾病归属评价。 动物模型相关脑区定位及定位下的神经机制 进行相应脑区定位并应用脑微透析灌流技术，实时检测去甲肾上腺素（NE）、5-羟色胺（5-HT）等关键指标水平变化。动物模型外周血及不同脑区关键指标变化特点与关键基因功能验证 检测模型动物相关脑区、外周血中关键生物指标含量，筛选出与经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证密切相关的神经递质和激素。进行模型动物的基因表达谱分析及关键基因的分布、定位及功能验证，筛选其发病及药物干预密切相关靶基因。相关指标的分子机制及其信号转导 取正常大鼠相应部位神经元进行体外培养，用

25、上述病证的人或动物血清、脑脊液处理细胞，免疫荧光和Western Blot寻找病证相关神经递质或激素的受体及其介导的细胞内信号转导。6、肠易激激、高血血压、肝肝硬化三三种疾病病病证临临床流行行病学横横断面调调查6.1 通通过对三三种疾病病现代文文献分析析，提取取与肝藏藏血主疏疏泄相关关的症状状、证候候要素、证证候；依依据此信信息建立立临床信信息采集集量表，通通过预调调查进行行量表的的联合信信度检测测。 6.2 应应用临床床信息采采集表，在在全国多多中心同同步开展展大样本本约8000例/病的临临床流行行病学横横断面普普查。分分别对符符合现代代疾病诊诊断和各各项纳入入标准的的患者进进行临床床躯体症

26、症状、情情绪精神神症状的的调查，并并采用统统一的检检测标准准，检测测相关实实验室指指标。其其中主要要指标包包括：三三种疾病病同性指指标血液流流变学指指标、血血脂、血血糖、血血清促肾肾上腺皮皮质激素素释放激激素（CCRH）；血清皮皮质醇，血血浆去甲甲肾上腺腺素（NNE）、55-羟色色胺（55-HTT）等；各种疾疾病特有有指标。6.3 建建立临床床信息数数据库，进进行多种种统计分分析，主主要包括括：频数数分析描描述调查查人群特特征；方方差分析析方法统统计不同同疾病不不同分期期的差异异性；相相关分析析方法统统计宏观观症状与与微观指指标的相相关性；Loggistt回归分分析、判判别分析析提取特特征症状

27、状、指标标；并结结合无监监督数据据分析方方法（如如基于熵熵的分析析、隐结结构模型型）确立立肝藏血血主疏泄泄功能异异常的主主要宏观观表现及及微观指指标，及及其在三三种疾病病中的共共性表现现特点和和个性特特征；建建立宏观观与微观观相结合合的肝藏藏血主疏疏泄功能能异常状状态的判判别模式式。7、应用养养血调肝肝系列方方剂对三三种疾病病患者进进行药物物干预7.1按照照三种疾疾病现代代医学的的疾病诊诊断标准准，及较较为公认认的中医医证候诊诊断标准准，选择择肠易激激综合征征肝郁脾脾虚证3300例例、脾胃胃虚寒证证1000例；高高血压病病肝阳上上亢证3300例例、肝火火炽盛证证1000例；肝肝硬化脾脾肾阳虚虚

28、、肝气气滞血瘀瘀证1000例、肝肝肾阴虚虚、气滞滞血瘀证证2000例。按按照临床床为理论论创新服服务，为为实验研研究奠定定基础的的原则，按按照1：1：11：1的的比例，分分别设立立安慰剂剂对照组组、方证证对应组组、方证证次对应应组、非非干预证证候对照照组，参参照新药药创制的的研究方方法，应应用养血血调肝方方剂的免免煎颗粒粒，进行行临床干干预研究究。 7.2依据据建立的的肝藏血血主疏泄泄功能异异常状态态的判别别模型编编制临床床观测量量表，对对纳入研研究的患患者分别别在治疗疗前、治治疗后及及随访期期，采集集其宏观观临床症症状、体体征及微微观指标标，建立立数据库库。 7.3 应应用方差差分析、秩秩和

29、检验验、判别别分析、因因子分析析、多维维尺度分分析等多多种统计计方法，分分析各项项症状、指指标在治治疗前后后的差异异性；不不同证候候类型间间的差异异性；不不同疾病病间的异异同性等等。并综综合分析析结果分分析从肝肝论证的的干预机机制及证证治规律律。8、肝藏血血主疏泄泄现代科科学内涵涵的实验验研究8.1肝藏藏血主疏疏泄功能能异常的的病证结结合动物物模型的的构建8.1.11 建立立公认的的疾病动动物模型型。分别别采用慢慢性应激激和嗅球球切除法法制备抑抑郁症大大鼠模型型，采用用孤养加加慢性不不可预见见性应激激和新生生鼠母子子分离复复合避水水应激法法建立肠肠易激综综合征大大鼠模型型，采用用双肾一一夹法和

30、和自发高高血压大大鼠构建建高血压压大鼠模模型，采采用腹腔腔注射二二甲基亚亚硝胺法法和皮下下注射四四氯化碳碳法诱导导肝纤维维化大鼠鼠模型。以以上的疾疾病模型型分别按按照现行行的疾病病诊断标标准进行行严格的的评价，合合格动物物纳入研研究。8.1.22 进行行动态、全全面的信信息采集集。对上上述符合合疾病诊诊断的动动物模型型，从模模型成立立的时间间点起，拟拟定动物物信息观观察表，进进行规范范化的动动态信息息采集，以以评价其其证候属属性。信信息采集集表的条条目主要要来自于于：动物实验研研究文献献提示的的反映疾疾病的动动物宏观观表征 和反映映证候属属性的动动物宏观观表征 ；临床证候研研究文献献提示的的与

31、证候候密切相相关的理理化指标标；本项目组的的临床研研究提示示的与具具有诊断断和鉴别别诊断意意义的临临床症状状和可用用于证候候判别的的理化指指标特征征模式。8.1.33 动物物证候属属性的辨辨识。 动物证证候属性性的辨识识以临床床诊断标标准为依依据，采采用课题题组前期期建立的的以宏观观特征组组合、微微观指标标特征组组合、方方剂反证证相结合合的三维维动物证证候判别别方法进进行辨识识。首先先通过宏宏观特征征组合和和微观指指标特征征组合确确定各疾疾病模型型的证候候演变规规律。通通过不同同疾病造造模方法法的比较较，筛选选出较优优的抑郁郁症肝气气郁结证证、肠易易激综合合征肝郁郁脾虚证证、高血血压肝阳阳上亢

32、证证、肝硬硬化肝肾肾阴虚气气滞血瘀瘀等病证证结合动动物模型型。8.1.44方剂反反证。在在上述病病证结合合动物模模型证候候属性稳稳定的时时间窗内内，分别别采用对对证的养养血调肝肝方药和和次对证证的方药药进行干干预治疗疗，并以以模型组组和正常常组作为为对照，进进一步佐佐证模型型动物的的证候属属性。各各模型的的干预药药物和临临床组统统一，以以相互应应证。8.2 肝肝藏血主主疏泄的的调控机机制研究究8.2.11分组。通通过上述述筛选得得到的稳稳定的反反映肝藏藏血主疏疏泄异常常状态的的病证结结合动物物模型作作为实验验组，以以不符合合相应证证候诊断断的疾病病模型和和正常组组作为对对照，从从整体、器器官、

33、分分子三个个层面分分析肝藏藏血主疏疏泄的调调控机制制，观测测指标分分为共性性的核心心指标和和反映疾疾病个性性的二级级指标以以及探索索性的基基因分析析指标等等三大类类。8.2.22核心指指标和疾疾病相关关的二级级指标的的检测。采采用HPPLC电化学学检测、EELISSA、免免疫组化化、RTT-PCCR等，研研究： （1）核核心指标标围绕慢慢性应激激相关的的调控网网络，包包括：1）整体指指标：行行为学实实验、脑脑血流图图、肝血血流图、功功能核磁磁共振。2）血液指指标：神神经递质质（包括括DA、NNA、NNE、55-HTT、Acch等）；内分泌泌激素（包包括CRRH、AACTHH、皮质质醇、褪褪黑素

34、等等）；血血管舒缩缩因子（包包括ETT、CGGRP、 AnggII 等）、肝肝脏合成成（代谢谢）的生生物活性性分子（如如 HSSP700、Hccy 等等）。3）组织检检测指标标：神经经递质、激激素及其其受体在在特定脑脑区、疾疾病相关关的效应应器官的的表达水水平（包包括DAA、NAA、5-HT 、皮质质醇等及及其受体体）和病病理形态态学检测测。（2）疾病病相关的的二级指指标1）抑郁症症：氨基基酸神经经递质含含量/受受体表达达（GlluNNMDAA受体、GGABAAGAABA受受体），离离子通道道和信号号转导分分子分析析、对信信号转导导分子调调节物质质（包括括PDEE4等），适适应性调调控分子子（

35、包括括GRKK、-arrresstinn等）2）肠易激激综合征征：在体体结肠运运动、离离体结肠肠平滑肌肌张力、离离体肠粘粘膜短路路电流、外外周血PP物质含含量、GGABAA、肥大大细胞活活化程度度观察、胸胸腺、脾脾脏脏体体指数计计算、TT淋巴细细胞亚群群水平分分析、外外周血环环核苷酸酸水平、外外周血前前列腺素素E2水水平等。3）高血压压：244h动态态血压、AAT1、 NO 、ANNP、 AVPP、 CCa2+ PPGI22 、TTXA22、 精精氨酸加加压素等等。4）肝硬化化：外周周血HAA、PCCIIII、LNN、IVVC、 TGFF-1，血血清肝功功能（包包括ALLT,AAST,ALBB

36、等）、肝肝组织血血管紧张张素受体体、TGGF1、SSmadd4、SSmadd7等。8.2.33数字化化基因表表达谱分分析和ssmalll RRNA分分析。在在上述的的研究结结果进行行分析和和整合，初初步确定定肝藏血血主疏泄泄的共性性的特定定反应脑脑区。对对特定反反应区域域的组织织样本，采采用测序序技术数数字化基基因表达达谱分析析和smmalll RNNA分析析，结合合生物信信息学分分析，进进一步探探索其可可能的分分子调控控机制。8.2.44共性调调控机制制的提取取。综合合研究结结果，采采用神经经网络、图图模型等等多种数数据挖掘掘方法，对对上述各各调控分分子进行行关联和和分析，初初步建立立起调控

37、控网络。并并实现分分子、组组织器官官和整体体水平的的功能状状态的逐逐级整合合，刻画画出肝藏藏血主疏疏泄的多多级的特特定调控控网络。8.3养血血调肝方方干预的的效应机机制研究究8.3.11分组。采采用本研研究构建建的反映映肝藏血血主疏泄泄功能异异常状态态的病证证结合动动物模型型，随机机分为模模型组、对对证治疗疗组、次次对证治治疗组，同同时设正正常对照照组。8.3.22 肝藏藏血主疏疏泄的分分子调控控网络的的检测。在在证候稳稳定的时时间窗内内分组给给药，观观察养血血调肝药药物对于于2.22.4获获得的特特定指标标群的影影响，从从而验证证肝藏血血主疏泄泄的调控控网络并并阐明养养血调肝肝药物的的作用机

38、机制。技术路线图图四、年度计计划年度研究内容预期目标第一年1、研究实实施方案案的论证证与讨论论2、文献整整理研究究。3、生理状状态研究究的文献献分析4、应激研研究的文文献分析析5、信息平平台建设设的筹建建6、五种疾疾病的现现代文献献研究7、五种疾疾病临床床调查的的前期准准备8、五种疾疾病动物物模型的的构建9、动物模模型证候候评价指指标体系系的文献献研究1、拟定课课题实施施方案，分分割研究究任务，签签订研究究任务书书2、完成知知识考古古学分析析肝藏血血主疏泄泄有关的的研究单单元的对对象形成成分析3、完成肝肝脏象功功能生理理状态研研究的文文献分析析，编制制生理状状态研究究调查表表，分析析北京地地区

39、四时时八节气气象变化化特点5、完成中中医理论论与应激激研究相相关的文文献分析析，编制制月经周周期研究究调查表表，初步步筛选志志愿者6、拟定信信息平台台建设方方案，编编制相关关程序，进进行平台台试运行行7、建立五五种疾病病现代文文献数据据库，完完成数据据分析8、拟定五五种疾病病临床流流行病学学调查实实施方案案，编制制调查表表，进行行人员培培训，并并完成预预调查9、建立五五种疾病病动物病病证结合合的证候候模型10、发表表文章110篇左左右第二年1、肝藏血血主疏泄泄知识考考古学研研究2、开展健健康人群群及动物物的四时时八节动动态观察察3、进行月月经周期期动态观观测4、正式运运行信息息平台5、五种疾疾

40、病的临临床流行行病学调调查6、五种疾疾病动物物模型的的动态观观察和证证候属性性辨识7、模型动动物证候候属性的的方剂反反证研究究8、进行课课题中期期总结与与检查1、完成知知识考古古学对肝肝藏血主主疏泄有有关的研研究单元元进行话话语构成成分析之之陈述方方式分析析、概念念扩散分分析、主主题从属属分析。2、完成3300例例健康人人群8个个时间点点的动态态观察，完完成宏观观指标与与微观指指标的观观测；3、完成1100只只大鼠，220只树树鼩8个个时间点点的动态态观测4、完成1100例例健康志志愿者月月经周期期观察与与应激测测试5、进行信信息平台台使用培培训，正正式进行行平台运运行6、完成五五种疾病病各8

41、000例全全国多中中心临床床流行病病学调查查7、基于临临床流调调数据进进行数据据分析，建建立宏观观与微观观相结合合的“肝藏血血主疏泄泄”异常状状态的判判别模式式。8、4种以以上的反反映肝藏藏血主疏疏泄功能能异常状状态的病病证结合合动物模模型及其其判别方方法。9、撰写课课题中期期总结报报告，完完成中期期检查10、发表表论文110篇左左右第三年1、完善后后三年研研究方案案2、肝藏血血主疏泄泄有关的的研究单单元的知知识考古古学话语语转换分分析3、完成健健康人及及动物生生理四时时八节研研究4、开展志志愿者应应激状态态测试研研究5、信息平平台多中中心质量量监控及及数据库库建设6、开展五五种疾病病临床干干

42、预研究究7、动物模模型的实实验室指指标检测测1、拟定后后三年研研究实施施方案，编编制后三三年课题题任务书书2、完成肝肝藏血主主疏泄有有关的研研究单元元的系统统成分转转换分析析、话语语关系转转换分析析。3、建立健健康人生生理研究究数据库库，提取取核心指指标，描描绘动态态变化曲曲线，建建立肝藏藏血主疏疏泄生理理状态判判别模式式4、建立动动物四时时八节研研究数据据库，提提取相关关核心指指标，描描绘动态态变化曲曲线5、建立月月经周期期变化及及应激测测试的数数据库，探探讨肝藏藏血主疏疏泄与情情绪变化化的相关关性，揭揭示其内内在机制制6、拟定应应激研究究实施方方案，筛筛选研究究志愿者者7、通过信信息平台台

43、对各课课题组全全国多中中心的研研究进行行动态实实时质量量监控，建建立大型型关联数数据库。8、完成五五种疾病病各1000例的的临床干干预试验验，检测测各项指指标9、完成肝肝藏血主主疏泄可可能相关关的核心心指标及及二级指指标的检检测，分分析其在在慢性应应激相关关的神经经内分泌泌网络的的表现特特征10、发表表文章110篇左左右第四年1、肝藏血血主疏泄泄的文献献研究2、志愿者者应激状状态前后后变化的的研究3、信息平平台的数数据汇交交与分析析4、五种疾疾病的临临床干预预研究5、动物模模型的基基因组学学和蛋白白组学研研究1、完成肝肝藏血主主疏泄的的文献研研究2、进行660例健健康志愿愿者应激激测试，分分析

44、其应应激前后后宏观与与微观指指标变化化规律3、完成关关联数据据库的建建设，进进行数据据汇总4、完成五五种疾病病各2000例的的临床干干预试验验，检测测各项指指标，建建立数据据库5、完成肝肝藏血主主疏泄相相关特定定脑区的的数字化化基因表表达谱和和smaall RNAA分析6、完成肝肝藏血主主疏泄共共性调控控网络的的提取7、揭示肝肝藏血主主疏泄相相关特定定脑区的的基因表表达特征征和smmalll RNNA表达达特征8、发表文文章100篇左右右第五年1、完成应应激状态态前后变变化的研研究2、进行数数据汇交交与分析析3、完成养养血调肝肝方药对对肝藏血血主疏泄泄共性调调控网络络的作用用及其机机制研究究4

45、、总结研研究成果果，进行行结题1、完成1120例例健康志志愿者应应激测试试，建立立数据库库，分析析其内在在机制2、通过信信息平台台，进行行多种数数据分析析，进行行数据汇汇交，综综合进行行数据挖挖掘3、揭示养养血调肝肝方药的的对肝藏藏血主疏疏泄调控控的内在在机制4、阐明养养血调肝肝方药的的对肝藏藏血主疏疏泄调控控网络的的效应及及其机制制5、发表文文章100篇左右右6、撰写结结题报告告，完成成结题验验收一、研究内内容1、肝脏象象理论的的内涵、外外延及发发展源流流研究 以传统中医医文献学学的研究究方法为为基础，借借鉴法国国现代思思想体系系史家米米歇尔福柯创创立知识识考古学学的研究究方法，结结合现代代

46、数理挖挖掘技术术，以历历代中医医文献与与史书、志志书、笔笔记等其其它相关关古代文文献为研研究对象象，系统统总结、深深入阐明明肝藏血血主疏泄泄及相关关理论内内在涵义义及学术术发展源源流。其其具体研研究内容容包括：系统梳梳理从先先秦时期期到新中中国成立立前历代代中医及及相关文文献，以以肝主疏疏泄为切切入点，分分析肝主主疏泄及及相关专专题的对对象形成成、陈述述方式、概概念的扩扩散、主主题策略略的选择择等内容容，对文文献中肝肝藏血主主疏泄的的含义及及其诊治治体系生生成变化化进行具具体分析析，以发发现构成成某一时时期医学学思想整整体的深深层结构构“知知识型”或“基本信信码”，也就就是话语语，根据据话语的

47、的转变来来分析肝肝藏血主主疏泄的的含义及及其诊治治体系的的演变及及其原因因，以分分析其形形成和转转变的历历史；在在肝藏血血主疏泄泄及其相相关理论论学术发发展史的的基础上上，确立立其理论论内涵、应应用范围围与原则则，论证证其在脏脏象学说说、脏腑腑辨证以以及临床床各科疾疾病诊治治中的地地位与作作用，解解决学术术诸如“体阴用用阳”“肝阳阳虚”等学术术分歧与与争议；揭示相相关疾病病从肝论论治临床床疗效产产生的机机制和规规律，进进一步丰丰富和发发展脏象象理论；同时探探讨中医医理论发发展与创创新的规规律，尝尝试建立立一个以以历史分分析为基基础进行行中医理理论研究究方法。 2、生理状状态下肝肝藏血主主疏泄功

48、功能的调调控机制制研究（1）正常常健康人人肝藏血血主疏泄泄与四时时节律的的相关性性研究：遵循临临床流行行病学抽抽样调查查的原则则，依据据中医时时间医学学五脏节节律的原原理，在在全国多多中心对对3000例（男男女各1150例例）健康康人进行行四时八八节的动动态追踪踪调查；全面采采集调查查者的一一般信息息、症状状、情绪绪、生活活质量、实实验室指指标等多多种信息息，建立立数据库库。（2）正常常动物肝肝藏血主主疏泄与与四时节节律的相相关性研研究：选选择啮齿齿类动物物大鼠与与灵长类类动物树树鼩，依依据中医医时间医医学五脏脏节律的的原理，选选取一年年中的四四时八节节，采集集8个时时间点动动物的表表征，进进

49、行动物物行为学学检测，以以及神经经递质、退退黑素、血血管紧张张素、肾肾上腺皮皮质等神神经内分分泌指标标的检测测，建立立数据库库。 在在统一的的信息管管理系统统下，应应用现代代信息学学手段，进进行数据据分析，提提炼肝藏藏血与疏疏泄功能能的节律律性变化化特点；揭示其其调节机机制。3、健康志志愿者应应激状态态下肝藏藏血主疏疏泄功能能的调控控机制研研究（1）妇女女月经周周期应激激研究：选取月月经规律律的健康康志愿者者1000人，连连续观测测其三个个月经周周期的情情绪、躯躯体症状状以及一一般性指指标的变变化，并并与月经经期、黄黄体期、月月经后期期分别进进行应激激状态测测试，主主要进行行心理认认知测试试，

50、检测测多导脑脑电等指指标，建建立数据据库进行行分析，探探索月经经周期中中肝藏血血状态变变化与疏疏泄功能能的相关关性，并并总结肝肝藏血主主疏泄异异常状态态下应激激变化规规律，探探讨肝藏藏血主疏疏泄的内内在机制制。（2）健康康志愿者者应激刺刺激前后后不同状状态与肝肝藏血主主疏泄关关系的研研究：选选取健康康志愿者者1200例（男男女各660例）进进行情绪绪刺激和和运动负负荷两种种应激状状态前后后的比较较研究，采采集志愿愿者应激激前后的的宏观表表现、心心理与认认知功能能，以及及神经递递质、退退黑素、血血管紧张张素、肾肾上腺皮皮质等神神经内分分泌指标标的变化化并建立立数据库库。4、五种疾疾病肝藏藏血主疏疏泄功能能异常状状态的判判别研究究 在现代文献献研究基基础上，借借鉴心理理学量表表编制的的方法，编编制