上海交通大学微生物实验实验十一血清学试验课件_第1页
上海交通大学微生物实验实验十一血清学试验课件_第2页
上海交通大学微生物实验实验十一血清学试验课件_第3页
上海交通大学微生物实验实验十一血清学试验课件_第4页
上海交通大学微生物实验实验十一血清学试验课件_第5页
已阅读5页，还剩15页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、实验十一凝集试验（Agglutination assay ）酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)实验要求掌握凝集试验的原理、方法，结果判定和凝集效价的判定。掌握ELISA的基本原理，操作步骤，和ELISA的应用。了解血清学试验在病原微生物学中的应用一、抗原的基本概念抗原：凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能与抗体和致敏淋巴细胞发生特异性结合的物质。抗原决定簇（抗原表位epitope）:抗原分子上的免疫活性区，负责和免疫活性细胞上的抗原受体和抗体相结合。有的抗原分子上可能只有一个抗原决定簇（抗生素等小分子），有的抗原分子上可能有多

2、个抗原决定簇（如病毒、细菌等）。用病毒或细菌等抗原免疫动物机体后，机体所产生的抗体则为多克隆抗体，即通常所讲的抗血清。二、抗体的基本概念机体在抗原物质的刺激下所形成一类与抗原特异性结合的血清活性成分为抗体（Antibody）。抗体的化学本质是免疫球蛋白。所有抗体的单体都由4条多肽链构成：两条重链和两条轻链。轻链N端1/2和重链N端1/4的氨基酸组成和序列变化较大，称为可变区（variable region,VL,VH）,肽链的其余部分变化不大，称为恒定区（constant region,CH,CL）。可变区是与抗原结合的区域，决定抗体的特异性。根据其性质不同分为间接ELISA、双抗体夹心ELI

3、SA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及抗体捕捉ELISA。应用：抗原鉴定、疾病诊断、抗体效价检测、疫苗免疫效果评价等检测抗原实验步骤：所有试剂回升到室温：标记好各自的反应孔（每组2人，每组4个孔）：抗体包被，过夜，洗涤（该步骤试剂盒已完成）：每组第-3孔各加5l样品稀释液，然后第一孔加提供的大肠杆菌菌液5l，然后递减稀释至第2孔，从第2孔取出50 l丢弃。第3孔不加其他物质，第4孔加50l阳性标准对照物, 作用30-60min5：倒掉孔中液体，并在吸水纸上拍干，每孔立即加洗涤液溶液l，室温静置分钟，拍打干净，按上述方法再重复洗涤各孔3次。6：每孔加5l已稀释的酶标记物，作用3

4、0-60min7：洗涤3次，同步骤5洗涤8：加显色试剂 A 5l,再加显色试剂 B 5l,25暗处作用分钟9：每孔加反应终止液l,特别注意安全，观察颜色变化.10: 测定在nm处测定吸光度值。 所有的测试条都放回到板中统一测定以空白孔调零。 记录各孔的OD值，确定阴性和阳性值。 P/N值大于2.1为阳性 P为样本的OD值 N 为阴性对照的OD值细菌凝集试验步骤取一块干净的玻片，分成2个区，并在玻片的左上角做好标记分别吸取20l生理盐水在第一区和第二区无菌操作，分别挑取适量的菌落，于第一区和第二区，混匀。（或先制备成菌液，再滴加到玻片）在第一区加入20l阳性血清，混匀，晃动玻片观察结果。第二区没有凝集，第一区出现凝集块的判定为

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 医学制药

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论