脓汁和粪便标本中病原菌的检测-3课件

1、斜面4支，空气、手指皮肤、细菌分离培养物（上次实验平板）器材准备医学微生物学实验综合性实验三空气细菌学检查结果分析手指皮肤细菌学检查结果分析空气的细菌学检查组号采样时间(min)采样地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟) CFU：colony forming unit WHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围级区10器官移植、心血管、矫形等外科手术室，保护性隔离室，灌注或配制注射液实验室级区20

2、0无菌室、手术室、供应室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症监护病房级区200500一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手术室浴室我国公共场所空气卫生细菌学标准（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）撞击法cfu/m3沉降法个/皿适用范围10001035星级宾馆、饭店1500202星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店250030普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱400040音乐厅、影剧院、录像厅（室）、游艺厅、舞厅、理发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船

3、客舱、饭馆（餐厅）700075展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+ 第2格为洗手后 常规(甲、丙)洗手方法：? 标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：？第4格空白对照：-医学微生物学实验综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法（讲解）脓汁和粪便标本检验（录像）细菌的纯培养 Pure Cultures脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。37培养24小时 粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫

4、黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径12mm。37培养24小时 斜面接种分工甲普通平板黄色菌落1支斜面 乙普通平板白色菌落1支斜面 丙伊红美蓝平板紫黑菌落1支斜面 丁伊红美蓝平板粉红菌落1支斜面 斜面正面上2/3作标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落，得到同组同学认可，才能挑取。画圈选菌落画圈选

5、菌落甲黄色丙紫黑乙白色丁粉红接种环套住菌落轻刮取菌斜面接种法 Streak Slant Method甲黄色, 乙白色。丙紫黑, 丁粉红。标记：组号，颜色细菌接种在斜面培养基的表面。生物安全警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在火焰周围1020厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。奥林巴斯 CX21型 生物显微镜开关与调整光强开或关之前，必须将亮度调整

6、旋钮按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。电源开关拨到侧为开，拨到侧为关闭。按箭头方向转动亮度调整旋钮变亮，相反方向转动则变暗。聚焦从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮，使物镜尽可能接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮， 使载物台下降。看到标本以后，用微调旋钮来正确对焦。10倍物镜的工作距离（WD，从物镜到标本的 距离）为10.5mm。 油镜的WD为0.13mm。调整聚光镜位置和孔径光阑用聚光镜上下移动旋钮，将聚光镜转到最上面。在孔径光阑环上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。转换物镜旋转物镜转盘，将希望使用的物镜（10倍、1

7、00倍）转到标本的上方。100倍浸油物镜使用方法油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过12次浸油，排除油内气泡。香柏油折射率n=1.515空气的折射率n=1.000玻璃的折射率n=1.520油浸镜的原理光线 滴加香柏油可使光线更多进入物镜,避免光线通过折射率低的空气而散失,以提高物镜的分辨率,使物象明亮清晰。 放大倍数：目镜10倍物镜90或100倍。奥林巴斯 CX21型 生物显微镜（实验柜内，每人一台）注意：只能横放，不得竖放。显微镜油镜的使用P1310物镜标本位置

8、滴加香柏油100油镜浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）细调节调焦，观察物像记录结果关闭电源。油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。显微镜罩上防尘罩 横放在实验柜内。(顺德校区）实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座。（校本部）实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座。 医学微生物学实验综合性实验三、一空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析脓汁和粪便标本中病原菌的检测菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法（讲解）脓汁标本检验 （录像）肠道致病菌的分离鉴定（录像）思考题在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?空气的卫生标准规定如何?你的实验结果说明了什么问题?怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄