rnascope多重荧光试剂盒用户手册第二部分

1、 HYPERLINK l _TOC_250029 HYPERLINK l _TOC_250028 HYPERLINK l _TOC_250027 HYPERLINK l _TOC_250026 HYPERLINK l _TOC_250025 HYPERLINK l _TOC_250024 HYPERLINK l _TOC_250023 RNAscope探 HYPERLINK l _TOC_250022 HYPERLINK l _TOC_250021 HYPERLINK l _TOC_250020 HYPERLINK l _TOC_250019 第2 章 在您开始之 HYPERLINK l _T

2、OC_250018 HYPERLINK l _TOC_250017 HYPERLINK l _TOC_250016 HYPERLINK l _TOC_250015 1X 缓冲液 HYPERLINK l _TOC_250014 HYPERLINK l _TOC_250013 HYPERLINK l _TOC_250012 HYPERLINK l _TOC_250011 杂交Amp1- HYPERLINK l _TOC_250010 杂交Amp2- HYPERLINK l _TOC_250009 杂交Amp3-杂交Amp4- HYPERLINK l _TOC_250008 HYPERLINK l

3、_TOC_250007 HYPERLINK l _TOC_250006 HYPERLINK l _TOC_250005 疑难解 HYPERLINK l _TOC_250004 附录A.试剂体积指确定试剂的体 HYPERLINK l _TOC_250003 附录B. 安全化学安全 HYPERLINK l _TOC_250002 生物危害安全文件和支获得 HYPERLINK l _TOC_250001 获得支 HYPERLINK l _TOC_250000 联系信有限产品质 1 关于本指重点！关于第1部分样320513FFPE本用户手册为使用 RNAscope 多重荧光试剂盒（320850）的用户

4、提供指南和方案。您需要使用 RNAscope 试重点！关于第1部分样320513FFPE nical-support/user-manuals，样本用户指南。RNAscope 多重荧光法采用了一种新颖和专利的原位杂交方法（ISH）胞中最多同时检测三种不同的目标 RNA。若需同时检测四个不同的目标 RNA，则需要订购一个自定义的试ACDRNAscope 716RNAscope 检从正确处理的样本开始，首先预处理玻片，然后将为不同荧光检测通道而设计的 RNA 特异性探针与目标 RNA 杂交。在一系列高效、特异的信号放大后，针对两个或两个以上的目标 RNA 转录本在两个或多个RNAscope 多重荧

5、光分析可用于新鲜冰冻（FF）组织、在腔室培养载玻片上培养的贴壁细胞、固RNAscope 抗原修复液 RNAscope 蛋白RNAscope 蛋白RNAscope 蛋白酶 RNAscope 抗原修复液 RNAscope 蛋白外周血单核细胞RNAscope 蛋白*RNAscope 多重荧光检试剂盒中不包括RNAscope 抗原修复液，请单独订购（货号注：对于 FFPE 组织的，遵循样本指南（文件 322452-USM），但有下列不同不需要 RNAscope RNAscope 1：2：与靶 RNA3：4：从适当的组织切片开始进行预处理使目标RNA可以结1试剂盒成分与保对与目mRNA杂交镜目视观察目标

6、 RNARNAscope 多重荧光分析需要RNAscope 探针和RNAscope 多重荧光试剂盒，探针和试剂盒可分开RNAscope 探RNAscope 探针由用户特异性目标探针和阳性、对照探针构成。请 ucts/-probes/search-product 查询 特异性靶探针。请 httand-probes 订购适当的对照探针。每一个目标探针包含与特异性目标 RNA 结合的寡核苷酸探针混合，通过逐级放大，就能在 C1、C2 和C3 三个通道的其中一个通道检测。注：根据特定的 RNAscope 分析，C1、C2 和 C3 通道将呈现不同的颜色。RNAscope 通道的颜色显示如下表所示Amp

7、4AltA光标Alexa48854010Atto55058010Atto64769010*默认C1 目标探针是即用型探针（RTU），而C2和C3 的探针以50浓缩储备液。为了在多重分析中独立检测不同的目标 RNA，每个目标探针必须在不同的通道中，混合物中必须有一个 C1 探针。“空白探针 -C1”（货号 300041）可替代重点！ 试剂盒提供三个可选择的荧光显色模式。可以根据你的实验设计选择任何一种显色模式（Amp4AltA、BAmp4AltA-Amp4AltB-Amp4AltC-AlexaAttoAttoAttoAlexaAttoAttoAttoAlexa200mm7 0.75）的切片的染色

8、。组织切片较大检测数量目标探针-物种- 3mL1目标探针-物种- -60L1目标探针-物种- -60L1目标探针-物种- -60L13mL1C1通道POLR2A，C2通道PPIB 和C3道为UBC种探针RTU合探针3mL1的RTU探针，每个检通道有各自对照探针3mL1RTU 探针稀释3mL1 仅通过定制订单RNAscope 多重荧光试 试剂盒和一个洗涤缓冲液试剂盒预处理试剂盒（322340）或通用型预处理试剂（1RNAscope 蛋白酶 4.5mL12-2RNAscope 蛋白酶 4.5mL2Amp1-3mL12-Amp2-4.5mL12-Amp3-3mL12-Amp4AltA-FL（货4.5

9、mL12-Amp4AltB-FL（货4.5mL12-Amp4AltC-FL（货4.5mL12-3mL12-60mL4室温（20-需要的材料和仪RNAscope 分析需要下面的材料和仪器HybEZ重点！仅使用这一系统RNAscope 分析进行了HybEZ杂交系统（110V，货号310010；220V，货号310013）RNAscope 分析中的杂交和孵育步骤设计的RNAscope 分析中的孵育步骤需要湿润条件来防止切片变干。有关怎样使用HybEZ考 HybEZ杂交系统用户手册，见technical-support/learn-more 培训HybEZ杂交炉（110 或 220 13100101H

10、ybEZ载玻片架（20 片载玻片的容量1HybEZ增湿2-HybEZ增湿纸15 AmericanMasterTechTissue-Tek AmericanMasterTech AmericanMasterTechFisher12-545-大玻璃瓶-移液管（不同大小-358nm/461501nm/523nm（FITC）554nm/576nm（Cy3）644nm/669740nm/764-的主要供应商。对于其他地区，请联系当地的供应商咨询货号 2322452-USM重要流程在首次使用 RNAscope 分析用于样本检测之前，建议您 nical-support/learn-more演示RNAscop

11、e 多重荧光通道评估玻片（310022）来确保荧光显微镜配备了正确的激发和发射滤从适当的切片开始。请参考的样本和预处理用户手册， nical- 总是在你的样本中使用阳性和对照探针来评价样本 RNA的质量和最佳的通透性依照质量管理规范，并遵循所有必要的安全程序。参见第 21 页上的附录 B 安全性以了解3RNAscope 重点！对于第1部分样本和预处理指南，用于新鲜冰冻组织见于文件 320513或用于FFPE组织的见于文件 322452-USM。杂交Amp1-FL30分杂交Amp2-FL15分杂交Amp3-FL30分杂交Amp4-FL15分实验需要由 RNAscope RNAscope Amp1

12、-Amp2-Amp3-Amp4AltA-FL，Amp4AltB-Amp4AltC-C1 目标探50C2标探50C3标探大玻璃瓶Tissue-Tek Tissue-Tek HybEZ 杂交移液管（不同尺寸盖玻片，24mmx50你可以在准备预处理试剂的同时配制试剂。参考样本和预处理用户指南，请 AMP 1-4 FL剂置于室温中HybEZ40C FFPEFFPE 的文件322452-USM轻弹或吸取去除载玻片上的多余液体，并放到HybEZ载玻片架上。加入4滴合适的探针完每加 4 滴适当的探针。HybezHybEZHybezHybezHybezTissue-Tek Tissue-Tek AmpAmp1

13、-Amp2- 多余液体。加 4 滴 AMP 1-FL 完每一片切片。HybEZ 载玻片架放到从HybEZ杂交炉中取出的 HybEZ HybezHybezTissue-Tek 余液体。加 4 滴 AMP 2-FL 完每一片切片。HybezHybez湿盒中，密闭湿盒并插回到杂交炉中，40 C 15HybezHybezTissue-Tek Amp3- 余液体。加 4 滴 AMP3-FL 完每一片切片。HybezHybez湿盒中，密闭湿盒并插回到杂交炉中，40 C 30HybezHybezTissue-TekAmpAmp4-Tissue-Tek HybEZ载玻片架前到轻弹或甩载玻片，去除多余液体。加

14、4 滴 AMP4-FL 完每一片切片。注：有三个可选的替代荧光颜色模块。可以选择任何荧光组合（AMP4-FLAltA、B或C），对于组织默认的模块是 Amp 4 ALT B。HybezHybez湿盒中，密闭湿盒并插回到杂交炉中，40 C 15HybezHybezTissue-Tek地将一个24mm50mm盖玻片放到组织切片上，避免气泡。在4C条件下保存载玻片 镜。多光谱显微镜/摄像系统（如 Nuance FX）灵敏度的冷CCD机，具64m更小的像素，峰值量子效率 65%常规模式包括：Orca-4.0 （Hamamatsu）NuanceFX（Nuance）LeicaDM列或等同系20（N.A0.

15、75）空气镜、 40（N.A.0.8）40（N.A.1.3）油镜、（N.A. 1.3）油镜以及 （N.A. 1.4）2040物镜可分别用于高表达和低表达重点！ RNAscope 荧光试剂盒主要用于新鲜冰冻组织和培养的细胞检测。这主要是由于组织自体荧光的干扰而带来的成像和分析方面的。如果有多光谱成像系统，如 Nuance FX （Nuance），你也可以在实体瘤 FFPE 组织上使用 RNAscope 荧光试剂盒。已经成功的检测乳腺、结肠、肾脏和肝脏等的实体瘤。2.RNAscope Npy（红色）Fezf2（绿色）的表达； 63 油镜，共聚焦成像。疑难解答的相关信息，请联系技术支持确定试剂在开始

16、实验之前，请测量阻水圈内侧边缘的尺寸，以确定每个载玻片的液滴数（见下表）阻水圈尺寸 *（英寸0.75”0.75”456* 在阻水圈内侧测量其尺寸。本用户手册中的参考值适用于 0.75 x 0.75 的阻 的阻水圈尺寸是0.75x0.75。采用该尺寸的阻水圈，每个探针足以用于染色约20个切片。使用较大的组织切片时，所化学品B化学品B全如需获取SDS，请 nial-support/user-manuals。尽量减少与化学品的接触。在处理化学品时穿戴适当的个人防护设备（例如护目镜、手套或防护服）请确保废弃物的、转移、弃置符合所有地方、州 / 省和 / 或生物危害警告！生物危害。生物样品（例如组织、体

17、液、病原物以及人和其他动物的血液）具有传配备的设施在有适当（例如物理设备）防护的条件下完成。在操作有潜在传染性危害的物质之前，操作应根据适用的规定和公司 / 机构要求接受培训。清阅读并遵循以下适用的指南和 / 或规定要求：卫生及公共服务部的微生物和生物医学生物安全性指南，参见ty职业安全性和健康标准，血液病原体 (29CFR1910.1030)，参见：您的公司构关于潜在传染性物质的操作处理的生物安全性程序方关于生物危害性指南的其他外信息，请查询关于生物危害和生物安全性预防措施的地方性指南和法律，参照世界卫生组织（WHO）生关于化学品的、评估、和限制 (REACH) 的信息，参见：获得支安全说明书 (SDS) 可通过以下获得：