DB12-T361-2008单极虫病诊断规程

1、ICS65.150B50 备案号：2008-02-19发布2008-03-30 实施DB12DB12/T 361-2008单极虫病诊断规程Standard method fbr diagnosing Lohanellidae in fish未津市质量技术监督局发布DB12/T 361-2008一、w -I.-刖 百-2000的编制要求为指南。出。水产研究所、邓威、王玉佩、杨凯、马文婷、干.菁。本标准的编弓以GB/T 1.1 本标准的附录A、B、C为资料性附录。本标准由大#市水产局提 本标准起草单位：犬津市 本标准主耍*草人：李军 本标准I- 2008年X X月畐次发布。单极虫病诊断规程1范围本

2、规程规定9鱼类单极虫呷诊断规程的定义、病原种类、材料和试剂、采样、诊断步骤、病原体计 数及结果判定的*求。本规程适用下对淡水食用W类及观赏鱼单极虫病的诊断。2规范性引用文卜列文件中呻条款通过本屮准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单(不包括勘误的内容)修订版均不适用丁本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些*件的最浙版*992分析与寄生虫病册中国科亭GB/T 6682-1鱼类寄生虫 鱼病调查手 一版OIE长。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用丁本标准。 验室用水规格和试验方法张剑英主编，科学出版社，1999:院水生先物研究所角.病学研究

3、室编为，上海科学技术出版社，1981,第水生动*疾病诊断手册2000第ZZ版3术语和定义卜列术语和定*适用于本牛准。单极虫病lohanellidae由单极虫属(ielohcmellus Kudo, 1933)的一些种类寄生鱼体导致寄主各种临床表现的疾病叫单 极虫病。4病原种类-单极虫属及单极虫扃，见附录A在鱼类养殖中妹引起单极虫阿的常见种类有鮫单极虫(T.rohitae).光滑单极虫IT. hovorkae)、吉 陶单极虫(T. kitau*)等。参照鱼类寄生虫与寄生虫病1999年第一篇第/、章第_节-十一-单极虫科 (资料性附录)。5材料和试剂5. 1皿、5. 2材料普通光学显微镜;放大镜、

4、双|筒解剖镜、载玻片、盖玻片、綴于、手术刀、手术剪、吸水纸、培养 滴管。试剂0.85%生理盐水、70%酒精、锹)5%或10%福尔马林、甘油胶月东、肖氏液。 配置试剂用水符合GB/T 66821992要求。6采样及目检 6. 1样品目检单极虫的多数种#,寄生于鱼体表、觥、肠道及体腔，都表现出肉眼可见的症状，即白点状或白 色的瘤状地囊，抱囊话状和大小不&则，颜色白、不透明。用镶子取下一个抱囊放在载玻片上，加上一DB12/T 361-20082盖玻片盖上*压，如勉囊破裂并流出乳白色液体，可初步诊断为单极虫。观察结束，做 行实验室检荷的采样。滴生理盐水，用 好详细记录并进6.2采样量用了检查诊的样品至

5、少5尾章、第一部分概符B.采样方法忍行采样，见附录B (资料性附录)。6. 3样品运输实验室检查用活鱼进行 表示鱼死术久，h以用来检查实验室进行*极虫病检査寸应在采集的病料中加注原池水进行活体运输。每个容器只装运同一种病 料送至实验室。嵐果运输时间曲过2h,则应耍有增氧设备并应尽暈保证低温低密度。折的鱼应有定数量，以保证检查结果貝有代表性和可靠性，进行单极虫病检查时采集 0尾。也可按照OIE水生动物疾病诊断手册2000第二版中第二部分鱼类病害、第1.1检查，如果是死鱼，必须是新鲜刚死的揭开觥盖观察，如鲤瓣鲜红,7诊断步骤及保7. 1显微镜镜检在100倍或40()倍显微镜卜，个孑包囊中有成千上万

6、个拖子虫。7. 1. 1体表检查体表，用轻压片，压片后，7. 1.2 鳍日检止常的鱼剖镜检査有否抱囊日检鱼体务鳍有溃烂或向， 盖玻片盖上轻压，冃点或抱囊直7. 1.3 醜 先用剪刀将左#两边的鲤完， 组织(应从每一边車的第一片鲤 上盖玻片，并轻压#片，显微镜如鲤上肉眼可血白点或抱囊.，则用镶子刮取冃点或抱囊，或取整片鲤丝压片，镜卜检査。7. 1.4体腔打开鱼体腹腔，寄生。取载玻片一弓卜滴一滴生用盐水，用镣子刮取冃点部位或砲囊置丁载玻片上，盖上盖玻片，并轻 压玻片，见抱囊破*后，显微镜，佥查。7. 1.5肠道将肠道外壁上才有脂肪去除草净，把肠前后伸直摆在解剖盘上。将肠分为前、中、后三段，各取一

7、段，用剪刀从与肠苒 滴生理盐水，盖上.玻片，进行镣检，每部分同时检査两片标本。剪开肠道后，如察。7.2单极虫的保存 按照鱼病调漬方法进行，见附录C压破的饱囊液体早.橄榄形的胞子状，清晰可见，可诊断为单极虫病。一解剖刀刮取遗片卜的瘤状物，置丁载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片用拇指轻 显微镜观察。,取务个鳍进行检查.取载玻片一张，滴一滴生理盐水，剪卜各鳍，置丁玻片上，解存在。8计数及结果判定点，用镣子刮取溃烂或白点部位，置于载玻片上，加一滴生理盐水，用 裂，显微镜检査。整地取出，分开放在培养皿里，并附上左右标记。用剪刀剪取一小块醜 片接近两端的位置剪取)，放在载玻片上，滴入1滴2滴生理盐水，盖

8、 査有否跑囊存在，每边鲤至少要剪两片。仔细观察显露出的部位有无可疑病变。如发现白点，或较大抱囊，有可能是单极虫行的方向剪井一个小小切口，用镣子从切口上取一小滴内容物放在载玻片上，滴一见白点或砲附着，直接用解剖刀刮取白点或抱囊丁在玻片上，压片后，显微镜观f手册1981，第二版第四章第五节-1-标本的收集-(4)粘抱子虫及(6)单弛子虫 (资料性附录)。DB12/T 361-2008 8.1病原体记数 8.1.1计数符用“ + ”表亍： + ”表示有；+”表示多；+”表示很多。8. 1.2高倍显微镜400倍下，有1个20个虫体时记 + ”，21个50个虫体时记+”，50个以 上的虫体时记“十+”

9、；弛囊用数字说明，虫体数为同一片中3个视野的平均数。8.2结果判定日检及高倍显微镜卜TOO倍观察虫体结构来判断被检样品是否感染单极虫，如若感染则判为单极虫 病。A. 1天津地区常见严重致病种(T. hovorkae)、古陶单极虫(附录A(资料性附录)单极虫病原种类特征类有鮫单极虫(T rohitae) (Southwell & Prashad, 1918)、光滑单极虫 T. kitauei) 等。(T. rohitae) 片E白色当mm。孑包于 于长的1/31A. 1.1簸单极虫着生丁鱼体鳞 可达32 mm,短的布5 节长圆形，约占饱 A. 1.2 光滑单极虫(T. hovorkaQ通常寄生丁

10、鲤(Southwell&Prashad, 1918)蜡黄色，抱囊大小形状不一，有圆形、椭圆形、氏方形或多角形，其R 长29.8卩m35卩m, 7卩m12.3 pm,极囊氏19卩m25卩m,宽为7卩m, 卩2。嗜碘泡1个。弛于外面常被有一层无色透明的薄膜，见图A.1。卿鱼体表及灘部。抱囊呈不规则块状，人小不一，为2 mm3mm,见图A.2。A. 1.3 吉陶单极庄,(T. kitauei)寄生在鲤鱼肠道粘膜上，通 泡1个，1个棍棒状极囊，见图A.常会形成大拖囊，使肠膨大变薄。拖于一般较大，梨形或囊形。嗜碘30图A. 1光滑单极虫(血血赫讯队daw而ie)图 A. 2 吉陶单极虫(Fielbfia

11、no血Kitanei Engsa. 1981)10 u in3,示缝面观4.示壳面观1918) Kudo,1933附录B（资料性附录）采样数量表B. 1图 A. 簸单极虫 T rohitae (Southwell & Prashad,鱼群大小2%感籍率时取样5%感染率时取样10%感染率时取样50I 503520100|754523250)1105025500)130552610004055271500(40552720001)45602740001456027100001#6027100000或以上o6030注：检疫釆样应釆集全部实验室样品e 单位：足DB12/T 361-2008附录C（资料性附录）标本收集及保存C. 1C. 2C. 3C.4银于取一小块甘油 全溶解后，即盖上把