干细胞移植治疗急性心肌梗死-课件

1、干细胞移植治疗急性心肌梗死The effects of MSCs transplantation for acute myocardial infarction 天津中医药大学第二附属医院 The Second Teaching Hospital of TUTCM徐 强干细胞移植治疗急性心肌梗死The effects of BackgroundBackgroundMiranda D. Grounds, et al. The Journal of Histochemistry & Cytochemistry 2019,50(5): 589610 Miranda D. Grounds, et al

2、. The干细胞移植治疗急性心肌梗死_课件干细胞移植治疗急性心肌梗死_课件干细胞移植治疗急性心肌梗死_课件ESC and ASCESCASC来自胚泡的内细胞群来源于骨髓、外周血、角膜、视网膜、脑、骨骼肌、齿髓、肝、皮肤、胃肠道粘膜层和胰腺等发育全能性，可诱导分化为机体分化较局限，部分成体干细胞（造血干细胞、骨髓间充质干细胞、神经干细胞）有一定跨系、跨胚层的“可塑性”无限的自我更新能力病理条件下才显出一定的自我更新潜能增殖能力强，便于应用增殖能力较弱，故不能完全取代胚胎干细胞细胞可不断增殖，“永生化”，移植后有形成肿瘤的可能性成瘤的可能性很小不能自体移植自体移植可避免免疫排斥有伦理问题分离和使用

3、不存在伦理问题ESC and ASCESCASC来自胚泡的内细胞群来源于骨BMC(bone marrow cell)BMC(bone marrow cell)Nature/Vol428/3 April 2019/664-8 145例HSC移植入正常或者损伤的成年小鼠心脏的实验研究，没有发现由干细胞转分化而来的心肌，并且干细胞移植组相对于假移植组心肌细胞数量没有明显的增加，为心肌修复的临床研究提供一个警示。 心脏功能上的改善可能是由于移植对左心室重塑的影响或者是产生了新生血管，而不是心肌再生。过去两年来，开展了一些使用骨髓祖细胞进行心脏修复临床试验。在目前研究中，HSC不能转化形成新的心肌对这些

4、试验的理论基础提出了质疑。 Problems of HSCNature/Vol428/3 April 2019/664HSC（CD34+）Transplatition for AMIJ Thorac Cardiovasc Surg 2019;130:1631-8 HSC（CD34+）Transplatition for A干细胞移植治疗急性心肌梗死_课件是骨髓中除造血细胞以外的中胚层来源的细胞，其细胞特性稳定，在连续传代培养和冻存后仍具有多向分化潜能。在特定的诱导条件下，骨髓间充质干细胞可以分化为间充质组织中的各类细胞，包括：骨、软骨、脂肪、肌腱、韧带等细胞。骨髓间充质干细胞（mesenchy

5、mal stem cell, MSC）是骨髓中除造血细胞以外的中胚层来源的细胞，其细胞特性稳定，在 （K.D. Bunting, R.G. Hawley .Biology of the Cell 2019,95:563578）MSC(mesenchymal stem cell) DIFFERITION （K.D. Bunting, R.G. Hawley 梗死的心脏注入富含鼠的骨髓干细胞后，40%的心肌层得到恢复。 Olic. Nature. 2019,410:701-705用人的骨髓来源的干细胞使心肌梗死鼠30%40%的心功能得到改善。 Kocher. Nat Med. 2019,7:430

6、-436 梗死的心脏注入富含鼠的骨髓干细胞后，40%的心肌层得到恢复。Current problem-evidence骨髓干细胞究竟能否分化成心肌细胞却始终有争议，目前仍无法完全证实MSC可分化为心肌细胞。 ？Current problem-evidence骨髓干New Focus-microenvironment 急性心肌梗死后局部微环境发生的一系列炎症反应，对干细胞的存活、分化、迁移等都有很大影响。New Focus-microenvironment MSC原代传代前细胞形态（100） 贴壁细胞增殖融合，铺满瓶底90% 左右，未贴壁细胞是造血干细胞及组织碎片MSC原代传代前细胞形态（100

7、） 贴壁细胞增殖融合，铺满p1（100） p4（100） p3（100） p2（100） p1（100） p4（100） p3（100） p2（流式细胞鉴定CD106 、CD90表达阳性， CD31、CD45表达阴性流式细胞鉴定CD106 、CD90表达阳性， CD31、CDDiL标记结果（200） DiL标记结果（200） AMINormal复方丹参滴丸对骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死干预作用的实验研究AMINormal复方丹参滴丸对骨髓间充质干细胞移植治疗急性Normal AMINormal ANBTNBTNORMAL AMINORMAL AMI Group左室后壁增厚，运动幅度变小

8、 CDDPMSC Group左室后壁厚度均匀，运动幅度正常AMI GroupCDDPMSC Group对AMI大鼠心脏射血分数的影响孙兰军等，中华医学临床杂志，2019，6（2）：4对AMI大鼠心脏射血分数的影响孙兰军等，中华医学临床杂志，2心肌梗死面积测定结果模型组MSCs复方丹参滴丸组心肌梗死面积测定结果模型组MSCs复方丹参滴丸组A，培养MSC用DiI（红色）和Hoechst33258（蓝色）染色的照片；B，心脏切片用Hoechst33258染色的照片，箭头显示部分移植的MSC；C，对照组心脏几乎没有MSC定位；A，培养MSC用DiI（红色）和Hoechst33258（蓝MSC移植后成活

9、和增殖 MSC移植后成活和增殖 极少量移植地细胞能表达-actinin，说明开始向心肌细胞分化，但这种分化是不完全的，因为没有横纹的出现。相对较多的细胞表达血管性血友病因子(vWF) ，说明移植的MSC能够向内皮细胞分化。极少量移植地细胞能表达-actinin，说明开始向心肌细胞CX-43染色在同一视野看到Dil标记的植入的红色荧光的MSCs和二抗FITC标记的相应绿色荧光的 CX-43阳性表达CDDP+MSC组（200）CX-43染色在同一视野看到Dil标记的植入的红色荧光的MSCX-43染色MSC组（200）CX-43染色MSC组（200）Troponin 染色CDDP+MSC组（200）

10、 在同一视野看到Dil标记的植入的红色荧光的MSCs和二抗FITC标记的相应绿色荧光的 Troponin 阳性表达，Troponin 染色CDDP+MSC组（200） 在同Troponin 染色MSCs Group Troponin 表达（200） Troponin 染色MSCs Group Troponi对心脏胶原沉积的影响 HE Picrosirius red HE Picrosirius red normalMSCs+CDDPMSCs model对心脏胶原沉积的影响 HE 各心梗组大鼠的胶原含量无显著差异。但是，MSC和CDDP+MSC移植使心肌梗死区I/III型胶原比值分别降低了77和

11、84。说明细胞移植能增加III型胶原含量，改善心肌顺应性，可能会对心功能有益。各心梗组大鼠的胶原含量无显著差异。但是，MSC和CDDP+M*Balcalin induced migration of Mscs*Balcalin induced migration o Real-time quantitative RT-PCR analysis of VEGF, SCF, SDF-1 and MCP-1 mRNA change* p 0.05, * p 0.01, compared to model. (n=6), * Real-time quantitative R*Conclusions C

12、DDP可能通过多种途径和机制干预诱导植入梗塞大鼠心肌干细胞的分化成活，并使植入细胞表达心肌特异性蛋白，说明植入细胞已分化为心肌样细胞，同时可抑制胶原沉积，改善微环境。 有望成为中医药治疗心血管疾病的一个新的发展方向，作为现代治疗方法的补充手段，为临床带来广阔的应用前景。Conclusions CDDP可能通过多种途径Is stem cell therapy for cardiac repair ready for patients? Is stem cell therapy for cardiRandomized Clinical Trials of Stem Cell Therapy for

13、 MIStudy n Cell Type /Treatment Mode of Delivery End Point P Janssens et al67BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.36BOOST60BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.0026ASTAMI100BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.05*REPAIR-AMI204BMMNCsIntracoronaryLV ejection fraction0.021Zohlnhoefer et al1

14、14G-CSFSubcutaneousInfarct size0.79STEMMI62G-CSFSubcutaneousLV systolic wall thickening1.00BMMNCs indicates bone marrow mononuclear cells; G-CSF, granulocyte colony-stimulating factor; and STEMMI, Stem Cells in Myocardial Infarction.*LV ejection fraction was higher in the control group.Circulation. 2019;114:353-358. Randomized Clinical Trials of Arrhythmias Restenosis, Accelerated Atherosclerosis, and Coronary Obstruction Abnormal Cellular DifferentiationIn addition，Safety Concerns Arrhythmias Restenosis, AcIs