发酵豆粕品质判定课件

1、发酵豆粕品质判定香红星2014.10.29致谢：本报告内容实际上汇聚了实验人员陈婧、张玲、干霞、乐山恒峰华邦品管人员、国家饲料工程中心等的心血与研究成果。本人并无实际亲自操作。在此申明并致谢！同时，很多饲料企业交流中也提供了很多值得借鉴的思路与建议，并提供过检测支持等，一并致谢！报告提纲豆粕及其发酵处理理由发酵豆粕介绍发酵豆粕菌种、工艺、生产发酵豆粕品质判定掺假分析发酵豆粕采购建议及品控量化指标发酵原料技术应用拓展豆粕豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品豆粕是棉籽粕、花生粕、菜籽粕等12种动植物油粕饲料产品中产量最大，用途最广的一种豆粕是高蛋白饲料，氨基酸组成和动物蛋白质近似，其中氨基酸比较接

2、近人体需要的比值，所以容易被消化吸收豆粕中含有丰富的钙、磷、镁、钾等无机盐，还含有铜、铁、锌、碘、钼等微量元素中国市场/行业需求总体趋势 近2年国内饲料企业应用微生物制剂及发酵原料越来越普遍，并能确认其价值；应用范围和使用量逐年递增；养殖场也接受了生物预处理饲料的技术与产品。客户需求 在乳猪饲料以发酵豆粕取代大豆浓缩蛋白、鱼粉、血浆蛋白、肠膜蛋白、豆粕方面有成熟经验；水产饲料、特种皮毛动物饲料也得到应用。 发酵豆粕解决什么问题？膨化大豆解决了什么？发酵豆粕重点解决什么？（尽量）消除抗营养因子（以抗原蛋白、脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、水苏糖、棉子糖为重点）；通过发酵尽量增加低分子肽、有机酸等含量

3、；通过菌种调配及发酵，增强诱食功能，（酸、香）；具有微生物益生功效，微生态调节功能。发酵豆粕指标衡量是一个系统工程。豆粕抗营养因子分类根据对饲料营养价值和动物生物学反应，分为以下六类：降低蛋白质消化率和利用率的因子（胰蛋白酶抑制因子、糜蛋白酶抑制因子等）；降低碳水化合物消化率因子（单宁和寡糖等）；影响矿物质利用率的因子（植酸）；影响维生素活性或增加动物维生素需求量的因子（抗维生素A、维生素D、维生素E和维生素B12等因子）；刺激免疫体系的因子（抗原蛋白）以及其它一些抗营养因子（致甲状腺肿因子、皂甙、异黄酮和生氰糖甙等）；饲料中具有毒素作用的因子（植物凝集素） 豆粕抗营养因子的热敏感性抗原蛋白（

4、7s，11s亚基为代表）、胰蛋白酶抑制因子、糜蛋白酶抑制因子、凝集素、脲酶、致甲状腺肿因子及抗维生素因子具有对湿热敏感；皂甙、单宁、异黄酮、寡糖、致过敏反应蛋白及植酸等对热较稳定；热处理对抗原蛋白、蛋白酶抑制因子、凝集素、脲酶等热敏性抗营养因子有很好的钝化效果。但是对豆粕蛋白溶解度的影响不容忽视！ 一步步认识发酵豆粕？理论层面的把握（工艺设计、科学检测方法的建立）；技术层面的把握（基础性现场控制与一级品控）；品控层面的把握（把关性二级品控与法规遵守）；采购层面的把握（保真-性价比）核心问题：掌握豆粕与发酵豆粕的关键差别点，才知道怎么去把握。粗蛋白、水分、灰分、氨基酸等不能让你辨识优劣。发酵豆粕

5、之典型问题品质不稳定；（蛋白溶解度、粗蛋白、电泳、抗原含量、寡糖、VBN、灰分存在变数）小肽（酸溶蛋白）、有机酸含量偏低；收率偏高（收率与寡糖彻底消除的基本算法）；烘干设备选型不当，造成成本偏高；菌种组合不合理、培养活化环节复杂；工艺流程设计及发酵形式存在问题；品控问题（检测项目不齐全检验方法简单模仿，基本原理不清楚，被牵着鼻子走，品管检测忌照搬）。形形色色的微生物类群微生物简介微生物作为生物的一大类 ，具有其本身的特点及其独特的生物多样性，可以简要概括成以下几句话：个体小、结构简、胃口大、食谱广、繁殖快、易培养、数量大、分布广、种类多、级界宽、变异易、抗性强、休眠长、起源早、发现晚。微生物强

6、大的繁殖性能微生物繁殖速度很快，例如一头500kg的食用公牛，24小时生产 0.5kg蛋白质，而同样重量的酵母菌，以糖液（如糖蜜）和氨水为原料，24小时可以生产 50T优质蛋白质。微生物尤其以二裂法繁殖的细菌具有惊人的繁殖速率。如大肠杆菌 37时世代时间为 18分钟，每 24小时可分裂 80 次，每 24小时增殖数为 1.2 x 10 24 个。枯草芽孢杆菌30时的时代时间为 31分钟，每 24小时可分裂 46次，增殖数为 7.0 x 10 13 个。 微生物极强的耐受力 现在已从近于 100条件下的温泉中分离到了高温芽孢杆菌，并观察到在 105时还能生长。甚至有报导，有人从太平洋 25000

7、m深处分离到的高温菌，在 265atm和 250下，经过 40分钟的培养，细菌数量增加 1倍，几小时后增加了 100倍。甚至升温到 300时仍在生长。 微生物在不良条件下很容易进入休眠状态，某些种类甚至会形成特殊的休眠构造，如芽孢、分生孢子、孢囊等。有些芽孢在休眠了几百年，甚至上千年之后仍有活力。甚至报导过 3 000 4 000年前埃及金字塔中的木乃尹上至今仍有活的病原菌。 惊人的微生物分布 自然界中微生物存在的数量往往超出一般人们的预料。土壤中细菌可达几亿个/g，放线菌孢子可达几千万个/g。人体肠道中菌体总数可达 100万亿左右。新鲜叶子表面可附生 100 多万个/g 微生物。全世界海洋中

8、微生物的总重量估计达 280亿吨。 从这些数据资料可见微生物在自然界中数量之巨。实际上我们生活在一个充满着微生物的环境中。 微生物与饲料工业 有益： 代谢产物的直接利用与延伸（发酵单体氨基酸、发酵类抗生素、维生素、有机酸、生物酶、多糖、色素、生物碱、酶工程衍生产品、饲料原料发酵等）。 微生物的直接利用（微生物制剂、疫苗、饲料及原料发酵等）。 有害： 饲料或原料的病原菌感染、发霉变质、动物疾病、生产环境污染等。 微生物微生物在饲料工业中的角色新功能？微生态 制剂原料体外预消化ERG、GSH、 SOD等活性肽、防御素、细菌素等饲用酶 制剂饲用维生素、色素等氨基酸、有机酸、核酸等原料发酵的微生物常见

9、类群 乳酸菌类:非分类学概念。乳酸菌是一类能利用可发酵性糖为原料，并能产生大量乳酸的细菌的通称。乳酸菌 1小时可分解其体重1000至10000倍乳糖。酵母菌类：非分类学概念，在偏酸性且含糖较多的环境中生长的单细胞真核微生物。例如面包酵母、海洋红酵母等。芽孢杆菌类：能够产生芽孢的细菌。（芽孢则是某些细菌在其生长发育后期,可在细胞内形成的一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量低、抗逆性强的休眠构造) 真菌类：非分类学概念。通常指菌丝体发达而又不产生大型子实体的真菌。例如霉菌类，假丝酵母等。发酵菌种抗逆性分析芽孢杆菌：形成芽孢后储藏、耐温、耐压等稳定性非常好。枯草、地衣、凝结、巨大、侧孢等。乳酸菌类：微生物

10、发酵首选菌种。抗逆性和储藏稳定性是最大阻碍。代谢产物的利用。例如：有机酸、抗菌素等。酵母菌类：耐高渗，耐温差。发酵改善适口性，促消化，代谢产物营养丰富。微生物营养的特殊性微生物：与环境进行物质、能量、基因的交换。最高效，适应性最强。植物：光合作用与根系吸收。动物：主动摄食，体内转化。结论：生物级别越高，其营养需求及转化越低效。其生存力更多依赖于智慧、体能。构成食物链与生态系统。微生物生理代谢阶段及特点微生物营养代谢分析微生物的代谢产物名目繁多，从来源上考虑，可区分为初级代谢产物，次级代谢产物和转化产物，三者之间的关系如图所示：微生物初级代谢产物（I）（氨基酸、核苷酸、植物多糖、维生素、有机酸等

11、）次级代谢物（）（抗生素、菌素、植物碱等）菌体、诱导型酶（）外源物质转化产物（）外源物质（甾体、烷烃、芳烃、杂化合物）发酵产品设计要求微生物选择符合法规，生物安全性保障；应用的有效性必须保证；生产实现的难易程度，工艺设计及设备；合理的利润保证，市场接受程度；知识产权的保护问题；需要饲料行业共同推进与认可。发酵用菌种及原理分解蛋白（抗原蛋白）的芽孢杆菌类分解寡糖的乳酸菌（正型乳酸发酵为主） C6H12O6+2ADP 2CH3CHOHCOOH+2ATP C6H12O6+ADP CH3CHOHCOOH+C2H5OH+CO2+ATP脱除单分子糖及增加适口性的酵母菌三者协同作用才可以完成发酵使命，并保护

12、蛋白质很少被降解。 乳酸菌发酵类型从生化机制来看，乳酸发酵分为两大类型：若发酵产物中只有乳酸的（达到80以上），称为正型乳酸发酵，如乳酸链球菌（Streptococcus lactis）、乳酪链球菌（Streptococcus cremoris）、干酪乳杆菌（Lactobacillus easei）等。若发酵产物中除乳酸之外还有乙酸、乙醇、CO2、H2的，称为异型乳酸发酵。如一些明串珠菌（Leuconostoc）、乳酸杆菌（Lactobacillus）。 发酵菌种产生的有机酸、维生素含量分析小 结掌握微生物生理特性，驾驭它为我们服务；所开发的品种应符合法规，生物安全第一；产品作用应该可以量化，

13、动物营养效果明确；在动保方面，微生物产品应该有更加广阔的应用，例如母猪泌乳、便秘方面、乳猪肠道驯化、治疗腹泻、环境改良；原料（三大营养物）的生物预消化，结构脂肪（pop）构建、人工乳仿生、营养型抗菌肽等。发酵豆粕工艺和生产图示流程关键设备原料前处理及设备发酵装置及设备讨论混合设备菌种培养设施及配套烘干物料的冷却粉碎干燥设备烘干设备是最大制约因素。搅拌式流化床、振动式流化床、管束式烘干机、滚筒干燥机、圆盘干燥机、网带式烘干机、气流干燥机等。热源：木柴、生物质颗粒、燃煤、蒸汽、电加热辅助、燃油、天然气等。成本分析和烘干设备选择原则（阐述）。生产成本构成原材料采购损耗菌种烘干水电能耗、包装、车间转运

14、运输管理、折旧、工资、税务等混合设备混合接种自动接种发酵料槽发酵料槽流化床烘干圆盘干燥管束干燥全自动料槽中纺全自动生产线示范工厂干燥及打包系统发酵菌种和工艺控制的实现通过菌种不同组合及数量控制，可以从小肽含量、总酸、有机酸比例、总酸度、不良糖消除率、收率、蛋白含量等实现精确控制。菌种与发酵条件、设备的有机组合，实现可控、稳定的品质。豆粕（2013） 厂家水份%粗蛋白%PH值粗灰分%PS%中纺12.29 46.70 6.52 6.25 75.67 中纺12.06 46.05 6.36 6.23 71.60 中纺11.75 46.25 6.37 6.17 79.46 中纺11.14 46.07 6

15、.42 6.34 77.30 中纺11.49 46.31 6.38 6.17 78.23 中纺11.58 46.07 6.30 6.24 77.79 中纺12.72 46.31 6.37 6.18 77.20 中纺12.52 46.30 6.43 6.35 78.42 邦基正大11.33 46.92 6.35 6.47 74.64 邦基正大11.38 47.32 6.30 6.26 72.06 邦基正大11.59 46.55 6.25 6.14 71.45 邦基正大11.71 46.52 6.31 6.40 74.25 邦基正大12.03 46.39 6.25 6.46 73.08 邦基正大1

16、1.79 47.03 6.28 5.80 71.57 邦基正大12.35 46.18 6.26 6.24 73.30 新涪12.16 46.51 6.23 6.32 80.03 新涪12.20 46.14 6.26 6.15 73.15 新涪12.42 46.05 6.36 6.18 70.86 新涪12.01 46.94 6.34 6.13 71.24 新涪11.88 46.51 6.35 6.09 73.86 新涪11.86 46.52 6.45 6.05 78.53 新涪12.17 46.17 6.45 6.14 74.46 丰苑12.03 45.58 6.51 5.85 75.34 丰

17、苑11.73 46.21 6.47 6.11 76.24 丰苑11.43 46.26 6.44 6.14 75.38 丰苑13.53 43.64 6.53 5.83 75.44 丰苑11.76 46.78 6.48 6.12 70.86 丰苑11.74 46.31 6.45 6.17 80.26 丰苑11.60 47.47 6.53 6.13 75.92 原料指标波动，带来发酵结果变动 发酵豆粕水分%粗蛋白%小肽（cp）%乳酸%pH值灰分%PS%9.84 50.14 12.09 3.15 4.86 6.85 73.31 9.47 51.42 12.41 3.15 4.82 6.95 76.66

18、 9.25 50.13 12.05 3.22 4.80 6.60 76.00 8.38 50.49 12.60 3.24 4.80 6.70 74.21 8.77 50.06 12.68 3.23 4.85 6.79 76.65 8.81 50.80 13.56 3.35 4.81 6.94 76.50 9.04 50.23 12.64 3.21 4.82 6.69 75.27 7.85 50.39 13.10 3.23 4.81 6.56 70.22 7.68 50.79 12.96 3.03 4.94 6.58 75.80 9.22 50.02 13.17 3.06 4.95 6.74 7

19、8.35 8.25 50.14 13.66 3.19 4.92 6.68 77.68 8.70 50.03 13.53 3.22 4.92 6.88 75.33 7.76 50.41 12.40 3.38 4.79 6.57 73.24 8.24 51.79 12.28 3.32 4.79 6.61 70.50 9.06 51.07 12.57 3.03 4.96 6.88 72.41 8.91 50.46 13.28 3.22 4.83 6.70 74.55 8.25 50.14 13.66 3.19 4.92 6.68 77.68 8.70 50.03 13.53 3.22 4.86 6.

20、88 72.12 7.63 50.37 16.66 3.30 4.77 6.35 71.49 8.10 50.37 16.93 3.39 4.79 6.39 70.97 7.94 50.92 17.30 3.28 4.88 6.27 74.29 8.90 50.53 17.55 3.30 4.83 6.37 75.16 8.30 50.38 17.76 3.33 4.82 6.49 79.00 9.29 50.54 17.06 3.14 4.90 6.52 70.64 9.11 50.48 17.47 3.24 4.82 6.28 71.55 9.42 50.54 17.08 3.14 4.8

21、7 6.39 72.54 9.57 50.51 17.22 3.29 4.87 6.48 72.34 国内某厂产品批次化验结果实例发酵豆粕铬含量检测结果检测机关四川出入境检验检疫局 检验检疫技术中心检测时间2012年9月20日样品名称检测项目检测 方法结果数据单位检测低限XHX菌种铬DB53/T288-20091.9mg/kg0.1豆粕铬DB53/T288-20090.4mg/kg0.1发酵豆粕1铬DB53/T288-20090.2mg/kg0.1发酵豆粕2铬DB53/T288-20090.3mg/kg0.1发酵豆粕沙门氏菌检测结果检测机构国家粮食局成都粮油食品饲料质量监督检验测试中心检测时间

22、2012年9月21日样品名称检测项目检验依据检测结果发酵豆粕1沙门氏菌GB/T13091-2002未检出发酵豆粕2沙门氏菌GB/T13091-2002未检出 赖氨酸 Lysine 3.48%异亮氨酸 Lsoleucine 2.36% 蛋氨酸 Methionine 0.54%苯丙氨酸 Phenylalanine 2.80% 胱氨酸 Cystine 0.81% 色氨酸 Tryptophan 0.81% 苏氨酸 Threonine 2.19% 缬氨酸 Valine 2.46% 亮氨酸 Leucine 4.15% 组氨酸 Histidine 1.36% 精氨酸 Arginine 3.90% 甘氨酸 G

23、lycine 2.51% 丙氨酸 Alanine 2.46% 脯氨酸 Proline 1.59% 天门冬氨酸 Asparagic 6.74% 谷氨酸 Glutamic 9.80% 丝氨酸 Serine 2.76% 酪氨酸 Tyrosine 1.80%发酵豆粕氨基酸含量分析发酵均匀度的判定分析（模拟添加实验）发酵池不同位置取样检测样品名称10水份CP小肽%10水份总酸PH值VBN14050701 28h 中上49.76 10.45 2.60 5.06 70.89 中中50.21 9.88 2.46 5.11 40.91 中下50.98 9.83 2.53 5.15 48.62 边上51.00 1

24、0.31 2.45 5.07 43.46 边中50.41 10.82 2.44 5.04 53.67 边下50.80 10.36 2.69 5.07 43.41 52h中上51.94 12.24 2.96 5.00 90.94 中中50.69 10.96 2.73 5.02 50.23 中下50.89 11.20 2.60 5.04 72.70 边上51.07 12.92 3.15 4.90 76.37 边中51.24 12.13 2.83 5.02 76.92 76h中上51.79 14.50 3.02 4.98 89.77 中中50.71 15.26 3.08 4.92 57.14 中下5

25、0.83 13.97 3.10 4.91 63.89 边上51.10 12.39 3.30 4.84 83.65 边中50.95 14.18 3.03 4.99 55.20 边下50.87 13.36 3.23 4.91 56.75 14050801 28h 中上49.85 10.10 2.46 5.04 76.74 中中50.01 9.37 2.58 5.04 90.67 中下49.99 9.62 2.53 5.08 92.33 边上49.55 9.55 2.21 5.15 50.82 边中50.07 10.49 2.13 5.33 50.59 边下50.61 9.50 2.05 5.38

26、60.20 52h中上50.72 12.29 3.01 4.94 59.49 中中50.87 12.54 2.79 5.03 50.43 中下50.93 11.60 2.59 5.11 66.64 边上49.29 9.65 2.12 5.28 52.82 边中49.50 12.46 2.67 5.07 49.15 边下50.56 13.38 2.79 5.05 70.15 76h中上51.57 13.88 3.07 4.99 70.25 中中50.82 12.01 3.12 4.88 87.01 中下51.55 13.03 2.80 5.00 62.65 边上50.84 11.86 2.97

27、4.99 50.24 边中50.89 12.22 2.98 4.99 56.60 边下51.04 13.84 3.45 4.82 69.90 14050901 28h 中上49.07 9.65 2.59 5.16 99.97 中中50.94 9.82 2.22 5.32 43.02 中下49.53 9.86 2.56 5.16 43.11 边上50.29 9.37 2.17 5.20 79.79 边中50.39 9.32 2.75 5.10 92.69 边下50.48 8.51 2.46 5.17 46.10 52h中上50.69 12.81 2.75 5.02 87.99 中中50.59 1

28、2.51 2.74 5.05 79.12 中下50.76 12.12 2.62 5.02 74.01 边上50.78 14.86 2.91 5.00 79.43 边中50.24 11.98 2.85 5.01 59.25 边下50.77 11.56 3.24 4.74 53.03 76h中上50.48 15.32 2.73 5.00 79.85 中中50.45 15.79 2.98 4.99 60.29 中下50.88 14.62 2.95 4.98 89.40 边上50.35 13.64 3.02 4.94 53.08 边中50.15 12.95 3.16 4.96 60.79 边下50.9

29、1 13.33 3.04 4.98 89.19 发酵豆粕品质判定关于发酵指标的讨论蛋白溶解度影响抗原蛋白检测的猫腻收率、寡糖脱除、蛋白水平VBN（正确认识与评价）发酵豆粕同类产品的差异性蛋白溶解度（ps）检测蛋白溶解度的意义能使蛋白溶解度改变的因素 1、酸含量？ 2、pH值？ 3、压力？ 4、烘干温度？（干、湿热）豆粕和发酵豆粕蛋白溶解度检测检测蛋白溶解度的意义高温能破坏大豆中所含的数种抗营养物质，但也会使还原性碳水化合物，如葡萄糖与赖氨酸的epsi1on游离氨基酸起作用，即美拉德反应（Mail1ard Reaction）。其结果使赖氨酸分子不能被利用，蛋白质分子中的其它氨基酸也受热过度的影响

30、，因而使蛋白质的消化率降低。Araba和Dale在1990年发表的文章中的结论是：对于小鸡，蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，蛋白溶解度低于65%几乎可以肯定豆粕加热过度。豆粕加热过度对氨基酸消化率影响豆粕加热过度对氨基酸浓度和消化率的影响（%）121高压时间（分）消化率（%）赖氨酸胱氨酸蛋氨酸苏氨酸09182868420786986864069628380分析值（%）03.270.70.711.89202.950.660.711.92402.760.630.711.87豆粕热处理分析热处理时，必须保证热处理的适宜强度；若加热不足，则抗营养因子破坏不够；若加热过度，蛋白溶解度过低（

31、低于70）则氨基酸(如lys)利用率下降，会降低蛋白质的生物学效率（过熟与美拉德反应）；实际生产中以脲酶活性可判断胰蛋白因子的钝化程度反应加热程度；蛋白溶解度可作为判断大豆或豆粕加热过度的指标 （ps=70-85）。膨化大豆主要就是热作用（高压爆破）的结果。发酵后含酸量与蛋白溶解度的关系说明：1、左侧数据为2013年6月到7月生产取样。2、因根据不同用户的需要，产品的乳酸值不同。3、按照乳酸递增的形式列出左侧表格。结论： 通过以上数据可说明，乳酸和pH值的不同，不影响蛋白溶解度的测定。产品编号总酸%pH值成品 蛋白溶解度%原料 蛋白溶解度%1306070362.165.7285.2287.22

32、1306130392.425.4885.9887.221306160412.475.5185.3387.221307190163.034.8378.3578.931307200173.014.978.1578.931307250203.664.8378.1678.931307110063.844.8180.0381.441307120073.884.8180.9281.441307160133.874.8179.2880.481307300253.924.7879.8280.481307040034.094.7479.8781.44留意酸含量与pH的关系！某些厂家产品酸含量不高但是pH很低！蛋

33、白溶解度生产批次乳酸对蛋白溶解度检测的影响实验实验目的：豆粕经发酵后产生乳酸，其pH值会随着乳酸含量的增加而下降，国内发酵豆粕产品的pH值一般在5.84.3之间，但其蛋白溶解度相差很大（80%30%不等）。检测豆粕的蛋白溶解度主要是用0.2%KOH处理后，测其碱溶蛋白含量。此实验主要为在豆粕中人为的加入不同含量的乳酸，观察乳酸对蛋白溶解度检测结果的影响。实验时间：2013年6月19日实验用材料： 豆粕：中纺粮油豆粕， 水分11.94%、粗蛋白46.67%、pH值6.40、 灰分6.26%、蛋白溶解度76.75% 乳酸：成都科龙化工试剂厂，含量85.0%90.0%实验方法及结果方法： 1、做蛋白

34、溶度检测之前先确定乳酸的添加量，使 豆粕的pH值 呈递减。 2、秤取粉全过60目豆粕1.5g（精确至0.0002），加入75ml的0.2%KOH后，按百分比加入乳酸（下表中添加乳酸含量为，乳酸占豆粕的百分比），磁力搅拌20min，4000转/分离心10min，过滤后去15ml滤液按粗蛋白测定方法测定，得蛋白溶解度值。 3、实验过程pH值记录和测定结果如下表；编号豆粕中添加 乳酸的含量加乳酸后豆粕pH值0.2%KOH处理后滤液pH值蛋白溶解度00%6.4012.3976.75%11.1%5.7012.2976.29%21.7%5.4712.2476.22%32.2%5.3012.2176.00%

35、42.7%5.1912.1475.87%53.5%4.9512.0574.49%64.3%4.9412.0073.94%75.5%4.5511.8973.28%87.1%4.3411.2670.48%处理方法不同对蛋白溶解度的影响高温烘干名 称ps%高温烘干的时间1h2h3h4h17h豆 粕85.3271.9959.3249.5446.2715.85发酵豆粕79.2862.0543.4238.8627.7918.91名 称ps%相同水分高压时间不同15min30min60min豆 粕70.3168.0465.7747.99发酵豆粕77.0854.3856.1848.16名 称ps%不同水分的原

36、料在相同时间内高压10%20%30%40%豆 粕70.3168.045851.4538.46发酵豆粕77.0864.1857.9347.2357.45高压名 称ps%将物料调至 不同水分后晾干30%40%豆 粕47.9948.1248.47发酵豆粕47.2351.853.42名 称ps%发酵 时间70烘干晾干豆 粕77.693天80.8481.15低ps豆粕50.1575.5176.38水分对PS的作用发酵对PS的作用发酵豆粕的过烘干与蛋白溶解度不同蛋白溶解度的TLC不同蛋白溶解度的电泳图谱分析发酵豆粕蛋白溶解度的评估实验一、实验目的：找出正确评价发酵豆粕的PS的方法二、实验时间：2014/8

37、/18至2014/9/4三、实验地点：乐山恒峰华邦生物科技有限公司四、实验所用样品数据 注：PS%为碱溶性蛋白，小肽占总蛋白的百分数含量五、实验方案 称取1g样品，分别溶于50ml或100ml，浓度为0.2%、0.15%、0.1%、0.05%的KOH溶液中，以170 r/min的转速下振荡20min或16h，2700 r/min的速度离心10min，吸取20ml上清液消化，定氮，得值P。 KOH蛋白溶解度% = P / CP样品水分%CP%小肽%PS%PH乳酸%灰分%YY11.5848.919.2474.954.942.986.97STF11.0950.1214.1177.554.923.10

38、6.45六、实验结果序列号KOH浓度料液比处理时间KOH蛋白溶解度%YYYY平均值STFSTF平均值10.20%1:5020min71.5673.22 79.7576.34 75.1876.3272.9372.9620.15%49.5048.02 59.5059.49 48.3160.2446.2558.7430.10%22.6921.98 48.2447.08 21.6346.7321.6146.2740.05%15.4815.61 29.5928.08 16.4427.0814.9027.5750.20%1:5016h83.7784.09 86.3585.95 83.9786.8184.5

39、484.760.15%73.13 69.90 77.8375.47 66.875.8169.7872.7770.10%30.8934.33 62.2762.10 31.9262.2940.18 61.7380.05%14.90 16.12 31.5835.78 17.01 36.1516.44 39.690.20%1:10020min75.0874.06 77.7174.56 73.2872.7373.8273.24100.15%67.8669.29 73.470.61 69.9968.2870.0170.15110.10%58.5657.20 65.8461.75 54.4759.7458.

40、5859.68120.05%20.5520.22 48.0244.10 19.5340.1620.5944.11130.20%1:10016h88.3988.41 86.4387.26 89.2987.0987.5588.27140.15%77.0878.16 85.5186.10 78.1485.4779.2587.31150.10%73.4273.88 77.4175.72 74.0775.2874.1674.46160.05%32.9628.50 60.2859.41 25.7860.6526.7657.30曲线图如下七、正交实验结果八、结论 改良后发酵豆粕蛋白溶解度检测方法更改为： K

41、OH浓度0.05%，料液比1:100，处理时间为2h。序号KOH（g/mL)料液比(g:mL)时间(h)PS（YY）PS（STF）10.071:1001h47.95 59.15 20.071:1502h65.38 69.87 30.071:2003h83.32 79.46 40.051:1002h30.52 55.99 50.051:1503h52.71 66.25 60.051:2001h59.75 69.09 70.031:1003h20.16 43.43 80.031:1501h20.84 48.90 90.031:2002h42.73 66.10 此方法检测同类产品数据样 品PS%PS

42、%（新方法）豆粕76.5147.41YY74.9530.52BZD68.1920.32LB62.0739.28QN65.1122.03JTD77.0223.73HS77.4848.24STF77.5555.99Tris-HCl蛋白溶解度实验一、实验目的：比较不同厂家发酵豆粕在Tris-HCl中的蛋白含量二、实验时间：2014/8/18至2014/8/24三、实验地点：乐山恒峰华邦生物科技有限公司四、实验所用样品数据 注：PS%为碱溶性蛋白，小肽占总蛋白的百分数含量五、Tris-HCl的配置方法 称取Tris 3.64g于1000ml大烧杯中，加800ml蒸馏水溶解，吸取0.7ml-巯基乙醇，用

43、浓盐酸调节PH至8.0，将大烧杯中的液体倒入1000ml容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml，摇匀备用。样品水分%CP%小肽%PS%PH乳酸%灰分%YY11.5848.919.2474.954.942.986.97STF11.0950.1214.1177.554.923.106.45六、实验步骤：1、取1g样品，溶于100ml Tris-HCl溶液中，震荡16h，吸取20ml上清液消化、定氮，得值为P2、 Tris-HCl蛋白溶解度 = P / CP七、实验结果Tris-HCl蛋白溶解度(%) 样品YYSTF176.44102.04274.9397.69378.08100.9平均值76.4810

44、0.21电泳检测的参考价值（认识sds-凝胶电泳的实质）胶的配制方法、电压调节差异；样品浸提时间、浸提液ph、料液比、浸提次数；浸提后ph调节的差异性；物料酸度及缓冲性影响；物料蛋白溶解度的影响（人工模拟后的数据）。抗原蛋白提出来了？提完全了？遮蔽了？电泳抽提蛋白试验（有效提取量的测定结果）样品总酸pH小肽（占蛋白）水分粗蛋白YY2.914.744.16%10.75%49.93%X13.874.8116.55%9.86%51.71%X22.555.8018.09%9.08%51.86%豆粕0.576.802.34%11.89%46.13%方法：1、标准秤取定量样品，用蛋白抽提液（pH8.0）抽

45、提1h后，8000转离心15min，取等量上清液，测pH值。2、用0.3mol/L NaOH将其它样品的pH值调到与豆粕相同，定容后，取一定溶液消化，测粗蛋白cp1。3、取定量的液体用蛋白抽提液（未调pH）将各样品的pH调与豆粕pH相同后，再抽提1h后，以方法2测粗蛋白cp2。试验结果：样品粗蛋白cp1YY10.69X123.67X243.21豆粕31.94抽提后抽提液中的粗蛋白含量（不同pH抽提的表现）如下：样品粗蛋白cp2YY14.29X133.90X245.10豆粕32.64多因素影响抗原蛋白提取率实验电泳方法抗原蛋白的提取 粉碎待测样品，过80目筛，分析天平精确称量1.000g，用Tr

46、is-HCl（pH8.0）浸泡，料水比为1:20，摇床中160rpm、22震荡抽提1h，8000rpm离心15min。取上清液保存。 蛋白溶解度对抗原蛋白提取率的影响标准秤取2.5g样品，用50ml蛋白抽提液（pH8.0）抽提1h后，8000转离心15min，取上清液25ml，消化后测得抽提液中粗蛋白含量。 样品pH蛋白溶解度样品pH蛋白溶解度豆粕06.5775.12%发酵豆粕04.9677%豆粕16.5768.04%发酵豆粕14.9664.18%豆粕26.5758%发酵豆粕24.9650.07%样品粗蛋白%样品粗蛋白%豆粕014.15发酵豆粕016.14豆粕18.63发酵豆粕19.79豆粕2

47、7.42发酵豆粕28.67实验结果蛋白溶解度%提取液中粗蛋白%pH值1、 标准秤取1.5g样品，用30ml蛋白抽提液（pH8.0）侵泡10min后，记录此时溶液pH值（此样品编号pH-0）。用6mol/L HCl/NaOH将溶解pH值调至8.0（pH-1）、5.0（pH-2）、4.0（pH-3）、3.5（pH-4）。2、 抽提1h后，记录溶液中pH值。将其定容50ml，8000转离心15min，取上清液25ml测粗蛋白。 pH值对抗原蛋白提取率的影响样品pH蛋白溶解度发酵豆粕04.9677%样品粗蛋白%pH-0（5.5）16.02pH-1（8.0）44.86pH-2（5.01）15.73pH-

48、3 （4.1）14.82pH-4（3.51）14.37提取时间对抗原蛋白提取率的影响1、 标准秤取2.5g样品，用50ml蛋白抽提液（pH8.0）抽提1h后，8000转离心15min，取上清液25ml。 2、 此实验秤取4份样品，编号和提取时间分别为： h-1 0.5h h-0 1.0h h-2 1.5h h-3 2.0h样品pH蛋白溶解度发酵豆粕04.9677%样品粗蛋白%h-115.03h-015.93h-215.91h-315.941、标准秤取2g样品，用40ml蛋白抽提液（pH8.0）抽提1h。 2、过滤，用蒸馏水洗涤定容50ml，取25ml测蛋白。编号n-0。3、将沉淀用40ml蛋白

49、抽提液（pH8.0）洗到烧杯中，在此抽提1h，过滤定容，编号为n-1，反复以上步骤，编号和抽提次数为： n-2 两遍、n-3 三遍、n-4 四遍多次抽提检测提取抗原蛋白的完整性样品pH蛋白溶解度发酵豆粕04.9677%样品粗蛋白%n-015.83n-113.46n-212.08n-310.79电泳样品抽提次数检测结果相同电泳抽提液下的不同pH表现电泳直抽与调节pH调pH：样品抽提1h，调节pH至8.0再抽提1h。直抽：直接抽提1h。 抽提液为正常标定缓冲体系。不同厂家电泳直抽与调节pH豆粕直接电泳也可以“没有”抗原好无奈！ 豆粕也可以跑不出电泳带哦。Elisa定量检测的探讨(国家饲料工程技术研

50、究中心检测技术)Discussions about ElisaElisa定量检测原理。抗原-抗体-抗抗体酶复合物，显色与抗原含量负相关。方法学本身的科学性没有问题。Elisa具有单一样品的相对准确性，但是缺乏不同样品检测结果的绝对准确性。不可忽视的蛋白溶解度和酸含量及酸度关系。高科技检测手段成为某些厂家忽悠者的王牌。人为制造低抗原发酵豆粕后，如何平衡与动物营养的关系？低抗原含量不等于高品质。国家饲料工程技术研究中心的elisa检测介绍资料Introduction of Elisa method from Longkefangzhou ps和pH对抗原提取的影响（elisa）1、elisa提取液

51、配方方法：0.1g样品，加30ml提取液，37提取16h试剂名称1L液体Tris6.06gHcl2.43ml-巯基乙醇0.7ml样品处理编 号水分粗蛋白小肽（cp）乳酸pHPS1 源耀10.7549.934.132.914.6754.632 实验1051.0921.041.945.480.353 高品质9.8851.3220.754.094.8079.876 发酵豆粕8.6951.0217.593.114.9779.4710 豆粕11.8946.2376.92编 号处 理 方 法数 据6号样品处理4 成品100g+10ml乙酸晾干pH值4.125 成品100g+35ml乙酸晾干pH值3.797

52、 发酵豆粕PS=62.948发酵豆粕PS=47.949发酵豆粕调至40%水分，125度高压60minPS=38.4110号样品处理11 豆粕125度高压40minPS=58.0912 豆粕PS=49.8213 豆粕调至40%水分，125度高压60minPS=33.206号样品处理14处理成品8号 5g+0.5ml乙酸pH=4.1215处理豆粕12号 5g+0.6ml乙酸pH+4.102、实验用样品编号名 称提取液中 粗蛋白%大豆球蛋白mg/g-伴大豆球蛋白mg/g抗原蛋白含量%1源耀 PS=54.63、pH=4.677.082实验 PS=80.35、pH=5.435.243高品质 PS=79.

53、87、pH=4.8034.2728.4838.116.664成品 PS=79.47、pH=4.1230.2925.1726.635.185成品 PS=79.47、pH=3.7917.946.337.181.356发酵豆粕 PS=79.47、pH=4.9732.5884.7273.9515.877发酵豆粕 PS=62.94、pH=4.9729.354.376.291.078发酵豆粕 PS=47.94、pH=4.9725.251.344.840.629发酵豆粕 PS=38.41、pH=4.9716.622.65.080.7710豆粕 PS=76.9223.82174.98213.2838.8311

54、豆粕 PS=58.0922.4244.9992.7413.7712豆粕 PS=49.8216.8832.8452.528.5413豆粕 PS=33.214.041.655.750.7414处理成品 PS=47.94、pH=4.1223.7115处理豆粕 PS=49.82、pH=4.1015.06对抗原蛋白的再认识大豆蛋白的变应原性（即抗原）是由其蛋白质结构引起的。这些蛋白质包括Kunitz胰蛋白酶抑制剂和3种球蛋白（2S、7S、11S）。尽管特定的大豆变应原难以鉴定，但经过充分热处理后，大豆制品通常被认为仅有低变应原性，因为大豆的大部分蛋白质成分免疫活性已被热处理所破坏。（引自植物蛋白工艺学，

55、江连洲）。从大豆蛋白质的分级组分分析，7S、11S组分分别占大豆蛋白42%、31%，合计超过70%，按蛋白含量计约30%。若7S、11S都被降解，亦即其可溶蛋白很高，采用三氯乙酸法（即小肽测定）时，结果应大于30%。反观市面的发酵豆粕产品，小肽值远不及此，并且电泳结果好的产品往往其小肽结果更低，这不能不说是一大矛盾。因此我们认为7S、11S降解之说部分不成立。 虽然大豆蛋白中7S、11S球蛋白一、二级结构没有改变，但在发酵生产过程中，因微生物、消化酶以及热处理的共同作用，使其空间三、四级结构发生改变。从而导致原来的抗原位点发生改变，大豆蛋白的变应原性因此大幅降低。 抗原蛋白的再认识从大豆蛋白的

56、结构特性分析，单纯通过固体发酵的方式使7S、11S球蛋白降解为小分子多肽是非常困难的。反过来推断：假如7S、11S蛋白真的被降解，其在SDS_PAGE电泳时小分子区域应显示为深色，而不是如自上而下的无染色。抗原蛋白的再认识在现有技术条件下，用SDS电泳方法无法判定发酵豆粕产品的抗原多寡，也不能判定其抗原钝化程度，更不能用作产品优劣的决断。为了分辨产品质量好坏，必须用多个指标综合判定。 包括：产品感官、常规指标、发酵指标，同时参考电泳。必要时，还必须参考动物实验的结果。电泳结果分析可以得到很多有价值的参考信息！大分子蛋白降解程度的了解。因为电泳测定原理决定了它无法感知蛋白是否变性、而是依据蛋白分

57、子量不同做出分离而已。淀粉的糊化也是同样道理，大分子没有被降解只是带来空间构象的改变，这种变化和水分子活度密切相关。它的变构需要水分子氢键的参与。这种熟化水分差异同样带来了动物体消化利用率的差异。爆米花和玉米饼子都是熟的玉米。炒面和馒头都是熟的面粉。炒黄豆和豆豉都是熟的豆子。这就是水分子的威力。115高压湿热对寡糖脱除与检测的影响实验方法一： 1、取XHX发酵豆粕、豆粕、LB、YY、SLY、RH、STB、PLB、BC、ZH、JTD、HMLT、SLTB、BLF14个样品（自然水分）。 2、精确称量5g样品与锥形瓶中，每个样品称取3份。 第一份正常提取寡糖； 第二份115高压5min后冷却提取寡糖

58、； 第三份115高压10min后冷却提取寡糖。实验结果 说明：1.每个图片中都有空白样，即实验用豆粕； 2.豆粕寡糖显色位点明显，分子量由上至下逐增； 3.通过观察实验样的寡糖显色位点，与空白样相比较，来判断寡糖消除情况。120高压、高湿热对发酵豆粕的影响实验方法二：1、取XHX发酵豆粕为实验样，调节水分为18%。2、精确称量5g样品与锥形瓶中，样品称取4份。 第一份正常提取寡糖； 第二份120高压15min后冷却提取寡糖； 第三份120高压30min后冷却提取寡糖。 第四份120高压45min后冷却提取寡糖。实验结果实验结论： 115高压5min、10min和120高压15min、30min

59、、45min，对本实验所用样品的寡糖结果无明显影响。TLC：可以跑出四个糖展层液的设计发酵豆粕VBN正确认识实验目的： 发酵过程中哪些因素会使得VBN检测值增高。实验时间：2014年4月1日实验方法： 在不同菌种配比的情况下，发酵时间从1天到7天、14天，中途取样检测粗蛋白、小肽和VBN（折算到10%水分）。结论： 发酵的时间和小肽含量都会影响VBN检测的数值。注：因此实验为实验室小试，数据上会和生产上有差别。编号时间（d）粗蛋白%小肽（占CP）%VBN(mg/100g)1149.9214.5236.12250.9716.9446.24350.9616.9752.23450.1619.0262

60、.1551.0419.9672.82652.5422.9179.42752.723.0997.961452.4824.22117.892149.1614.2732.06250.1317.1947.43350.5718.7758.44450.6619.1366.38551.1419.4564.64651.2519.7870.55751.8520.4485.611451.8422.95106.783149.7711.0333.62249.4612.6137.85350.2313.3543.18450.9217.3462.62551.0918.4568.95651.7219.5875.32751.9