忍冬藤叶中绿原酸的分离纯化工艺研究

1、忍冬藤叶中绿原酸的别离纯化工艺研究【摘要】目的研究忍冬藤叶中的绿原酸别离纯化工艺。方法用静态吸附法考察不同大孔树脂的吸附、解吸性能，并以绿原酸保存率为指标，采用L9(34)正交实验设计对忍冬藤叶中绿原酸的别离纯化工艺条件进展优化。结果综合考虑，最正确大孔树脂为LSA-21，溶媒浓度为25，溶媒为2BV，洗脱流速为0.6BVh-1。结论该工艺合理，稳定可行，可用于工业化推广。【关键词】忍冬藤叶；别离纯化工艺；大孔吸附树脂；正交实验设计；绿原酸Abstrat：bjetiveTstudythepurifiatinfhlrgeniaidintigandleafLnieraJapniaThunb.eth

2、dsThedifferentarprusresinprpertiesfabsrptinanddesrptinerebservedbystatiabsrptinethd.iththereservatinratefhlrgeniaidasindexesrthgnaldesignithL9(34)asusedtseletthenditinfpurifiatin.ResultsThearprusresinfLSA-21hadthebestperfrane,andtheptiunditinsasflls：25alhland2BVauntfslutin，theflrateas0.6BVh-1.nlusin

3、Thenditinfpurifiatinisstableandpratiable,itanbeusedfrthepreparatininlargesaleKeyrds：LnierajapniaThunb.；Purifiatin;arprusresin；rthgnaldesign;hlrgeniaid绿原酸是植物在有氧呼吸过程中经莽草酸途径形成的一种苯丙素类化合物，属酚酸类化合物，具有抗菌、抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂等作用1，是金银花、忍冬藤叶的主要有效成分之一。因以金银花为原料提取绿原酸的消费本钱较高，而与花同株的忍冬藤叶中绿原酸含量与花相近，所以从忍冬藤叶中提取别离

4、绿原酸具有显著经济意义。本实验在研究忍冬藤叶中绿原酸提取工艺的根底上对别离纯化工艺进展优眩1仪器与材料1.1仪器岛津L-10ATvp高效液相色谱仪岛津公司；N2000色谱数据工作站浙江大学智能信息工程研究所；DZF-6021型真空枯燥箱上海一恒；ETTLER-TLEDDAB265-S型电子分析天平(瑞士)。1.2材料忍冬藤叶，批号070822，江西中医药高等专科学校附属中药饮片厂提供；AB-8，HPD-100A，HPD-400A，HPD-826A，LSA-21，LSA-80等大孔吸附树脂，分别购自天津大学化工厂，沧州宝恩化工，西安蓝深；绿原酸对照品，批号110753-200212，购自中国药品

5、生物制品检定所；试剂除HPL用乙腈为色谱纯外，其他均为分析纯。2方法与结果2.1含量测定2.1.1色谱条件2色谱柱为hypersilDS2柱5，4.6250;大连依利特；柱温35；流动相为乙腈-0.4磷酸1387；检测波长327n；流速1.0lin-1；理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于1000。2.1.2对照品溶液的制备精细称取绿原酸对照品17.80g，置25l棕色量瓶中，加50%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精细量取1l，置10l棕色量瓶中加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，贮存于棕色量瓶并置4冰箱，备用。2.1.3标准曲线的绘制分别精细量取绿原酸对照品溶液1，2，3，4，5，6l置10l容量瓶

6、中，加50甲醇稀释至刻度，依次精细汲取20l注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量X对峰面积A作线性回归，回归方程为：A=1.5659106X+8319.3,r=0.9999，可知绿原酸在0.22361.3416g范围内与峰面积呈良好线性关系。2.1.4原药材含量测定取样品适量，粉碎成粗粉，分别称取3份各0.5g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加50甲醇50l，称定重量，超声30in，放冷，再称定重量，用50甲醇补足减失重量，摇匀，0.45微孔滤膜滤过，精细汲取对照品溶液与样品滤液各20l，注入液相色谱仪，记录色谱图。用外标法，以峰面积计算样品中绿原酸的含量，结果平均含量按质量分数计为18.4

7、0gg-1。2.2上柱前样品溶液的制备取忍冬藤叶粗粉1kg，以流速为12lkg-1in-1，溶媒为40乙醇渗漉，收得8倍量渗漉液,回收乙醇，精细测定残留液体积并依法测定绿原酸含量，备用。2.3不同型号的大孔吸附树脂对绿原酸吸附、解吸才能的比拟称取10g预处理好的大孔吸附树脂置于100l锥形瓶中，参加一定量提取液，浸渍24h，不时振摇，依法测定含量，并根据公式(1)3计算吸附量及吸附率。在吸附饱和的10g树脂中，参加50l90%乙醇，不断振摇，依法测定含量，根据公式(2)3计算解吸量和解吸率。结果见表1。Qa(-e)V/Ea(-e)/100%(1)QddV/EdQd/Qa100%(2)式中：Qa

8、-吸附量(gl-1)；0-吸附液起始浓度(gl-1)；e-吸附液平衡浓度(gl-1)；V-溶液体积(l)；-树脂重量(g)；Ea-吸附率；d-解吸液平衡浓度(gl-1)；Qd一解吸量(gl-1；Ed-解吸率表1大孔吸附树脂对绿源酸吸附、解吸附才能比拟结果说明，LSA-21吸附量与解吸量最大，LSA-80与HPD-100A吸附量也较大，但解吸量稍低于LSA-21，以吸附量和解吸量为参考指标，综合考虑最正确大孔吸附树脂为LSA-21。2.4优化别离纯化工艺参数2.4.1正交实验设计为优化别离、纯化工艺参数，在预实验的根底上，采用L934正交实验设计，以绿原酸保存率为指标，考察乙醇浓度、搜集量、洗脱

9、流速对LSA-21别离、纯化效果的影响。因素与程度见表2。表2因素程度程度A乙醇浓度%)B搜集量/BV洗脱流速/BVh-112510.423520.634530.82.4.2实验安排及结果取已处理好的大孔树脂装柱，依消费企业实际消费情况，固定大孔吸附树脂柱径高比为14。分别取忍冬藤叶渗漉液9份各80l，上样，均先用1BV蒸馏水洗脱，固定水洗脱流速0.8BVh-1，水洗脱液另存；然后依L934正交实验设计安排表进展实验，搜集醇洗脱液，摇匀，准确测定体积，依法测定绿原酸含量并计算保存率。结果见表3，方差分析见表4。由表34可知，对绿原酸保存率的影响因素依次是BA，其中因素B有显著性影响，最正确工艺

10、条件为A3B32。考虑到A1与A3、B2与B3程度对绿原酸保存率影响相近，本着降低本钱的原那么，确定优化工艺为A1B22，即溶媒为25乙醇，搜集洗脱液2BV，洗脱流速为0.6BVh-1。表3正交实验安排及结果表4正交实验方差分析2.5验证实验为进一步考察上述最正确工艺的稳定性和合理性，按该工艺条件进展重复性实验3次，依法测定绿原酸含量并计算保存率。结果见表5。实验结果说明该工艺重复性好，且稳定可行。表5最正确工艺的验证实验%3讨论曾比拟水提石灰乳沉淀法、乙醇回流法、乙醇渗漉法等3种提取方法对忍冬藤叶中绿原酸提取率的影响，结果说明乙醇渗漉法为最正确，并经L934正交实验优化提取工艺条件为：以40

11、乙醇为溶媒，搜集8倍量渗漉液，流速为12lkg-1in-1。在提取液上柱吸附平衡后，经实验确定水洗脱流速0.8BVh-1。同时进展了3BV蒸馏水洗脱实验，每1BV搜集1份，共3份。实验结果说明，第1份水洗脱液中含有少量绿原酸，而第2，3份水洗脱液中几乎不含绿原酸；将3份水洗脱液分别枯燥，得浸出物，称重，结果除第1份中浸膏收率较大外，第2，3份水洗脱液中浸膏收率均很低。因此，确定先用1BV蒸馏水洗脱，再依实验安排用不同浓度乙醇洗脱。经对上柱醇洗脱液进展浓缩，枯燥，称重并依法测定含量，结果干膏收率为5.03，绿原酸平均含量按质量分数计为28.54，计算绿原酸总保存率为78.01。依企业实际要求，我们在上述提取别离工艺条件的根底上，又进展了第2步别离纯化工艺研究，最终实验结果是干膏收率1.87，绿