胚胎工程的实验技术-完整版获奖课件

1、胚胎工程体外授精和胚胎体外培养胚胎移植胚胎分割胚胎干细胞三、胚胎分割技术1.定义： 指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。2.特点： 后代具有相同的遗传物质， 因此胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。3.理论基础 利用动物胚胎细胞的全能性 胚胎分割的时期为：早期胚胎(囊胚或桑椹胚)4.程序：三、胚胎分割技术切割器具的准备胚胎的预处理胚胎分割分割胚的培养分割胚的移植器械准备：4.程序：体视显微镜、倒置显微镜和显微操作仪胚胎固定管和分割针 用显微镜附加细微操纵装置所组成的显微手术器械。显微操作仪和放大镜起着同样的作用，就是把近处的微小物体

2、成一放大的像，以供人眼观察。只是显微镜比放大镜可以具有更高的放大率而已。 倒置显微镜又称“实体显微镜”“立体显微镜”或称“操作和解剖显微镜”，是一种具有正像立体感地显微镜，被广泛地应用于生物学、医学、农林、工业及海洋生物各部门 体视显微镜胚胎的预处理：4.程序： 分割前一般用链酶蛋白酶处理，可使透明带软化并变薄或除去透明带。.切几份, 之间关系, 有什么方法, 目前主要是2份, 原因 概念.切什么时期胚胎的分割：4.程序：受精卵分裂 早期胚胎胚胎分割基本过程代孕母牛植入植入分割胚胎的分割：4.程序：不同发育阶段的胚胎26个细胞的胚胎链蛋白酶除去透明带微针切开透明带吸管吹打卵裂球分散微管吸取透明

3、带培养早期胚胎受体桑葚胚半胚或四分胚切割空透明带植入分割胚的培养：4.程序：分割胚的移植：放入空透明带中.半裸胚直接移植, 均等, 为什么只能2份.还存在什么问题三、胚胎分割技术5.缺陷：刚出生的动物体重偏低，毛色和斑纹还存在差异。采用胚胎分割技术产生同卵多胎的可能性有限。6.操作注意事项： 胚胎分割的份数越多，操作的难度会越大，移植的成功率也越低。 早期胚胎的体积很小，只有在显微镜下才能看到；再者，细胞数目是有限的。分割的份数越多，不但难以做到均等分割，每一份的细胞数会越少，而且作为囊胚期的胚胎内细胞团细胞所受的影响会更大。因此，分割的份数越多，技术的难度会越大，移植后的恢复和发育的难度会越

4、大，移植成功率自然会降低。三、胚胎分割技术7.应用：扩大优良家畜的数量培育遗传特性相同的动物群，提供实验动物.性别鉴定2性别鉴定：如扩大优良奶牛8.操作注意事项： 对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要将内细胞团均等分割。 原因：内细胞团一般到囊胚阶段才出现，它是发育为胚胎本身的基础细胞，其他细胞为滋养细胞，只为胚胎和胎儿发育提供营养。若分割时不能将内细胞团均等分割，会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强，少的部分发育受阻或发育不良，甚至不能发育等问题。四.胚胎干细胞技术1.定义： 胚胎干细胞，具有多向分化潜能和自我复制、更新能力的原始未分化细胞，在体外连续传代并保持未分化状态和具有全能性的细胞。

5、桑葚胚细胞、囊胚的内细胞团或胎儿原始生殖细胞。2.特点：结构特点：功能特点：细胞体积小，细胞核大，核仁明显具有发育的全能性，可以分化成任何一种组织。体外培养，只增殖不分化。可冷冻保存。3.胚胎干细胞的核移植：饲养层细胞培养体系的建立胚胎干细胞的获得过程3.胚胎干细胞的核移植：饲养层细胞培养体系的建立作用：促进干细胞的生长，抑制其分化。3.胚胎干细胞的核移植：胚胎干细胞的获得早期胚胎（ES细胞）原始性腺（EK细胞）3.胚胎干细胞的核移植：过程：胚胎干细胞的核去核的卵母细胞中移植重组细胞代孕母胚胎移植体外培养克隆胚胎克隆动物分娩无性繁殖 试管动物 与 克隆动物相比生殖方式：技术手段：有性生殖核移植

6、技术、胚胎移植体外受精胚胎移植无性生殖（1）治疗人类的某些顽症。 利用ES细胞可以诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能。目前，在动物实验方面，用ES细胞诱导分化出的某些组织细胞已成功地治愈糖尿病、肝衰竭、心衰竭和成骨不良等疑难病症。4.胚胎干细胞的应用：（2）培育出人造组织器官，用于器官移植。 随着组织工程技术的发展，通过ES细胞体外诱导分化，还可以培育出人造组织器官，解决目前临床上存在的供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。（3）ES细胞也是研究体外细胞分化的理想材料。 ES细胞在饲养层细胞上，或在添加抑制因子的培养液中，能够维持不分化的状态。 在培养液中加入分化诱导因子,就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化.胚胎干细胞的应用前景.优点1）移植ES细胞修复坏死或退化部位，治愈糖尿病、肝(心)衰竭、_等病症2）ES细胞体外诱导分化，可培育_3)ES细胞在牛黄酸、丁酰环腺苷酸等诱导因子作用下可向不同类型组织细胞_成骨不良人造组织器官分化 干细胞应用前景非常广阔，比如可用于细胞治疗、基因治疗、药物筛检和毒性的检测、生物体发育机制研究等。其中最吸引人的应用，是将干细胞分化成某一特定的细胞、组织，甚至器官，通过移植，使之再建起受损的组织，甚至器官。比如，将干细胞在体外分化为胰岛素细胞，