细菌性阴道病(BV)简介

1、细菌性阴道病(BV)简介及丽珠BV检测产品李生主要内容介绍 BV的基础知识 BV检测的临床意义 BV检测常见方法分析 丽珠公司BV检测产品介绍BV基础知识介绍BV的研究历史在相当长的时期里被称为“非特异性阴道炎”；1955年Gardne和Dukes发现加德纳菌与BV有关，将BV称为加德纳菌性阴道炎；到1977年有多细菌混合感染导致BV的观点代替了单一微生物感染的观点，并发现BV与早产、炎症、肿瘤等妇产科疾病密切相关；1984年瑞典国际专题学术会议上正式该病定名为“细菌性阴道病”。BV的基本定义细菌性阴道病（Bacterial Vaginosis,BV) 是指一种阴道内微生态平衡失调，在细菌学上

2、表现为生殖道正常菌群(产H2O2的乳酸杆菌)数量减少,代之以一组厌氧菌群(类杆菌属、加德纳菌属等)数量增加,引起的阴道分泌物增多，白带有鱼腥臭味等阴道生化性质发生明显变化而导致的临床症侯。正常菌群对人体的重要作用乳酸杆菌是正常阴道的最主要的优势菌，占阴道菌群的90%以上。阴道上皮细胞中含有丰富的糖原，在阴道乳酸杆菌的作用下，分解为乳酸，维持阴道正常的酸性环境，抑制碱性环境中繁殖的病原体，也称为阴道的自净作用。乳酸杆菌黏附于黏膜，形成保护屏障，竞争黏附，阻止病原微生物定植。乳酸杆菌提高机体的免疫功能，刺激巨噬细胞和淋巴细胞活性，维持阴道局部的抗感染能力。BV的发病机理图示 乳酸杆菌数量减少H2O

3、2加德纳菌/类杆菌等数量阴道内源性感染阴道菌群失调功能减退产乳酸 致病因素各类阴道炎症BV的致病病原体 阴道加德纳菌（Gardner Vaginalis） 类杆菌属（Bacterides spp.） 普氏杆菌属（Prevotilla spp.） 动弯杆菌属（Mobilucus SPP.） 其它:人型支原体等BV与常见阴道炎简介种类病原体比例细菌性阴道病Bacterial Vaginosis阴道中的乳酸杆菌减少，而加德纳菌、各种厌氧菌及支原体大量繁殖而引起的混合感染52%霉菌性阴道炎Volvovaginal Candidiasis霉菌28%滴虫性阴道炎Trichomoniasis滴虫20%BV与

4、常见阴道炎的区别正常阴道BV霉菌性阴道炎滴虫性阴道炎阴道pH值4.54.5 4.5 4.5优势微生物乳酸杆菌阴道加德纳菌等厌氧菌霉菌滴虫分泌物异味无有有有分泌物量不定，一般少中等多多分泌物外观无色或白色絮状，非均一性变稀如奶状，粘度低呈奶酪样凝块，粘度高黄绿色泡沫样，粘度低外阴、阴道上皮炎症无无有有胺试验阴性(无鱼腥味)阳性（有鱼腥味）阴性(无鱼腥味)阳性（有鱼腥味）显微镜检查正常上皮细胞,乳酸杆菌占优势线索细胞,大量混杂菌落,乳酸杆菌较少无线索细胞，可见假菌丝和芽孢无线索细胞，可见滴虫BV检测的临床意义BV的发病率患病率随种族及人群而异 一般人群: 10%30% STD诊所患者: 30%37

5、% 美国每年估计有300万有症状病例和300万无症状者 国内报道的BV患病率： 健康妇女：6.9% 妇科门诊有异常阴道分泌物的患者：9.7% 性乱人群：36.7% 孕妇：10%-25%BV检测的临床意义（一）妇科 - 是导致霉菌性阴道炎的主要原因； - 与滴虫感染密切相关，80%的滴虫患者同时伴有BV感染； - 是造成输卵管炎、盆腔炎、泌尿系统感染、术后感染的危 险因素； - 与不孕症、宫外孕有关； - 与妇科肿瘤有关： BV患者发生CIN危险是正常妇女的2倍 (CIN：宫颈上皮内瘤变,是宫颈癌前病变) BV检测的临床意义（二）产科 -是造成早产、胎膜早破、低体重儿的主要原因。BV阳性 的妊娠

6、妇女中40-50%易在37周前早产或分娩低出生体 重儿，比正常妇女高3-4倍，她们的孩子也可能受到直接 感染，患新生儿肺炎、脑膜炎等，并带来各种后遗症； -是导致绒毛膜炎、剖腹产术后子宫炎的危险因素。BV患 者产后或剖宫产后发生产褥期子宫内膜炎的是正常人群的 10倍； -是导致某些妊娠不良和妊娠并发症的危险因素； BV检测的现实状况该病的临床症状不明显，常被忽视治疗不彻底，容易反复发作现实患者认识不足，检测率不高医院目前检测方法不完善BV检测常用方法分析BV常见检测技术介绍 革兰氏染色法 (少用) 阴道加德纳菌检测(如PCR/培养法等) (少用) 脯氨酸氨基肽酶法(PIP) (少用) Amse

7、l四项法 (少用) pH值+胺试验/多胺快速检测法 (常用) 常规镜检法 (常用) 唾液酸酶法 (常用) 多联检测法 (常用)Amsel四项法目前检测BV的“金标准”，由以下四项指标构成：1）外观：阴道分泌物增多变稀如奶状2）pH值：阴道分泌物pH4.53）胺试验（嗅试验）：阴道分泌物中加入10%的氢氧化钾溶 液,出现鱼腥味4）线索细胞：分泌物镜检有线索细胞。若镜下线索细胞占阴 道复磷状上皮细胞的比例20%，则更具有诊断价值 凡4项中3项同时阳性，即可诊断BV阳性pH值测定Normal：pH3.0-4.4Unnormal：pH4.5线索细胞检查/镜检湿片法：在一载玻片上加一滴生理盐水，将阴道拭

8、子分泌物与生理盐水混合成悬液，加上盖玻片后，在高倍（400倍）镜下检查。结果：线索细胞为阴道鳞状上皮细胞表面覆盖着许多球杆菌（主要是加特纳菌，有时合并有厌氧菌），使细胞呈斑点状、颗粒状外观，细胞边缘模糊不清呈锯齿状。意义：当线索细胞占全部上皮细胞的20%以上时一般认为BV阳性。正常的上皮细胞线索细胞线索细胞检查/镜检Amsel四项的缺点 根据Amsel诊断方法,许多临床工作者感到要准确实施上述标准并不容易， 该方法临床操作程序过于复杂，一些与感染无关的因素：如近期性交、阴道冲洗、月经、或存在大量宫颈粘液等因素，可改变pH值和产生异味，胺试验的气味辨别常因人而异，不同实验人员操作之间差异性较大；

9、而对线索细胞的识别则要受到显微设备、样品采集及操作者的经验等等因素共同影响，镜检线索细胞需20%，难以界定，易漏检与误检。 多胺快速检测实验多胺快速试验原理： 感染细菌性阴道病时，阴道加特纳菌、类杆菌、普氏杆菌、动弯杆菌等相关厌氧菌侵蚀阴道上皮细胞过程中产生的主要代谢物，氨基酸代谢生成胺（主要为丁二胺、戊二胺、三甲胺等挥发性胺），胺在阴道酸性环境下以盐的形式存在，加10%KOH置换出氨，以气体形式挥发，可以使溴甲酚紫试纸变紫色胺实验的缺点 胺试验的特异性差，结果影响因素多，滴虫、宫颈糜烂等都可影响导致结果阳性；众多医院的临床对照实验评估证实BV胺实验试剂假阳性率分别为25%-35%，通过与BV

10、确诊结果对照发现，BV胺实验试剂结果符合率分别60%-70%，符合率不高。假阳性的结果将导致患者接受抗厌氧菌治疗，杀灭阴道正常菌群，造成阴道生态环境的失调，损害身心健康。 唾液酸酶检测法 唾液酸苷酶直接由病原体分泌，其活性与病原体的数量成正比。研究证实，唾液酸酶浓度与BV致病过程有关，唾液酸酶可能通过提高这些微生物吸附、侵入和破坏膜组织的能力而提高这些微生物的致病性。其活性与早产、胎膜早破、低体重儿等一系列不良妊娠后果有直接关系。 BV多联试剂检测法 多项指标综合检测，在对BV诊断的同时，也可以评价女性阴道微生态的状态，理论意义上更具有优势；可能会成为BV诊断的主流方法，目前已逐渐获得很多省份

11、的收费认可，全国范围已经逐渐开展，部分省份和地区已经相当成熟； BV多联检测目前包括三联检测（过氧化氢，白细胞酯酶，唾液酸苷酶），四联检测（pH值，过氧化氢，白细胞酯酶，唾液酸苷酶），甚至五联（过氧化氢，白细胞酯酶，唾液酸苷酶，脯氨酸氨肽酶，氨基葡萄糖苷酶);丽珠BV检测产品介绍BV Combine-Test KIT粤食药监械（准）字2009第2400191号Livzon BV 四联试剂组成试剂盒组分： A 唾液酸酶测试液 1.2ml/瓶1瓶 B 过氧化氢测试液 1.2ml/瓶1瓶 C 白细胞酯酶测试液 1.2ml/瓶1瓶 D 样本抽提液 10ml/瓶1瓶 E 反应板 20人份 F 样本抽提管

12、 20支注：试剂2-8避光保存，有效期1年BV Combine-Test KIT组成BV Combine-Test KITpH值比色卡Livzon BV 四联各项指标含义1、pH值 异常：pH值4.5 正常： pH值4.52、过氧化氢浓度测定： 阴性：乳酸菌减少，生态破坏； 阳性：生态恢复或正常3、唾液酸酶活性测定：阳性：致病菌、条件致病菌增加，生态破坏； 阴性：正常，生态恢复 4、白细胞酯酶测定： 阳性 ：粘膜受损，各种阴道感染； 阴性 ：粘膜修复，炎症消失产品的临床应用一 STD门诊女性病人二 妇科、产科病人 1.有BV临床症状 2.无BV临床症状： 有BV及其他妇科病感染史 孕妇 有早产

13、史的妇女 有妇科手术史的妇女 定期妇科检查 疑有盆腔炎的妇女 3.BV患者治疗后复查 4.手术前常规BV检测： 人流 置换、取环 通液 其他宫腔操作等Livzon BV 四联操作程序1）取出检测液及所需数量的反应板,平衡至室温；2）将新鲜样本在试纸上擦拭(点印!),使试纸被分泌物浸润,待试纸变色后立即对 照比色卡判读；3）在样品抽提管中滴加6到8滴样本抽提液约400ul；4）再将采样拭子浸入到滴有抽提液的样本抽提管中,反复搅动挤压5-6次,挤干液体后,弃去拭子；5）盖上抽提管滴头,往反应板上滴加样本抽提液，每孔滴加一滴,约35ul;6）阴性对照孔只加样本液，其它检测孔中分别滴加各对应项检测液一

14、滴,轻拍.置于35-37中温育15分钟,观察反应孔颜色变化。注:若样本干燥,可先在样本抽提管中滴入一到两滴样本抽提液,轻轻搅动润湿拭子,在继续进行检测操作步骤Livzon BV 四联操作程序Livzon BV 四联操作程序滴加样品滴加反应液PH值唾液酸酶过氧化氢白细胞酯酶阴性对照Livzon BV 四联操作程序结果判断Livzon BV 四联结果判读pH值的检测对照所附比色卡进行判读,正常pH4.4;1）唾液酸酶项:检测孔颜色变蓝或绿色,BV阳性，不变色BV阴性；2）过氧化氢项:检测孔颜色变蓝色或绿色,H2O22umol/l阴性,不变色, H2O22umol/l阳性；3）白细胞酯酶:检测孔颜色

15、变蓝色或绿色, 白细胞酯酶阳性； Livzon BV 四联结果判读实例pH值的检测对照所附比色卡进行判读,正常pH4.4;1）唾液酸酶项:检测孔不变色BV阴性；2）过氧化氢项: 检测孔颜色变蓝,H2O22umol/l阴性 ；3）白细胞酯酶: 检测孔不变色，白细胞酯酶阴性； pH值的检测对照所附比色卡进行判读,正常pH4.4;1）唾液酸酶项:检测孔颜色变蓝,BV弱阳性；2）过氧化氢项:检测孔颜色不变色, H2O22umol/l阳性；3）白细胞酯酶:检测孔颜色变蓝, 白细胞酯酶阳性；Livzon BV 四联结果判读实例Livzon BV 四联操作注意事项样本采集：用无菌棉拭子收集女性阴道壁 （阴道

16、下部1/3处）尽可能多的分泌物；样本运输：采集的样本应立即送样检测；请及时读取结果,超过规定时间5分钟以上读取结果视为无效；在采样前72小时内使用过阴道栓剂、膏剂、乳剂等阴道药物的妇女.经期所取的样本也会影响到检测结果。部分样本的检测物含量很高,大量水解底物,可产生沉淀,属于正常现象；Livzon BV Combine-Test KIT优势最关键指标-唾液酸酶敏感性,特异性最好 进口唾液酸酶原料选择的底物稳定性好，检测结果不会受到本底干扰 某些唾液酸酶试剂常常出现底物在包被的材质上或在贮存过程中发生分解变色，有一定程度的本底干扰。如国内某些试剂常常在试剂盒中提示，如有变色可正常使用等字样 。实际上显色体系如果有可见的本底，很难保证不会对检测结果的观察造成一定程度的影响，出现可疑或难以判断等问题。 Livzon BV Combine-Test KIT优势 结果易于观察,精准性好. 反应孔为“U”型孔，背景为白色，不受本底干扰, 显色结果颜色系统一致,阴阳性结果显而易见。 独特的阴性对照孔设计 丽珠BV联合试剂独有的阴性对