微生物的培养与应用课件

1、人教版选修1专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养人教版选修1专题2 微生物的培养与应用 微生物的培养与应用一.培养基：1.基本成分： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 碳源 氮源 水 无机盐 （特殊营养物质） 不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。 一.培养基：1.基本成分： 人们按照微生物对营养物质的不同需：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。无机碳源：CO2；NaHCO3等有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等a.构

2、成细胞物质和一些代谢产物b.异养微生物的能源概念来源：作用：(1).微生物的碳源自养微生物异养微生物：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。无机碳源：CO2；a.无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。b.有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。(2)微生物的氮源概念：来源：作用：(3)生长因子常见的生长因子：概念：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。a.无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。b.有机氮牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏 5.0g蛋白胨

3、10.0gNaCl 5.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000ml。配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？3.营养要素：碳源、氮源、 磷酸盐和维生素氮源和维生素无机盐H、O对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源。即有些化合物作为营养要素成分时并非单一方面的作用。并非所有微生物都需添加特殊营养物质牛肉膏蛋白胨培养基配方牛肉膏 （1）按物理状态分：（2）按功能分：（3）按成分分：2.培养基的类型和用途固体培养基液体培养基选择培养基鉴别培养基。天然培养基合成培养基（1）按物理状态分：2.培养基的类型和用途固体培养基选择培养（1）根据物理性质分主要用于工业生产主要用于微生物的分离、

4、计数等需加入凝固剂，如琼脂主要用于观察微生物的运动、分类、计数固体培养基 半固体培养基 液体培养基2.培养基的类型和用途（1）根据物理性质分主要用于工业生产主要用于微生物的分离、计 单个微生物在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。(一种微生物形成一种菌落。)微生物的菌落菌落功能：可以作为菌种鉴定的重要依据。不同菌落，大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等不同。 单个微生物在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可菌落细菌的菌落特征因种而异 菌落细菌的菌落特征因种而异 选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:

5、 分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞（2）根据功能分鉴别培养基如伊红美蓝培养基，一般用于检测大肠杆菌。选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌（2）划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途*鉴别培养基培养基的概念（划书P14）和种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂大量繁殖观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种天然物质(成分不明确)工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促

6、进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物*选择培养基液体培养基半固体培养基*固体培养基 最常用划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养2.主要措施：P15二.无菌技术防止外来杂菌的入侵1. 获得纯净培养物的关键：超净工作台（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。2.主要措施：P15二.无菌技术防止外来杂菌的入侵1. 获得

7、消毒使用较为温和的物理或化学方法，杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。3.消毒与灭菌灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭(1)定义消毒3.消毒与灭菌灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体。芽孢的壁很厚，对干旱、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌孢子细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。 芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成

8、一个椭圆形的休眠体。杀死接种室内物体表面或空气中的微生物用紫外线照射30min紫外线消毒实验者的手臂、实验台等70%酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液化学药剂消毒牛奶等不宜高温消毒灭菌的70 75,30min； 80,15min巴氏消毒日常食物、罐装食品100,56min煮沸消毒法适用范围条件方法（1）消毒杀死接种室内物体表面或空气中的微生物用紫外线照射30min紫1530min100kPa，121 培养基、实验器材高压蒸汽灭菌12h干热灭菌箱（160170 ）耐高温需干燥的物品（玻璃器皿等）干热灭菌烧红酒精灯火焰充分燃烧层灼烧接种的工具、试管口、瓶口灼烧灭菌灭菌时间所需条件适用对象灭菌方法灼烧灭

9、菌干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅（2）灭菌1530min100kPa，121 培养基、实验器材高压1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考3.利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？避免妨碍热空气流通,会影响灭菌效果1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外三、实验操作 （一）

10、制备牛肉膏蛋白胨培养基1. 计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。2. 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏和蛋白胨吸收空气中水分。3. 溶化：加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠继续加热；加入琼脂；用蒸馏水定容到100mL。a.整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。b.溶化定容后，灭菌前需调整PH4.灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。5.倒平板：待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作进行。三、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基1. 计算：

11、根【方法点拨】倒平板的方法及注意事项在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。【方法点拨】倒平板的方法及注意事项在火焰旁右手拿锥形瓶，左1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你3.平板冷凝后，为什么要

12、将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 使培养基表面的水分更好的蒸发废弃该该平板。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如纯化大肠杆菌：平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）纯化大肠杆菌：平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接一是会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的

13、菌落。一是会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 【注意事项】1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。2.划线首尾不能相接。3.划线后，培养皿倒置培养1224h。线条不重叠 从上次的末端开始，交叉23条最后的划线不能与第一区相连。 【注意事项】1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？第一步：避免接种环上原来可能存在的微生物污染 培养物每次划线前：杀死上次接种环上残留的菌种操作结束：杀死残留菌种，避免细菌污染环境和操作者问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划

14、线之前都要灼烧接种2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量 移液器6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml102

15、1ml稀释涂布平板法：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍稀释涂布平板法：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平3平板划线法和稀释涂布平板法的比较优点缺点平板划线分离法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数稀释涂布平

16、板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少、较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延3平板划线法和稀释涂布平板法的比较优点缺点平板划线可以观察平板划线法：四.大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：1.接种：稀释涂布平板法：2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37恒温箱中培养12h24h后，观察并记录平板划线法：四.大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体五、结果分析与评价 培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录五、结果分析与评价 培养12h与24h后的大肠杆菌菌