组织学与胚胎学 绪论

1、 组织学与胚胎学 ( histology and embryology ) 绪 论一、组织学与胚胎学的定义及研究内容组织学（histology）：研究正常人体的微细结构及其相关功能的学科 组织学研究内容：细胞细胞间质组织上皮组织结缔组织肌肉组织神经组织器官和系统人体胚胎学（embryology）：研究人体发生、生长及其发育机制的一门学科胚胎学研究内容：受精卵胚胎新生儿（28周）（938周） 问题 解决方法 观察对象太小 放大 显微镜 观察对象无色，无反差 染色（HE染色） 观察对象生化成分不同 细胞化学、免疫组织化学 观察对象是活体 细胞培养二、组织胚胎学研究技术（一）显微镜光学显微镜（LM）

2、：R0.2m电子显微镜（EM）：R0.2nm分辨率(Resolution，R)是指能够分辨相邻两点之间的最小距离（二）一般光学显微镜技术光学显微镜分辨率：0.2m放大倍数：几百 一千余倍HE染色、封固后的切片（石蜡切片法）标签载玻片盖玻片组织标本石蜡切片法a. 固定(Fixation): 新鲜标本取材后，为保存新鲜组织的微观结构，尽快将组织浸入到固定剂中。b. 石蜡包埋(Paraffin embedding):* 脱水(Dehydration): 用浓度逐渐升高的酒精 (70100%)将组织中的水完全置换出来。* 透明(Clearing): 用二甲苯完全置换出酒精。* 浸蜡(Infiltrat

3、ion): 在58-60时，用液态石蜡完全置换出二甲苯。室温时石蜡凝固成固态，内含待切组织。（适用：柔软的组织）c. 切片: 用切片机将组织切成120m厚的蜡片，然后将其放到温水上，待其完全展开后，裱到有粘附剂的载玻片上。d. 染色(Staining): 染料可以将微观结构显示不同的颜色以便观察鉴别。在染色前，需要脱蜡入水，因为染料是水溶性的。e .封片：在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最后用中性树胶封片，以便长期保存。 苏木精（H）：细胞核紫蓝色，嗜碱性伊红（E）：细胞质粉红色，嗜酸性HE染色HE染色切片HE染色切片不同的染色方法，其结果不同。HE染色的中等动脉醛复红染色的中等动脉除切片外，

4、还有其他处理组织的方法：* 铺片(Whole mount): 用于很薄的组织，如肠系膜。* 磨片(Ground section): 用于很坚硬的组织，如骨和牙。* 涂片(Smear): 用于液态组织，如血液，精液和唾液。涂片（三）电子显微镜（electron microscope, EM）技术 分辨率：0.2nm原理和LM相似，但用电子束代替光线，磁场代替玻璃透镜。所有原始的电镜图片都是黑白的。电镜分类：透射电镜（transmission electron microscope）： 观察细胞内部结构扫描电镜（scanning electron microscope)： 观察组织或细胞表面的立体

5、结构透射电镜图片扫描电镜图片（四）一般组织化学法标本某些结构化学试剂有色沉淀 如：过碘酸-Schiff反应(periodic acid Schiff reaction)：简称 PAS反应，是确定组织或细胞中有无多糖存在的一种方法。 原理：多糖PA氧化醛Schiff试剂紫红色沉淀PAS反应，小肠上皮杯状细胞的粘原颗粒（五）免疫组织化学术（ immunohistochemistry） 根据抗原、抗体特异性结合原理，检测组织切片中的肽和蛋白质 用标记的抗体与组织中的抗原结合，标记物可于显微镜下观察。标记物有荧光素（荧光显微镜观察）、辣根过氧化物酶（光镜或电镜观察）、胶体金（多用于电镜观察）免疫组织化

6、学（辣根过氧化物酶标记）胰岛B细胞呈胰岛素阳性（六）原位杂交术（in situ hybridization） 即核酸分子杂交组织化学术，检测基因（DNA片段）的有无、基因的表达活性（mRNA）原位杂交 脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性（七）图像分析术（image analysis） 又称形态计量术（morphometry）：应用数学和统计学原理对组织切片提供的平面图像进行分析，从而获得立体的组织细胞内有形成分的数量、体积、表面积等参数，从量的角度显示结构与功能的关系（八）细胞培养术（cell culture） 把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养；培养组织块或器官则称组织培养术或器官培养术用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响培养条件：营养、生长因子、pH值、渗透压、O2和CO2浓度、温度，控制污染用相差显微镜观察体外培养的成纤维细胞（左）HeLa细胞（右） 倒置显微镜图（九）组织工程（tissue engineering）用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术正在构建的有皮肤、软骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等；其中以组织