县级cdc生物安全课件

1、县级CDC生物安全1前 言事实:炭疽粉末生物恐怖攻击、SARS灾难、新加坡 和中国台湾和北京实验室相关感染、最近的猪链球菌 突发卫生事件等等真理:人类与传染病 (生物威胁)的斗争任务与人类共存任何国家任何时候都不能不对来自自然的、人为的生 物威胁采取有效的对策，以保护公众健康;对策:各国卫生部门不得不投入大量的人力和物力建立 生物医学实验室，以满足临床检验和研究工作之需。障碍:然而,实验室相关感染在世界范围内频频出现又给 障碍 我们增加了重重困难.为此,笔者就实验室操作中有害气 溶胶的发生及其危害控制做一综述.2内容提要生物安全的必要性 世界上存在生物威胁实验室生物安全的必要性 实验室相关感染

2、县级实验室生物安全措施 二级生物安全实验室要点3一、世界上存在生物威胁二战后半个多世纪以来，不管如何发展，世界 局部战争或冲突每天都在发生，许多人们生活 在水深火热之中,这个星球很不安宁。近年来， 恐怖活动猖狂，已成为世界公害，害人的恶魔， 甚至成为大规模战争的导火索。专家们认为世 界上生物恐怖和生物战的潜在威胁不是减少了 而是增加了。 特别是生物新技术突飞猛进地发 展给生物武器研制者带来了新的契机。有人称： 武器发展进入了生物武器的新时期。41.传染病的威胁依然存在1）已经控制的传染病有死灰复燃之势: 例如结核病在世界范围内发病率、死亡率大有上升之 势。据世界卫生组织报告，目前全球有19亿人

3、 受到结核菌感染，有肺结核病人2000万，每年 因结核病死亡人数达300万，是其他传染病死 亡人数的总和。在我国已有约5亿人感染过结 核菌，有肺结核病人600万，占全球结核病人 总数的四分之一，每年死亡约 13万人，已经成 为青年的第一杀手。有人称这等于又出现了新 传染病。已知的耐药株结核杆菌引起新的传染 病51.传染病的威胁依然存在3）新的传染病不断出现 : 近20多年新的 传染病不断出现，例如艾滋病、 传染病不断出现，例如艾滋病、SARS 、 马尔堡、埃波拉、拉沙热等。不完全统 等 计已经发现了30多种，且2/3已经进入我 国。这些传染病往往造成突发的卫生事 件，有的气溶胶传播，防不胜防，

4、措手 不及，造成巨大灾难71.传染病的威胁依然存在4）食源性传染病 （food borne infectious )： 指通过饮食媒介经消化道感染的疾病。 指通过饮食媒介经消化道感染的疾病。 1997年第 53届世界卫生大会上，世界卫生组织将食品安全列为重要议题， 并指出在过去的20年 里，食源性疾病的发生率明显上升。在发达国家，估计每年有 13以上的人群感染食源性疾病。美国每年约有 7000万 8000万人患食源 性疾病，其中32.5万人入院治疗，5000人死亡。82.世界上存在生物恐怖2）生物战（bio-war）：是指用高致病生物因 子进行的战争。 目前世界发达国家的生物武器相当先进， 武

5、器 化能力很强； 一些第三世界国家也掌握生物武 被称为穷人的原子弹； 一旦发生造成的灾 难不可设想。 内外有关专家认为发生生物战 的潜在危机正在增加，令人忧虑。 的潜在危机正在增加，令人忧虑。基因武器 （gene weapon）是生物武器的新发展， 指用基因工程研制的生物武器。 现代生物技术 的崛起已经成为“双刃剑”102.世界上存在生物恐怖历史上，有人曾多次挥舞科技发展的“双刃剑”，在 其发明创造新生活的同时，也在用自己的发明毁灭自 己，毁灭人类。生物技术与其他学科一样，永远是 “双刃剑”，一方面为人类造福，另一方面被少数人 利用研制基因武器，残害他人。现代生物技术能改变 生物战剂的攻击性能

6、。改变其抗原性使之难以诊断； 增强其致病性以加强杀伤力； 增强其存活力以延迟攻 击时间和扩大攻击面积；增强其抗药性造成治疗困难。 国内外专家十分担心和关注基因武器的发展并推测， 国内外专家十分担心和关注基因武器的发展并推测， 基因武器能够进行对人种的特异性攻击。113.外来病外来病(exotic disease) 是指国内没有 外来病 的或已经消灭的疾病，例如马尔堡、埃波拉、拉沙热、天花等。这种 这种威胁随着 这种 各国往来的频繁和交通的便利发生的可 能性大增，而且传入的方式快捷。特别 是呼吸道病毒传染病爆发性强，传播途 经难以控制。有效的预防治疗方法较少。125.医院感染医院感染 (hosp

7、ital-acquired infection)：医院感染也叫医院获得性感染或院内感染, 指在医院内发生的一切 感染。特别是对传染病的患者的交叉感 染更为严重，2003年SARS期间的医院 交叉感染（20%）不堪回首。146.人畜共患病人畜共患病 (zoonosis): 人和动物间相 互传播的传染病。 人的传染病常常由动 物传播, 可通过接触经皮肤和粘膜感染, 也可经消化道进入体内, 也可经消化道进入体内 ,更可通过气溶胶 经呼吸道感染。人高致病禽流感、 疯牛 病等。 近来，高致病禽流感肆虐所造成 的损失不就在眼底吗！15实验室空气传播与感染概述实验室气溶胶的危害古今中外,在微生物学实验室中，

8、大部 分传染性和致病性较强的病原体都发生 过实验室相关感染,并且气溶胶传播感染 非常严重.下面就几类病原微生物的实验 室感染传播途径作扼要介绍。各种病原 体实验室相关感染的资料汇总.17细菌实验室感染途经菌种 皮粘 吸入 食入 动物 炭疽 + + + +百日 + + - -布氏 + + ？ +土拉 + + + +结核 + + ? ?类鼻 ? + - ?伤寒 + ? + ?梅毒 + + - -霍乱 + - + -鼠疫 + + + +18病毒实验室感染途径病毒 皮粘 吸入 食入 动物汉坦 + + + +猴疱疹 + ？ ？ +HIV + - ？ -拉沙 + + + +马尔堡 + + - +埃博拉 +

9、 + - +狂犬 + + - +委马 + + - +19实验室真菌毒素感染及其他种类 皮粘 吸入 食入 动物酷氧 + + ？ +荚膜 + + - -肉毒 + + + -葡萄 + + + -锥虫 + + - -202.操作产生气溶胶的情况曾用安德森空气微生物采样器(Andersen Sampler)测定了一些实验室操作过程中产生微 生物气溶胶颗粒的大小。结果发现， 搅拌粉碎器产生的气溶胶颗粒中，粒径5m 的占98以上。 冻干培养物产生的气溶胶颗粒中，粒径5m 的占80 。 其他操作如收取鸡胚培养液、用吸管吹吸、混均、离心悬液、超声波粉碎感染性材料、摔碎 菌液瓶等所产生的微生物气溶胶颗粒，其平均

10、粒子直径都5m。21实验室气溶胶类别两大类：一类是 “液滴核” (Droplet nuclei)气溶 胶，这种气溶胶的产生是由于外力作用 于含有微生物的液体，如液体标本、培 养液形成颗粒进入空气,较大的很快沉积 在各种表面上形成了含有微生物的尘埃, 较小的粒子水份很快蒸发形成 “液滴核” 成为非常小的颗粒(24m)，分散在空 气之中，能够漂浮较长的时间和扩散较 远的距离.22影响气溶胶感染的因素“感染力”、“致病力”、“毒力”、 “存活力”,气 溶胶的浓度、粒子大小 粒子大小、其它的粒子特性,以及当时工 粒子大小 作人员防护优劣和实验室内的微小气候条件等。 粒径50100m的液滴很快沉降在各种

11、表面上，如果沉降在伤口或粘膜上感染的机会很大;粒径10至50m的飞沫可以扩散,但大部分不易吸入呼吸道,最终也是沉降; 5至10m粒子可随着吸入的空气进入气管、支气管以上的呼吸道,造成一定危害;粒径 5m的颗粒被人吸入后可以滞留在肺的深部 进行繁殖和扩散, 其危害最大。24实验室微生物气溶胶的产生总之 实验室中许多操作过程可以产生微生 物气溶胶，并随空气扩散而污染实验室 的空气，当工作人员吸入了污染的空气， 便可以引起实验室相关感染(Laboratoryassociated infection)表1列出能够产生微 生物气溶胶的实验活动.25产生微生物气溶胶的操作(2)针头从注射器上脱落喷出毒液;

12、 高速离心离心管破裂 皮毛没有消毒或消毒不彻底 刀、锯等操作 血液喷发 搅拌机、混合器、超声波仪和混合用的仪器; 灌注和倒入液体； 打开培养容器； 感染性材料的溢出； 真空冻干和过滤； 接种鸡胚和培养物的收取。27产生微生物气溶胶的操作(3)小结 资料表明,对276种操作进行了测试，其中239 种操作可以产生微生物气溶胶，占全部操作的 86.6。将各种操作归纳为21大项，按其产生 微生物气溶胶颗粒的多少，分为重度、中度和 轻度三级。特别指出是,有些工作需要反复多次 操作,即使一次操作产生的气溶胶并不多,但由 于多次操作同样可以在短时间内产生大量的微 生物气溶胶，对工作人员造成严重危害。28操作

13、一次可产生各种严重程度微 生物气溶胶的活动轻度(10个颗粒) 中度(11100个颗粒) 重度(100个颗粒)玻片凝集试验； 腹腔接种动物 离心时离心管破裂倾倒毒液； 局部不涂消毒剂 打碎干燥菌种管；火焰上灼热接种环 接种鸡胚和抽取培养液 摔碎带有培养物的 平皿颅内/鸡胚接种；试验动物尸体解剖 用乳钵研磨动物组织 注入、倾倒、混悬毒液 毒液滴落在不同表面上 从安瓿中抽取毒液； 接种环接种平皿 打开培养容器的螺旋瓶盖打开干燥菌种安瓿； 搅拌后立即打开搅拌器盖; 小白鼠鼻内接种； 注射器针尖脱落喷出毒液 刷衣服 拍打衣服293.实验室感染的控制原理实验室空气传播与感染主要由三个过程: 一是微生物气溶

14、胶的产生， 二是微生物气溶胶的扩散, 三是微生物气溶胶人体暴露和吸入。 三是微生物气溶胶人体暴露和吸入 因此，要控制或减少实验室空气传播和感染，要有相应针对的生物安全措施， 以控制实验室微生物气溶胶感染的三个过程。30改进操作技术避免气溶胶产生 (1)1规范工作人员操作过程. 2避免操作错误. 3正确选择使用仪器/器材/设备。 4改进传统操作方法. 例如;1)用玻璃棒接种光滑的琼脂平面比(99)； 2) 用冷接种环沾取菌液比(90)； 3)使菌液依靠重力由吸管中流出 比用吹出(67)； 4) 菌液滴落在消毒巾上比硬桌面上(90)； 5)用针头从盖有橡皮塞的瓶中抽液时，用酒精棉 球围住瓶口比不用

15、时所产生的气溶胶少99。31防止微生物气溶胶扩散的生物安全原理(2)无论是哪一种微生物实验室，总有一些微生物 操作本身不可避免地要产生气溶胶，尽管采取 一些防范措施，只可以减少微生物气溶胶的产 生，但不可能完全避免。因此，除了上述措施 外(控制空气传播感染的第一环节)，还要防止气溶胶扩散,即控制空气传播感染的第二环节。在实验室中,防止气溶胶扩散可以采取双重保护 措施： “围场操作” 、“屏障隔开” 、“有 效拦截” 、“定向气流” 、 “空气消毒” 、 “个人防护”等措施32围场操作是把微生物局限在一个空间内进行操作, 使之不与人体直接接触,并与开放之空气隔离.例如在生物安全柜内。生物安全柜可

16、以把操作中产生的气溶胶局限在安全 柜台内,避免人的暴露。实验室也是围场, 是属于第二道防线,起到“双重保护”作 用.围场操作的原则是围场越小越好.33隔离器图片34屏障隔离是指产生气溶胶或一旦气溶胶突破围场, 防止气溶胶扩散就要靠各种屏障. 例如, 生物安全实验室及其缓冲室或通道(第二 层围场),即能防止气溶胶进一步扩散. 概括:机械、缓冲、负压(气体)35实验室概况 实验室概况 布局及流程图片36定向气流是指控制实验室内可能被有害因子污染 空气的流动方向,即: 1.实验室区域外面的空气只能向实验室 内流动, 2.清洁区域空气只能向污染区域流动, 3.污染轻的空气只能向污染重的区域流动.37B

17、SL-3 of ChinaAir pressure controlOut roomPassageBufferoom(1)PrepareBuffe room(2)BSL-3ABSL-30-0-10-20-30-40-500-5-10-20-30-40-500+10-10-20-30-40-5038空气消毒对局部空气消毒，用有效消毒措施消毒,使用紫外线照射较为方便,使用此种方法 时，要经常测定紫外灯的照度，当照度 降低后，应及时更换。平时(24周)用 酒精棉球擦拭灯管，以防灰尘等污垢阻 碍紫外线穿透。 也可使用喷雾消毒方法等39防止个人暴露病原微生物感染力和致病力再强,只要使其不与人体接触(包括呼

18、吸道)它就不会发生作用,感染 就不会发生.在操作中手接触生物因子的机会最 多,所以用乳胶手套、防护服等作为屏障.对气溶胶的防护用正压服、正压头盔、防护面具、 口罩、防护眼镜等作为主要屏障,避免生物因子被人体吸入.这就是强调个人防护的原由.40个人防护图片41有效拦截是指在处理围场内空气时对外排的空气进行净化,用符合要求的HEPA处理,以保证不污染环境,保护公众健康. 有效拦截其他方法:“消毒液过滤” 、 “加热过滤” 、“火烧过滤” 、“静电 过滤”等.42三、县级生物安全要点1.病原微生物的分级 2.管理和SOP 3.设施、设备要求43县级生物安全的任务为了提高我国防治传染病的整体水平和 能

19、力，保证实验室生物安全。由于没有任何一个实验室能够完全地控制其所接收标本的危害等级，实验室的操作人员可能接触比预期更高危险度的微生物， 所以世界卫生组织（WHO）要求，临床诊断和卫生保健实验室必须设计成二级 或二级以上生物安全水平。44县级生物安全的任务只要求建设BSL-2水平的实验室 ，因此除了加强个人防护外我们必须加强实验 加强个人防护外我们必须加强实验 室生物安全的管理和GMT的培训工作， 以便在遇到高致病微生物时能够开展初 期的工作并保证生物安全。因此，各有 关单位在制订基层BSL-2实验室生物安全计划和政策时要更加注意软件方面的建设。45微生物危险等级规定WHO根据感染性微生物的相对

20、危害程度制订了 危险度等级的划分标准 (1、2、3、4级，低 高）。我国的病原微生物实验室生物安全管 理条例（国务院令424号）和实验室生物 安全通用要求（GB19589-2004）也对病原 微生物危险度进行了分类（一、二、三、四类， 高低）和分级（1、2、3和4级，低高）， 其原则基本一致。该危险度等级的划分，仅适 用于实验室工作。46生物安全防护水平的构成和生物安全实验室等级实验室生物安全措施可以概括成三个部 分：实验室生物安全管理、实验室设施、 设备、个人防护装备、良好的微生物操 作技术。把实验室防护分为一级屏障 （primary burier）和二级屏障（second burier），

21、前者包括实验室设备和个人防 护装备；后者主要指实验室设施。实验 室的生物安全防护水平（Biosafety level） 分为4种(BSL 1-4)。47一级生物安全防护水平 BSL-1一级生物安全防护水平除需要洗手池外 不需要特殊的一级和二级屏障，依靠标准的微生物操作即可获得基本的防护水 平。一级生物安全防护水平实验室适用于大学生、再教育培训的和教学用的实 验室。枯草杆菌、格氏阿米巴原虫和感 染性犬肝炎病毒是符合这些标准的微生 物的代表。48BSL-1图片49二级生物安全防护水平如果产生溅出物和气溶胶的可能性很小的话， 良 好的微生物学技术能够保证在开放式的操作台面上安全地使用这些致病微生物，

22、 否则应该在 生物安全柜（BSC）内操作。乙型肝炎病毒 沙门氏菌和弓形虫是属于这类防护水平的微生 物的代表。未知感染性样本，包括人体血液、 体液和组织等的检测一般都可在这种级别实验 室内进行。 对工作人员的主要危害是与感染性 材料的偶然的皮肤或粘膜暴露、针刺、吞食、 动物叮咬等。50BSL-2必须强调对污染的针头或利器的使用要非常谨慎。对易于通过气溶胶途径传播的微生物、具 有增加工作人员暴露气溶胶或高度飞溅物的程 序，二级生物安全防护水平微生物操作必需在 一级生物安全防护水平的基础之上，增加生物 安全柜、高压灭菌器、安全离心机罩帽、 安全柜、高压灭菌器、安全离心机罩帽、防溅 罩或面罩等。 标准

23、的BSL-2实验室见图2，从中 可见，除了满足BSL-1的要求以外，在门上增 加了生物危险标志（图3）、II级生物安全柜。 按国标（GB19489-2004）,还要配备高压蒸汽灭菌器、洗眼器。51BSL-2图片52我国县级BSL-2建设要点设施要求: 要满足上述通用要求，可在公用实验室 区域选取足够的房间，1间作为工作人员 的办公室兼作个人物品存放和仓储；按 进入次序依次为准备间，面积适宜；最 后是操作感染性材料的实验室，面积30 平方米左右为宜（详见“通用要求”）。53BSL-2门上标志图片54装备要求1）有条件的在BSL-1和BSL-2实验室 都应设置通风厨或负压罩 用作有害气体、化学物等

24、操作。 2）必须安装生物安全柜（国产即可） 用于操作感染性材料中容易产生气溶胶和喷溅的操作。建议选用CLASS II级安全柜，符合国际标准（分级标 准）：55设备要求机器主体所有的连接、角部及接缝处牢固、美 观、容易清洁. 整机工作性能稳定。 操作开口的进口风速（in flow）0.41m/s, 下 送柜内气流(down flow)速度0.380.025m/s. 柜体内空气压力（与室内比） -100-150Pa. 洁净度不低于100级。 30%外排可进入室内，也可排到室外，70%空 气在安全柜内循环，排出气体经过滤器处理。56设备要求高效过滤器，对0.3um空气颗粒截留效率 99.99%以上，

25、过滤器的使用寿命不低于3年上。专业化的配件紫外灯系统，支架，柜体内部 电源插头，各类气体接口等齐全。 噪音标准低于65dB 个体保护、样品保护、环境保护、交叉污染 和各种物理参数检测合格，并附检测报告。 免修三年。57设备要求3） 高压蒸汽灭菌器（国产即可） 立式灭菌器，5075L，满足121灭菌要求. 不锈钢内胆 经过检测符合国家标准。 4） 生化培养箱（国产即可） 双制式冷热温控，数字显示， 不锈钢内胆， 公称容积：100-150L左右 控制温度450，温度波动不超过 1。58人员防护1)在实验室操作感染性材料时，任何时候都必 须戴口罩和防护镜、穿着反背隔离防护服，穿 防护鞋袜，不得裸露腿部和脚趾，必要时穿连 体衣。 2)在进行可能直接或意外接触到血液、体液以 及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物 的操