自身免疫性疾病免疫学检验课件

1、自身免疫性疾病免疫学检验自身免疫性疾病免疫学检验自身免疫性疾病免疫学检验自身免疫性疾病免疫学检验自身免疫性疾病免疫学检验自身免疫性疾返回总目录目录 概述 1自身免疫性疾病的免疫学检查 2自身抗体的检测实验选择的原则 3小结42返回总目录目录 概述 1自身免疫性疾病的免疫学检查 2自 自身耐受(self-tolerance) ：正常情况下，免疫系统 对宿主自身的组织和细胞不产生免疫应答。 自身免疫 (autoimmunity)：当某种原因使自身耐受 性破坏时，免疫系统就会对自身组织成分、细胞成 分及其产物发生免疫应答。第一节 概述3 自身耐受(self-tolerance) ：正常情况下，免 自

2、身免疫病(autoimmune disease,AID)：是自身免疫应答过强或持续时间过久，表现为质和量的异常，所产生的自身抗体和（或）自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细胞和组织发动攻击，导致损伤或功能障碍，并出现相应临床症状。4 自身免疫病(autoimmune disease,AID)一、自身免疫病及风湿性疾病 风湿性疾病（rheumatic diseases）泛指影响骨、关 节及周围软组织等一组疾病，简称风湿病。5一、自身免疫病及风湿性疾病 风湿性疾病（rheumatic 结缔组织病(connective tissue disease,CTD) 是指病变主要发生于结缔组织，有组织黏液样

3、水肿、纤维蛋白样变性及坏死性血管炎等基本病理变化的一组疾病。以往所指的结缔组织病或胶原病是风湿性疾病的一部分，它们和风湿性疾病不可完全等同。 6结缔组织病(connective tissue diseas1.发生及感染、遗传、性激素等因素有关，属AID；2.结缔组织及血管的慢性炎症为其基本病理变化；3.病变可累及多系统、多器官；发病情况差异大，为异质性疾病；5.以关节、肌肉、软组织等疼痛为主要症状；6.血清中可查出多种自身抗体；7.对糖皮质激素及免疫抑制剂药物治疗有疗效；8.病程慢性、反复、进行性，最终可导致残疾或死亡。 风湿病的临床特点71.发生及感染、遗传、性激素等因素有关，属AID；风湿

4、病的临二、自身免疫病的共同特征血中测到高效价的自身抗体/自身应答性T淋巴细胞自身抗体/自身应答性T淋巴细胞作用于表达自身抗原的组织细胞，造成其损伤或功能障碍动物实验可复制与AID相似的动物模型，并能通过血清或致敏的淋巴细胞可使疾病被动转移大多数自身免疫病是自发性或特发性的，外因可有一定影响 ，病情的转归与自身免疫应答强度相关有遗传倾向，反复发作和慢性迁延，部分自身免疫性疾病易发于女性，应用免疫抑制剂治疗有效 8二、自身免疫病的共同特征血中测到高效价的自身抗体/自身应答性三、自身免疫病的分类 按自身抗原分类 器官特异性自身免疫性疾病器官非特异性自身免疫性疾病患者的病变常局限于某一特定的器官，由对

5、器官的特异性抗原的免疫应答引起全身性或系统性自身免疫性疾病；患者的病变可见于多种器官及结缔组织（结缔组织病或胶原病）9三、自身免疫病的分类 按自身抗原分类 器官特异性自身免疫性疾器官特异性病 名自 身 抗 原桥本甲状腺炎甲状腺球蛋白和甲状腺微粒体甲状腺功能亢进(Graves病)TSH受体Addison病肾上腺皮质细胞自身免疫性萎缩性胃炎胃壁细胞、内因子溃疡性结肠炎结肠黏膜细胞重症肌无力乙酰胆碱受体交感性眼炎眼晶状体蛋白胰岛素依赖型糖尿病胰岛细胞胰岛素抵抗型糖尿病胰岛素受体原发性胆汁性肝硬化小胆管上皮细胞10器官特异性病 名自 身 抗 原桥本甲状腺炎甲状腺球蛋白和器官非特异性病 名自 身 抗 原

6、系统性红斑狼疮细胞核成分、细胞浆成分类风湿性关节炎变性IgG、类风湿相关的核抗原干燥综合征涎腺上皮细胞混合性结缔组织病细胞核(RNP)自身免疫性溶血性贫血红细胞特发性血小板减少性紫癜血小板特发性白细胞减少症白细胞硬皮病细胞核蛋白、细胞核染色体着丝点多发性肌炎细胞核蛋白11器官非特异性病 名自 身 抗 原系统性红斑狼疮细胞核成分器官特异性和器官非特异性的特征性区别器官特异性器官非特异性自身抗体和病变具器官特异性自身抗体和病变无器官特异性极少量自身抗原及淋巴样系统接触大量自身抗原进入免疫系统实质病变可能由变态反应或自身抗体所致病变由抗原抗体复合物所致治疗原则为控制代谢缺陷治疗原则为抑制炎症和抗体形

7、成有发生器官内癌症的倾向有发生淋巴网状内皮细胞肿瘤的倾向抗原及弗氏佐剂共同免疫动物可诱导产生器官特异性抗体动物被刺激后不产生抗体12器官特异性和器官非特异性的特征性区别器官特异性器官非特异性自分类疾病结缔组织系统性红斑狼疮、干燥综合征、类风湿性关节炎、混合性结缔组织病内分泌系统桥本甲状腺炎、Graves病、Addison病、胰岛素依赖性糖尿病消化系统萎缩性胃炎、溃疡性胃炎、原发性胆汁性肝硬化血液系统恶性贫血、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜心血管系统风湿性心肌炎泌尿系统肾小球肾炎呼吸系统特发性肺纤维化神经系统重症肌无力、多发性神经炎皮肤荨麻疹按发病部位的解剖系统分类13分类疾病结缔

8、组织系统性红斑狼疮、干燥综合征、类风湿性关节炎、1414（一）自身抗原形成分子模拟四、自身免疫病的发病机制隐蔽抗原的释放自身抗原改变15（一）自身抗原形成分四、自身免疫病的发病机制隐蔽抗原的释放自多克隆激活（二）免疫系统发育和免疫调节异常胸腺 骨髓 功能异常Th1和Th2细胞功能失衡16多克隆激活（二）免疫系统发育和免疫调节异常胸腺 （三）遗传因素17（三）遗传因素171.自身抗体的作用 （四）AID的病理损伤机制抗血细胞表面抗原的抗体 181.自身抗体的作用 （四）AID的病理损伤机制抗血细胞表面1.自身抗体的作用抗细胞表面受体抗体 重症肌无力 191.自身抗体的作用抗细胞表面受体抗体 重症

9、肌无力 抗细胞表面受体抗体毒性弥漫性甲状腺肿（Graves病）发病机制示意图20抗细胞表面受体抗体毒性弥漫性甲状腺肿（Graves病）发病机自身抗体抗核抗体肾小球、关节、皮肤和其它多种器官的毛细血管壁结合循环中的核抗原 多部位脉管炎 系统性红斑狼疮形成可溶性抗原抗体IC 反复沉积1. 自身抗体的作用： 自身抗体及相应抗原形成的免疫复合物 21自身抗体抗核抗体肾小球、关节、皮肤和结合循环中的核抗原 2. 自身应答性T淋巴细胞作用 针对自身抗原发生免疫应答的T细胞可引起组织 损伤，这类疾病属于型超敏反应引起的疾病。 3. 巨嗜细胞和NK细胞的作用 巨噬细胞在AID的组织损伤中也起重要作用。巨噬细胞

10、被细胞因子激活后，就具有细胞毒作用。 （四）AID的病理损伤机制返回章目录222. 自身应答性T淋巴细胞作用（四）AID的病理损伤机制返回 抗核抗体（antinuclear antibody，ANA): 是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称； 在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质，激发机体产生许多抗不同核成分的抗体；第二节 自身免疫性疾病的免疫学检查一、抗核抗体测定23 抗核抗体（antinuclear antibody，ANAANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA无器官特异性和种属特异性；ANA主要存在于血清中；将检出ANA作为AID存在的依据。24ANA主

11、要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；24 抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗组蛋白抗体(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、 抗H3、抗H4抗体等 抗非组蛋白抗体：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、 抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗体、 AnuA、抗DNP、抗DE多肽抗体、抗DM53抗体 抗RANA抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等 抗核仁抗体：抗PM-Scl抗体、抗Th/To抗体、 抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗体等（一）ANA的类型和临床意义 ANA谱25 抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗s 抗天然DN

12、A (native DNA,nDNA) 抗体，又称抗双链DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗体。抗变性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗体，又称抗单链DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗体。对SLE有高特异性;SLE诊断标准之一。缓解期降低70%90%SLE活动期增高药物疗效抗dsDNA抗体 抗DNA抗体26 抗天然DNA (native DNA,nDNA) 抗体， 抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）： 由H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都 有特异性抗体；AHA检出百分

13、率抗dsDNA507090100药物诱导性狼疮只能检出此SLEAHAAHA抗组蛋白抗体27 抗组蛋白抗体（anti-histonic antibod 可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen,ENA) 是盐水可提取性核抗原的总称，是非组蛋白的核蛋 白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量的RNA和多 肽组成。抗ENA抗体28 可提取性核抗原 (extractable nuclear对风湿病有特异诊断价值的有以下七种： 抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗体； 抗Sm抗体； 抗SSA抗体； 抗SSB抗体； 抗Scl-70抗体； 抗Jo-1抗体； 抗核糖体抗

14、体 。29对风湿病有特异诊断价值的有以下七种：29抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP)抗原由DNA和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性和可溶性两种，可分别产生相应的抗体。 检出百分率抗DNP20406080 SLE非活动期 SLE活动期抗不溶性DNP抗体抗DNP抗DNP100RA滑膜液中抗DNP抗可溶性DNP抗体抗DNP抗体30抗DNP抗体（抗核蛋白抗体）：核蛋白(DNP)抗原由DNA和 抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是细胞核染色质的基本单位; 细胞凋亡而致核小体大量蓄积， 诱导B细胞产生的AnuA是SLE 特异性的标志抗体。抗dsDNA抗体

15、 抗核小体抗体 抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性率为60%80%，特异性97%。 抗核小体抗体31 抗核小体抗体（anti-nucleosome anti 常见AID的ANA阳性检出率疾病ANA（%）疾病ANA（%）SLE95SS7080MCTD95PM/DM30PSS8595RA203032 常见AID的ANA阳性检出率疾病ANA（%）疾病ANA（%（二）ANA的检测方法 将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。 形成胞核基质ANA抗人Ig FITC1.荧光免疫法33（二）ANA的检测方法 将患者血清先进行稀释，可以做定量试验抗核抗

16、体核型及相关疾病核型荧光图形抗体相关疾病周边型核周环状荧光抗dsDNASLE、慢活肝炎均质型核呈均质荧光抗DNA、AHA、 AnuASLE、RA、PSS、慢性肝病斑点型核内颗粒状荧光抗ENAMCTD、SLE、PSS、SS、PM核仁型核仁有荧光抗核仁抗体PSS、雷诺现象、SLE着丝点型核浆细小相同颗粒荧光抗着丝点PSS、CREST综合征34抗核抗体核型及相关疾病核型荧光图形抗体相关疾病周边型核周环状均质型抗核抗体核型着丝点型核仁型斑点型35均质型抗核抗体核型着丝点型核仁型斑点型35例：间接免疫荧光法（IIF法） 测定抗dsDNA抗体 短膜虫的动基体内含有大量纯的 dsDNA，无其他抗原干扰，可用

17、 作基质来测定抗dsDNA抗体。 短膜虫替换小鼠肝切片或肝印片或 Hep2，制成抗原基质抗dsDNA抗人IgG FITC, 阳性结果可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。 测定抗dsDNA抗体具有特异性强、敏感性高的优点。36例：间接免疫荧光法（IIF法） 短膜虫的动基体内含有大量纯的 用ELISA间接法检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。2. ELISA法37 用ELISA间接法检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳待检血清按分子大小分开不同区带 分离转印NC膜上抗ENA及膜上相应抗原带结合抗人IgGHRPNCENA抗ENA抗人IgGHRP显色3. IBT法3

18、8SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳待检血清按分子大小分开不同区带 类风湿因子(rheumatoid factor,RF): 是抗变性IgG的 自身抗体，为19S的IgM，也可见7S的IgG和IgA。 及人变性IgG结合，不及正常IgG发生凝集反应。 RF出现在类风湿性关节炎（RA）患者中，约70% 90%的血清中和约60%的滑膜液中可检出IgG类RF；二、类风湿因子测定39 类风湿因子(rheumatoid factor,RF): IgG类抗体及相应抗原结合后，即发生变性； 在炎症过程中也可发生IgG变性，构成自身抗 原，刺激免疫系统产生各种抗IgG抗体； 滑膜液中的IgG类RF及变性IgG结合形成中

19、等 大小的IC，比血清中IgM类RF更易致病。40 IgG类抗体及相应抗原结合后，即发生变性；40（一）RF检测方法1 RF检测最常采用的试验方法。 将IgG吸附在聚苯乙烯胶乳颗粒上作为诊断试剂，及待检血清中的RF结合，出现胶乳凝集颗粒。但此法的灵敏度和特异性均不高，而且只能检出血清中的IgM类RF。间接胶乳凝集试验41（一）RF检测方法1 RF检测最常采用的试验方法。间2 将待检血清稀释成一定浓度，再加入定量变性IgG诊断试剂，立即用透射比浊或速率散射比浊仪测定血清中的RF。此法具有速度快、敏感性高（达ng/L水平）、精密度高（CV5%）、稳定性好、能定量分析的优点，但仍局限在IgM类RF的

20、检测。 免疫比浊法422 将待检血清稀释成一定浓度，再加入定量变性IgG诊断试3 IgM、IgG和IgA类RF需要用RIA法或ELISA法等方法检测，但前者有放射性污染，故临床上多采用ELISA间接法或双抗原夹心法进行测定。 ELISA法433 IgM、IgG和IgA类RF需要用RIA法或E（二）临床应用常见AID的RF阳性检出率疾病RF（%）疾病RF（%）干燥综合征95结节性多动脉炎50类风湿7090系统性红斑狼疮30硬皮病/皮肌炎80混合性结缔组织病25RF在诊断RA患者时并非特异的，也非唯一标准。慢性活动性肝炎及老年人均可有不同程度的阳性率。 44（二）临床应用常见AID的RF阳性检出率

21、疾病RF（%）疾病R三、其他自身抗体测定自身抗体的类型、检测方法及临床意义自身抗体类型检测方法临床意义抗甲状腺球蛋白抗体(A-TG)荧光免疫法、ELISA、RIA桥本甲状腺炎抗甲状腺过氧化物酶抗体,)ELISAGraves 病,桥本甲状腺炎抗乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)ELISA、RIA重症肌无力抗平滑肌抗体(SMA)荧光免疫法、ELISA、RIA自身免疫性肝炎,慢性活动性肝炎,原发性胆汁性肝硬化抗线粒体抗体(AMA)荧光免疫法、ELISA、RIARA,SS,SLE,原发性胆汁性肝硬化,慢性活动性肝炎,持续性肝阻塞抗胃壁细胞抗体荧光免疫法恶性贫血抗胰岛素抗体（IAA）ELISA胰岛素依赖性糖尿病抗精子抗体（AsAb）ELISA、荧光免疫法不育症,不孕症抗红细胞抗体直接凝集试验、Coombs试验新生儿溶血,自身免疫性溶血性贫血抗血小板抗体ELISA法、ABC-ELISA法原发性血小板减少性紫癜、输血史抗心磷脂抗体（ACA）RIA、ELISASLE,血栓,自发性流产,血小板减少抗肾小球基底膜抗体(GBM-Ab)荧光免疫法Goodpasture综合征,狼疮肾炎返回章目录45三、其他自身抗体测定自身抗体的类型、检测方法及临床意义自身抗1.筛选试验及确诊性试验的合理组合；2.结合临床症状选择性检测相关的自身抗体；3.切忌盲目的全面