黄芩酶解最佳工艺条件的正交实验筛选

1、黄芩酶解最正确工艺条件的正交实验挑选【关键词】正交设计；,黄芩；,酶解；,黄芩苷摘要：目的以黄芩苷为指标，优化黄芩酶解提取的最正确工艺条件。方法运用正交设计挑选酶解参数。以高效液相色谱法测定黄芩苷，并计算其收率。结果当复合酶用量为底物的1，保温沉淀时间1.5h，提取温度50，提取时间2h时，黄芩苷收率达17.2%。结论在优化的酶解条件下，黄芩苷的收率最高。该研究为黄芩苷提取物的制备提供了一种新方法。关键词：正交设计；黄芩；酶解；黄芩苷TheptiuExtratinTehnlgyfBaialinfrRadixSutellariabyEnzyatiHydrlysisAbstrat：bjetiveT

2、ptiizetheextratinpressfbaialinfrSutellariabaialensisnthenditinfenzyatihydrlysis.ethdsTptiizebytherthgnaldesign，andtdeterinethententfbaialinbyHPL.ResultsTheptiuextratinnditinasbtainedasflls:theratifenzye/substrateas1%,thetiefenzyatihydrlysisas2hattheextratinteperaturef50,andkeptat80fr1.5hafteradjusti

3、ngthepHvaluet2.0.nlusinTheneethdisdevelpedfrpreparingthebaialinextrat.Keyrds：rthgnaldesign;SutellariabaialensisGe.;Enzyatihydrlysis;Baialin黄芩为唇形科植物SutellariabaialensisGe.的枯燥根，性寒味苦，具有清热燥湿、泻火解毒的成效。黄芩苷(baialin)是黄芩中的主要有效成分。现代药理研究说明：黄芩苷具有清热解毒、抗炎利胆、保肝、抗氧化和抗肿瘤等功能，在临床上被广泛应用1。中药材有效成分往往被包裹在细胞壁内，在药用植物有效成分提取过程中

4、，选用适当的酶作用于药用植物材料，可以使细胞壁及细胞间质中的纤维素、半纤维素、果胶质等物质降解，破坏细胞壁的致密构造，减小细胞壁和细胞间质等传质屏障对有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力，从而有利于有效成分的溶出2。目前，黄芩苷的提取工艺多以水提为主，运用生物酶解进展提取的报道不多。为寻找酶解提取最正确工艺、进步黄芩苷的产率和纯度、减轻后处理的负担，本文运用正交设计全面考察了酶用量、提取时间和温度、保温沉淀时间等因素及其交互作用对黄芩苷收率的影响。1材料与方法1.1仪器美国安捷伦公司Agilent1100型高效液相色谱仪(包括四元泵,真空脱气机,自动进样器,柱温箱DAD检测器),Agilen

5、t1100化学工作站；上海安亭科学仪器厂AnkeLXJ-B型离心机；上海跃进医学仪器厂数显式恒温水浴锅。1.3方法1.3.1黄芩药材前处理由于黄芩中黄芩苷酶的存在，提取前假设未先除酶，潮湿下的黄芩粉在32恒温5h，那么黄芩苷完全酶解，形成很不稳定的邻三羟基黄酮，极易氧化变成绿色醌类衍生物，影响黄芩苷含量的提取3。本实验采用的复合酶最正确提取温度为2555。为此，在进展实验前宜先将黄芩原药材粉碎，通过热蒸气加热30in,以便“杀酶保苷，防止原料中黄芩苷酶对黄芩苷提取的影响。1.3.2黄芩酶解工艺步骤将黄芩药材粉碎后，通过热蒸气加热30in灭酶，再参加10倍水和适量的复合酶，按表1和表2设计的技术

6、参数提龋将提取液转移至离心杯中，5000r/in离心15in，取上清液，加盐酸调pH值为2，在80保温，使黄芩苷析出。过滤，沉淀物用水洗至pH=5.0,冻干，即得黄芩苷粗提物。转贴于论文联盟.ll.1.3.3正交实验设计方案4因素程度见表1。表1黄芩酶解工艺因素程度略1.4黄芩苷含量测定51.4.1色谱条件色谱柱BEKAN18(4.6250,5)；流动相为甲醇水醋酸47530.2；流速1.0l/in，检测波长280n，进样量10l。1.4.2标准曲线的制备精细称取黄芩苷标准品5g，于25l容量瓶中加甲醇溶解、定容。再分别取2，4，5，6，8l置于10l容量瓶加甲醇至刻度。分别取10l，按上述色

7、谱条件测定峰面积，以对照品进样量(g)为横坐标(X)，以峰面积值为纵坐标(Y)进展线性回归，得回归方程及线性范围为：Y=3106X+1517.4r=0.9993。2结果正交实验结果见表2。由表2可以看出，影响黄芩苷收率的因素依次为：DAB极值R的排列顺序。黄芩苷最正确酶解工艺为表2中的第2号实验：A1B22D2，即酶用量为底物的1，加热提取温度50，提取时间2h，保温沉淀时间1.5h时，可得到最大的黄芩苷收率17.2。表2酶解黄芩工作安排表略黄芩苷收率%=100黄芩粗提取物的质量黄芩粗提物中黄芩苷百分含量/黄芩提取前质量3讨论本文针对酶解工艺在黄芩提取的实际应用中运用较少、工艺不成熟的现状，将

8、酶解工艺引入到黄芩的提取中，应用含有多种酶的复合酶，充分发挥酶解优势，对黄芩的酶解提取进展了研究。运用正交实验确定了黄芩苷最正确酶解工艺。为黄芩酶解工艺的中试放大提供了一定的参考根据，但由于投料量较少，在实际消费中还有待验证。此外，由于黄芩自身的酶解，第1步采用蒸气加热以“杀酶保苷是必要的。在提取中本文没有进展二次提取，主要是考虑到在实际消费中一般均不采用二次提取，同时也是为了便于酸沉淀、抽滤、洗酸等工艺过程。因为洗酸过程要反复进展34次，本方法可以缩短消费周期和减少酸的用量，进步酶解工艺的实用性。黄芩苷2上的羟基易成盐，在酸性条件下黄芩苷分子就被复原出来，但这种反响要求的反响温度较高，假设在低温条件下非常缓慢。因此黄芩苷滤液加酸后，80保温是非常重要的条件，直接其影响收率6。考虑到在实际工业消费中的可操作性，保温时间不宜过长，为此本文尝试选取保温时间12h。结果说明1.5h为最正确。在最后一步的水洗调pH时，可选择水洗或醇洗。从经济角度来说，水洗较佳。参考文献：1刘青云.中药药理学.北京：人民卫生出版社，1997：41.2梅景良.高效液相色谱法在黄连解毒药剂质量检测上的应用J.福建畜牧兽医，2022，271:21.3余洪波,张晓昱.酶法在中药提取中的研究进展J.中成药，2022,275：591.4杨中林，卢凤兰