实验淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

1、关于实验淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测第1页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三实验目的:1.制备固定化a-淀粉酶2.进行淀粉水解的测定第2页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三知识回顾：1、在果汁生产中利用_，可以提高果汁的产量和质量，其原理是_。2、洗衣粉中添加_，可以更有效地清除顽渍。常用的酶制剂有_四类。第3页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三1、酶制剂的概念和种类（一）酶制剂含有酶的制品定义：多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶种类：A、液体酶制剂治疗某些胃病的胃蛋白酶液B、固体酶制剂第4页，共23页，2022年，5月

2、20日，22点17分，星期三2、酶的生产提取法定义：采用一定的技术直接从动植物或微生物的组织、细胞中将酶提取出来优点：简单易行，在动植物或微生物资源丰富的地区具有应用价值实例：在屠宰厂，可以从家畜胰脏中提取出胰酶；在水果加工厂，可以从菠萝皮中提取出菠萝蛋白酶缺点：要有充足的原材料，广泛应用受到限制第5页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三发酵法常用方法定义：通过微生物发酵获得所需要的酶。如果是胞外酶，可以从发酵液中直接提取；如果是细胞内酶，则可将细胞弄碎再经过提取纯化而得到。易培养、繁殖速度快、便于大规模生产。优点：提取方式：第6页，共23页，2022年，5月20日，22点

3、17分，星期三在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模使用酶制剂，说明酶制剂使用有很多优点，你能思考后举出一些吗？催化效率高、低能耗、低污染等。酶制剂的使用有缺点吗？3、酶制剂的优点第7页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三4.酶在应用过程中存在的问题天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本反应后，酶会混在产物中，影响产品质量，难以在工业生产中广泛应用针对酶的特点，如何在生产实践中加以应用？固定化酶：将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。第8页，共23页，2022年

4、，5月20日，22点17分，星期三 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活； 2、溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本； 3、反应后会混在产物中，可能影响产品质量。(难分离）4、酶制剂的缺点第9页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三1、固定化酶技术。即将酶固定在一定空间内的技术（如固定在不溶于水的载体上）。2、固定化酶技术的优点：（1）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；（2）固定在载体上的没可以被反复利用。（二）固定化酶第10页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三类型优点不足直接使用酶催化效率高，低耗能、低污染等对

5、环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量固定化酶酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的 直接使用酶和固定化酶的优缺点第11页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三三、 酶的固定化方法1、物理吸附法：将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性碳、多孔玻璃等2、包埋法：将酶包裹在多孔的载体中，包埋成格子型或包埋成微胶囊型3、化学结合法：将酶分子相互结合，或将其结合到纤维素

6、、琼脂糖，离子交换树脂等载体上的固定方式交联法和共价偶联法第12页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三 酶物理吸附法交联法包埋法酶的固定化方法共价偶联法第13页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三实验原理：本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成淀粉-淀粉酶糊精B淀粉酶葡萄糖糖化淀粉酶麦芽糖这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为5075；最适PH为5.57.5遇碘显蓝色遇碘显红色遇碘不显色四、“-淀粉酶固定化”实验实验目的：1、

7、制备固定化的-淀粉酶 2、检测固定化-淀粉酶的效果第14页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三设备及用品：5ml塑料注射器 50ml烧杯 滴管 自行车用气门心及夹子 注射器架 试管及微量离心管3支实验材料:1、a-淀粉酶的固定化：在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。由于酶不纯，可能有些不溶物。再加入5g石英砂，不时搅拌，30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml)。用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器，流速为1ml/min。2、可溶性淀粉溶液：取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。3、5mmol/L KI-I2溶液：称

8、取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中。除去未吸附的游离淀粉酶第15页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三反应柱固定化酶气门心夹子5ml注射器第16页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三步骤:1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱.在流出5ml后接收0.5ml流出液,加入12滴KI-I2溶液,观察颜色.用水稀释1倍后再观察颜色.反应柱固定化酶气门心夹子5ml注射器淀粉第17页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三2.实验后,用10倍柱体

9、积的蒸馏水洗涤此柱,放置在4冰箱中,几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果.第18页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三课后练习 1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶?2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途?可在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。第19页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三1、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（ ）A、温度 B、PHC、水分 D、营养D第20页，共23页，2022年，5月20日，22点17分，星期三2、目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自A、化学合成 B、动物体内 C、植物体内 D、微生物体内 D第21页，共23页，2022年，5月20日，