稀碱法提取课件

1、关于稀碱法提取第一张，PPT共十一页，创作于2022年6月实验目的1. 学习稀碱法提取RNA的原理和操作方法2. 掌握RNA组分的鉴定方法第二张，PPT共十一页，创作于2022年6月原 理 酵母中含有丰富的RNA(可达酵母干重的2.67%10%），是工业上大规模制备核酸和核苷酸的原料。稀碱法是工业上常用的RNA提取方法之一，其原理是用稀碱溶液裂解细胞，使RNA释放到碱液中，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH至2.5利用等电点沉淀RNA.第三张，PPT共十一页，创作于2022年6月 RNA用H2SO4水解时，可以生成磷酸戊糖和碱基，以下列反应鉴定各种成分。磷酸：用强

2、酸使RNA中的有机磷消化生成无机磷，后者与定磷试剂中的钼酸铵结合成磷钼酸铵（黄色沉淀），当有还原剂存在时磷钼酸铵立即转变成蓝色的还原产物钼蓝；核糖：RNA与浓盐酸共热时，发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，在 或 催化下后者与苔黑酚反应，生成鲜绿色复合物；嘌呤碱：嘌呤碱与AgNO3能产生白色的嘌呤银化物沉淀。第四张，PPT共十一页，创作于2022年6月器材和试剂1.器材：沸水浴，量筒，刻度移液管，吸管及滴管，布氏漏斗和抽滤装置，试管，试管架和试管夹，离心机，滤纸，pH试纸，烧杯，天平，酵母粉。第五张，PPT共十一页，创作于2022年6月2.试剂0.2%（m/V）NaOH溶液95%（V/V）乙醇

3、冰乙酸无水乙醚1.5mol/L H2SO4 溶液浓氨水5%（m/V）AgNO3 溶液苔黑酚乙醇溶液称取苔黑酚6g，溶解于95%乙醇100mL(冰箱中可保存一个月） 的浓盐酸溶液取10%（m/V） 溶液2mL，与浓盐酸400mL混合。 第六张，PPT共十一页，创作于2022年6月定磷试剂1）17%（m/V）H2SO4 溶液2）2.5%（m/V）钼酸铵溶液3）10%（m/V）抗坏血酸溶液（贮藏于棕色瓶中，溶液在冰箱放置可用1个月。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则已失效。）临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合（限当天使用）17% H2SO4：2.5%钼酸铵：水：10%抗坏血酸=1:1:2:1

4、(V/V)第七张，PPT共十一页，创作于2022年6月实验步骤1.RNA的粗提取取酵母粉1g，放入一大试管中，加入0.2%NaOH溶液10mL，摇匀成悬浮液。将悬浮液在沸水浴中加热20分钟，冷却至室温，倾入离心管中，3000r/min离心10分钟。将上清液缓缓倾入含3mL95%乙醇的试管中，注意要一边搅拌一边倾入，用冰乙酸调pH至2.5。静置，待RNA完全沉淀后，3000r/min离心5分钟。第八张，PPT共十一页，创作于2022年6月弃去上清液，向离心管中加入95%乙醇5mL，振荡摇匀以洗涤沉淀，3000r/min离心3分钟，再弃去上清液，管底部的沉淀即为RNA粗制品。2.水解RNA 向上述含有RNA沉淀的离心管中加入 1.5mol/LH2SO4 溶液10mL，振荡摇匀后转入到一大试管中，沸水浴中加热10min，使RNA水解，过滤水解液，滤液用于RNA组分的定性鉴别。3.RNA组分鉴定嘌呤碱 取一支试管，加入水解液1mL，浓氨水2mL，混匀后沿管壁慢慢加入5%的AgNO3 溶液1mL，勿振荡，静置5min，观察是否产生白色絮状嘌呤银化物沉淀。第九张，PPT共十一页，创作于2022年6月核糖 取试管一支，加入水解液1mL，再加入 的浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液5滴，在通风橱中沸水浴加热5分钟，观察试管中颜色变化。磷酸 取试管一支，加入水解液1mL