Pristane诱导BALB狼疮鼠模型制作步骤及方法

1、Pristane诱导BALB/c狼疮鼠模型制作步骤及方法复制方法10周龄雌性BALB/c小鼠，经其腹腔一次性注射降植烷, 然后小鼠常规饲养，自由饮水和进食。在小鼠注射Pristane前及注射 后每月作一次小鼠尿蛋白测定，依据反应区显色程度判断尿蛋白阴性 (-)：Omg/L ；(士)：150 300mg/L ；+) ：300mg/L ；+) ：1000mg/L)； (+ +) : 3000mg/L ； (+ + + +) ；20000mg/L。注射前、注射后 2 周及 每月一次尾静脉取血作血清ANA与抗dsDNA抗体测定。ANA测定 使用包被人喉癌上皮细胞(human epithelial tu

2、mor Line Hep-2)、猴 肝冰冻切片的双抗原片，抗 dsDNA 抗体测定采用包被绿蝇短膜虫抗 原片。反应区加入不同稀释度的待测血清25M并设阴性及阳性血清 对照，室温反应30min,用PBS冲洗1s后再用PBS浸泡10min ；加 入1:50稀释的50卩1异硫氰酸荧光素(FITC)-标记的兔抗鼠Ig抗体，室 温反应30min ；然后再用PBS冲洗1s, PBS浸泡10min ；甘油封片， 置荧光显微镜下观察。 ANA 检测结果判断:低于 1:100 血清稀释 度无可见荧光核型，结果为阴性；1:100或更高血清稀释度可见荧光 核型，结果为阳性。抗 dsDNA 抗体检测结果判断:绿蝇短膜

3、虫动基 体没有荧光，结果阴性；仅细胞核或基体(鞭毛的基体)或胞浆出现荧 光结果亦为阴性。绿蝇短膜虫动基体可见清晰的均质型、部分环状的 荧光，与阳性对照血清所见的荧光模型相同，结果为阳性。注射后8 个月时处死动物。取小鼠肾脏于4Og/L多聚甲醛固定72h，作常规组 织切片，HE染色，光镜下观察。模型特点 肉眼观察大多数模型小鼠的腹腔内可见各脏器根部、肠 系膜上附有点状或块状物质，白色质硬，病理切片证实为反应性增生、 钙化，中心为注射的pristane，周围有大量脂肪细胞和炎性细胞层层 包围；个别小鼠可见脾脏肿大及出现大量腹水。注射后1 个月模型小 鼠开始出现蛋白尿，多为或+；蛋白尿的阳性率和尿蛋

4、白量呈渐进性 增加，至8个月时有62.5的小鼠出现不同程度的尿蛋白。注射后3 个月时模型小鼠即可出现ANA，8个月时ANA阳性率达87.5%，滴 度范围为1：1001： 3200,核型以斑点型、核仁型、均质型为主。 注射后4个月时模型小鼠开始出现抗dsDNA抗体，但滴度较低，至 5 个月时滴度和阳性率明显提高；8 个月时，阳性率可达47.8%，滴 度为1 ：101： 100。镜下病理组织学观察显示，模型动物肾脏HE 染色切片中部分肾小球体积增大，毛细血管襻细胞增生、层数增多， 球囊壁增厚，个别肾球囊与球内细胞间隙消失；部分肾小管上皮细胞 增生并可见水样变性，胞核嗜酸性染色增强，管腔内可见蛋白管

5、型； 间质有散在淋巴细胞浸润及纤维组织增生。免疫荧光染色显示，模型 小鼠肾小球系膜毛细血管襻可见免疫复合物沉积，荧光分布呈连续性 肾小球轮廓清晰。抗dsDNA抗体与蛋白尿之间存在相关性。模型制 作方法简便，条件容易控制，动物死亡率低，患病时间较长，模型病 理特征较为明显。比较医学 临床上系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus,SLE)病因较为复杂，治疗效果不佳，易反复发作，有的致死率。通常认为，本病发生与遗传、环境、性激素、感染等因素相互作用有关，其中遗传因素占主要地位。由于SLE动物模型是研究本病的发病原因、 发病机制及临床治疗的重要手段，以往研究报道已通过遗传性狼疮鼠 模型的建立，从基因水平证实了遗传因素的致病性。近年来，有研究 通过在非自身免疫性小鼠如SL、BALB/c By、C57BL等小鼠品系中 使用异十八烷、姥鲛烷、降植烷(Pristane)次性腹腔内注射，发现SJL 小鼠无抗 dsDNA 抗体出现，也无抗核内核糖体蛋白 /Sm 抗原 (mRNP/Sm)抗体出现，却出现了抗核糖体蛋白(RibP)抗体，其肾脏损 害类似人类狼疮性肾炎的病理变化；而 BALB/c By 小鼠则产生了狼 疮非特异性及特异性自身抗体(ANA、抗nRN P/Sm抗体)，出现免疫 复合物性肾小球肾炎及关节炎。证实采用一次性腹腔注射Pristan