分析化学实验讲义 150311

1、分析化学实验教案张会宜实分析化学实验要求一 按指定时间到达实验室，找到相应的实验台。实验台标有实验台号，一般要求学号和实验台号一致，实验台确定后不得随意变动。二 清点玻璃仪器，并把当日实验所需仪器摆放在实验台上。实验两人一组。两人一套玻璃仪器，存放在单数实验台所对应的实验橱内。玻璃仪器具体如下：1酸式、酸式滴定管各一支，在实验台的滴定台上，2洗瓶一，放在试剂架上，以上器皿实验结束后放回原处，不要放到厨子里。其他玻璃仪器放在厨子内，在厨门内侧贴有清单，验前后要认真核对，实验结束后放回厨内。三 签到。每次实验课结束离开实验室前，同学们要在签到本上相应的位置签名，以签名作为考勤依据。注意，签名位置要

2、和自己的实验台号一致。因为玻璃仪器多个班级共同使用，实验前后都要认真清点，果发现仪器数量不符，要酌情扣相应同学的成绩，按签到本的位置进行责任追究。四 实验前认真预习，对实验原理、操作做的心中有数，必要时谢预习报告；实验中按规范操作，认真记录。不得喧哗。实验产生的垃圾放到垃圾桶里，不得随意丢弃；实验结束后，清洗玻璃仪器，放回原来的位置，并整理实验台。五 各班长安排值日生负责实验室卫生，经检验合格后方可离开实验室。验一、滴定分析基本操作练习一、实验目的1. 练习滴定操作，初步掌握准确确定滴定终点的方法。2. 练习酸碱溶液的配制和浓度的比较。3.熟悉甲基橙和酚酞指示剂的使用和终点的变化。初步掌握酸碱

3、指示剂的选择方法。二、实验原理用强酸滴定强碱时，随着酸的加入，pH值不断降低，但这种降低不是均匀的，滴定终点附近有一个pH值突跃，选择合适的酸碱指示剂，可以准确判断滴定终点。用强碱滴定强酸的情况与此类似，只是pH值不断变高。酸碱指示剂都具有一定的变色范围。0.1molL-1NaOH和HCl溶液的滴定,(强碱与强酸的滴定)突跃范围为pH410，应选用在此范围内变色的指示剂，如甲基橙和酚酞。浓盐酸易挥发，固体NaOH容易吸收空气中水分和CO2，因此不能直接配制准确浓度的HCl和NaOH标准溶液，只能先配制近似浓度的溶液，然后用基准物质标定其准确浓度。本实验是操作练习，酸碱溶液配成近似浓度即可，溶解

4、用水可以用自来水来替代蒸馏水。玻璃仪器的洗涤试剂瓶、锥形瓶、烧杯、量筒、先用自来水冲洗，用刷子蘸点洗衣粉直接刷，再用自来水冲洗干净，洗到内壁不挂水珠，再用洗瓶里的蒸馏水从上往下冲洗三次。滴定管、容量瓶、吸管等，如没有明显油污的可直接用自来水冲洗。若有油污，则用铬酸洗液或洗衣粉水洗涤，每次倒入10至15ml于滴定管中，两手平端滴定管，并不断转动，直到洗液洗遍管的内壁为止。然后打开旋塞，将洗液放回原瓶中。滴定管先用自来水冲洗干净，洗到内壁不挂水珠，再用洗瓶里的蒸馏水从上往下冲洗三次。在装入标准溶液前，先用待装的标准溶液润洗滴定管三次（每次510ml）横持滴定管慢慢转动，使装入的标准溶液洗遍管的内壁

5、，然后放出。（目的是把管内残留水分洗去，使配制的溶液不会被稀释）三、仪器与试剂1. 仪器粗电子天平、500ml试剂瓶2个 、洗瓶一个、250ml锥形瓶3个、500ml烧杯2个、10ml量筒1个、25ml酸式滴定管一支、25ml碱式滴定管一支2.试剂NaOH固体、HCl 6 molL-1、酚酞（0.2%乙醇溶液）、甲基橙（0.2%水溶液）四、实验步骤及注意事项1、溶液的配制1）配制0.1molL-1 HCl溶液300 ml：（浓HCl为12 molL-1）本实验室准备的是6 molL-1，根据C1V1= C2V2 6V1= 0.1300V1=5 ml， 用6 mol/L的盐酸稀释到300ml，存

6、放于试剂瓶中。2）配制0.1molL-1 NaOH溶液300 ml： 用粗天平称取m= 0.1300/100040=1.2g 固体NaOH，加水300ml，存放于试剂瓶中。3）取清洗干净的酸碱滴定管各一支，用配好的HCl、NaOH溶液分别将管内壁洗23次（每次510ml）后，分别装满HCl、NaOH溶液，分别将两管液面调节至零（0.00）刻度。3、以甲基橙为指示剂，用HCl溶液滴定NaOH溶液：取250 ml锥形瓶一个，洗净后放在碱式滴定管下，以每分钟10 ml的速度放出大约20 ml NaOH溶液于锥形瓶中，加入1滴甲基橙指示剂，用0.1 molL-1 HCl溶液滴定至溶液由黄色变橙色。再滴

7、入少量NaOH溶液，溶液由橙色又变成黄色，再由酸式滴定管中滴加少量HCl溶液，使溶液由黄色再变为橙色即为终点。如此反复练习滴定操作和观察终点，直到半滴之差就能观察颜色的明显变化。读准最后所用HCl和NaOH溶液的毫升数，并求出滴定时两溶液的体积比VHCl/VNaOH。平行滴定三份，计算平均结果和相对平均偏差，平均值是取3次体积比的平均值。 以酚酞为指示剂，（8.010.0）用NaOH溶液滴定HCl溶液：取锥形瓶一个放出约20mlHCl，加一滴酚酞指示剂，用0.1 molL-1 NaOH溶液滴定至溶液由无色变为微红色，再滴入少量HCl溶液，溶液由微红色又变为无色，再由碱式滴定管中滴加少量NaOH

8、溶液, 使溶液由无色再变为微红色即为终点。如此反复练习滴定操作和观察终点，直到半滴之差就能观察颜色的明显变化，读准最后所用HCl和NaOH溶液的毫升数，并求出滴定时两溶液的体积比VNaOH/VHCl。平行滴定三份，计算平均结果和相对平均偏差，平均值是取3次体积比的平均值。*注意事项1、在洗滴定管之前，检查酸碱管是否有漏液的现象，如漏或旋塞不灵活，可涂少量凡士林油，取出旋塞用滤纸吸干水分，沿圆周均匀地涂在旋塞的两头，千万不要把孔给堵住，涂薄薄一层，不要过多，如碱管漏，换胶管，或换玻璃珠。如图2-192、装入溶液将管尖处的空气赶掉，否则在滴定过程中，气泡移气泡带走，影响读数。酸管可转动旋塞，使溶液

9、冲下排除气泡。对于碱管，一手拿滴定管成倾斜状态，另一手捏住玻璃珠所在部位的并使乳胶管向上弯曲，出口管斜向上，然后在玻璃珠部位往一旁轻轻捏乳胶管，使溶液从口喷出。如图2-203、使用碱管时，左手拇指在前，食指在后，捏住橡胶管中的玻璃珠所在部位稍上处，捏挤橡胶管，使溶液流出，决不能捏挤玻璃珠下方的橡皮管，否则空气进入，影响准确读数。4、读数a、读数时滴定管必须保持垂直状态。b、每次滴定前将液面调节在刻度零的位置上（因为上下刻度不均匀消除系统误差）对于无色或浅色溶液，应读取弯月面下缘最低点处，读取时，视线在弯月面下缘最低点处，与液面成水平，溶液颜色太深时，可读液面两侧最高点，注意初读数与终读数应采取

10、同一标准。 如图2-21 c、读数时，必须读到小数点后第二位，即要求估读到0.01 ml。d、装满溶液或放出溶液后应放置12分钟，使附在内壁上的溶液流下来以后再读数。五、数据处理 表一 酸滴定碱 序次记录项目123NaOH 终读数NaOH 初读数VNaOH ml ml ml ml ml mlHCl终读数HCl初读数VHClVNaOH / VHCl个别测定的绝对偏差相对平均偏差 表二 碱滴定酸 序次记录项目123NaOH 终读数NaOH 初读数VNaOH ml ml ml ml ml mlHCl终读数HCl初读数VHClVNaOH / VHCl个别测定的绝对偏差相对平均偏差思考题1.能否在分析天

11、平上准确称取固体NaOH直接配制标准溶液？为什么？2.在滴定分析实验中，滴定管、移液管为什么需要用操作液润洗几次？滴定中使用的锥形瓶和烧杯，是否也需要用操作液润洗？实验二、水的总硬度的测定一、实验目的学习EDTA标准溶液的配制及标定方法。了解水的硬度的测定意义和常用的硬度表示方法。掌握EDTA法测定水的硬度的原理和方法。掌握铬黑T等金属指示剂的应用，了解金属指示剂的特点。二、实验原理 1乙二胺四乙酸（简称EDTA）能和Ca2+Zn2+ Mg2+等许多金属离子按照1:1的比例络合，形成无色的EDTA金属络合物。Mn+代表金属离子，Y代表EDTA, 上述反应可用下式表示：Mn+ YMYn+。根据络

12、合反应到达终点，即金属离子完全被络合时所消耗的EDTA的量，推算出金属离子的量。 反之，也可以根据金属离子的量推算EDTA的量如何判断金属离子完全被络合了呢？需要用金属指示剂来指示。金属指示剂也能够和金属离子形成络合物，而且指示剂本身的颜色和指示剂与金属离子形成的络合物的颜色是不同的。（二甲酚橙指示剂本身显黄色，与Zn2+等的络合物呈紫红色，铬黑T指示剂本身显蓝色，与Zn2+等的络合物呈紫红色）同时，指示剂和金属离子的络合能力要比EDTA络合能力弱。用EDTA溶液滴定至近终点时，指示剂被游离了出来，溶液发生颜色改变。2、水的硬度主要是水中含有Ca2+和Mg2+离子形成的，其他金属离子如Al3+

13、、Fe3+、Mn2+、Zn2+、Cu2+等离子也形成硬度，但一般含量甚微，在测量硬度时可忽略不计。硬度有暂时硬度和永久硬度，水中的Ca2+、Mg2+的酸式碳酸盐加热能被分解出沉淀而除去，这种盐形成的硬度叫暂时硬度， Ca、Mg的其他盐类（如硫酸盐、氯化物等），经加热不能分解，这种盐形成的硬度叫永久硬度，暂时硬度和永久硬度的总和就是总硬度。测定水的总硬度一般采用络合滴定法，用EDTA标准溶液直接测定Ca、Mg总量，然后换算成相应的硬度单位。测Ca、Mg总量时，一般是在pH=10的氨性缓冲溶液中进行，用铬黑T做指示剂，等当点前，Ca、Mg和铬黑T形成紫红色的络合物，当用EDTA标准溶液滴定至等当点

14、时，游离出指示剂，溶液呈现铬黑T的纯蓝色。水中的Fe3+、Al3+、Mn2+、Zn2+、Cu2+等离子也会和EDTA络合而使结果偏高，要消除这些离子的影响。Mn2+ 、Fe3+、Al3+ 可用三乙醇胺掩蔽，用Na2S溶液掩蔽Zn2+、Cu2+等的干扰。 目前，我国采用德国硬度单位制，以“度（）”表示，一个硬度单位表示10万份水中含有一份CaO。可见1=10ppmCaO (ppm为百万分之几)。1、乙二胺四乙酸（简称EDTA）(H4Y表示)难溶于水，常温下其溶解度为0.2gL (约0.0007molL)，在分析中通常使用乙二胺四乙酸二钠盐配制标准溶液。乙二胺四乙酸二钠盐的溶解度为120gL,可配

15、成0.3molL以上的溶液，其水溶液的pH值约为4.8，通常采用间接法配制标准溶液。先配近似浓度的溶液，然后再用基准物标定EDTA，计算出准确浓度来。标定EDTA通常选用的基准物有Zn、ZnO、CaCO3等，通常选用其中与被测物组份相同的物质作为基准物，这样滴定条件较一致，可减少误差。当以Zn为基准物标定EDTA时，以二甲酚橙为指示剂。在pH5-6的溶液中，二甲酚橙指示剂本身显黄色，与Zn2+的络合物呈紫红色，EDTA与Zn2+形成更稳定的络合物，因此用EDTA溶液滴定至近终点时，二甲酚橙被游离了出来，溶液由紫红色变为黄色。3、仪器的使用和润洗吸管的使用吸管的种类较多，有分度的吸管称为吸量管；

16、无分度的吸管称为移液管，它的中腰膨大，上下两端细长，上端刻有环形标线，将溶液吸入管内使液面与标线相切再放出，则放出的溶液体积就等于管上标示的容积。如图2-25移液管应洗到内壁不挂水珠，将洗管插入洗液中（洗衣粉代替）用左手拿洗耳球，将食指或拇指放在洗耳球的上方，其余手指自然地握住洗耳球，用右手的拇指和中指拿住移液管标线以上部分，将洗耳球对准移液管口，将移液管尖伸入洗液吸取，吸至管积的1/3处，用食指按住管口，把管横过来，旋转着洗，然后将洗液放回原瓶，用自来水冲净，再用蒸馏水洗3次，为保证转移的溶液浓度不变，再用该溶液将移液管内壁洗23次。把管口插入溶液中，保持管口在液面以下用洗耳球把溶液吸至稍高

17、于刻度处，迅速用食指按住管口，取出吸管，使管尖端靠着瓶口，用拇指和中指轻轻转动移液管，让溶液慢慢流出，同时平视刻度，到溶液弯月面下缘与刻度相切时立即按紧食指，然后使准备接受溶液的容器倾斜成45，将移液管插入容器中，使移液管垂直，管尖靠着容器内壁，放开食指让溶液自由流出。如图2-26容量瓶的使用容量瓶是一种细颈梨形的平底玻璃瓶，带有玻璃磨口塞或塑料塞，如图2-23所示。颈上有标线，一般表示在200C时，液体充满标线时的容积。它主要是用来配制标准溶液或试样溶液的。通常有25mL、50mL、100mL、250mL、500mL、1000mL、2000mL等各种规格。容量瓶的准备容量瓶使用前应检查其是否

18、漏水，检查的方法如下：注入自来水至标线附近，盖好瓶塞，右手拿住瓶底，将瓶倒立，观察瓶塞周围是否有水渗出，如不漏水则可使用。容量瓶应洗涤干净。洗涤方法、原则与洗涤滴定管相同。洗涤的容量瓶内壁应为蒸馏水，均匀润湿，不挂水珠，否则要重洗。b.容量瓶的使用容量瓶中只盛放已溶解的溶液。如用固体物质准确称量后放入烧杯中加入少量纯水或适当溶剂使它溶解，然后定量地转移到容量瓶中。转移时玻璃棒下端要靠住瓶颈内壁，使溶液沿瓶壁流下。溶液流尽后，将烧杯轻轻顺玻璃棒上提，使附在玻璃棒烧杯嘴之间的液滴回到烧杯中，再用洗瓶里的蒸馏水冲洗烧杯数次，操作见图2-24。洗液一并转入容量瓶中。当溶液稀释至容积约2/3时，应将容量

19、瓶摇晃使其初步混匀，然后稀释至刻度。观察刻度时，眼睛的视线应与标线的最低点相切。盖好瓶塞，用食指压住瓶塞，另一只手握住容量瓶底部不断转动，待气泡上升至顶部时，再倒转摇动，如此反复十多次，使溶液充分混合均匀。热溶液应冷至室温后，才能注入容量瓶中，否则可造成体积误差。三、仪器与试剂1、仪器25ml酸式滴定管、250ml锥形瓶3个、500ml试剂瓶一个、移液管25ml、100ml各一支、250ml烧杯一个、100ml烧杯一个、天平、洗耳球、250ml容量瓶一个。2、试剂1）0.02mol.L-1EDTA标准溶液的配制：称取分析纯乙二胺四乙酸二钠盐7.4g溶于300400mL温水中溶解，稀释至1L，摇

20、匀。2） 纯金属Zn片99.9%以上，或高纯ZnO。3）NH3- NH4Cl缓冲溶液(pH=10)4）六次甲基四胺 20%(pH=5.5)5）铬黑T 0.5%6）二甲酚橙水溶液 0.2%7）1:1HCl 四、实验步骤和注意事项1、配制300ml 0.02molL-1EDTA溶液 （EDTA分子量为327.24）计算需称取的乙二胺四乙酸二钠盐的量：X=0.020.3327.24=2.2g在粗天平上称取乙二胺四乙酸二钠盐2.2g，溶解于250ml烧杯中，可适当加热，转移到试剂瓶中，稀释到300ml。配制250ml0.015molL-1Zn标准溶液准确称取0.250.26gZn片（或ZnO0.3-0

21、.32g），置于100ml烧杯中，逐滴加入1:1 HCl（大约两管），必要时略加热，使完全溶解为止，加少量水（100ml）后转入250ml容量瓶中，用水稀释至刻度,摇匀。3、EDTA的标定：用移液管吸取Zn标液25.00ml于250ml锥形瓶中，加约30ml水，2滴二甲酚橙指示剂，然后滴加20%六次甲基四胺至溶液呈稳定的紫红色后再多加3ml，用EDTA溶液滴定至溶液由紫红色变亮黄色，即为终点，由EDTA所消耗体积计算其浓度。4、水的总硬度的测定吸取100mL水试样于250mL锥形瓶中，加入5mLNH3- NH4Cl缓冲溶液，再加入2滴铬黑T指示剂，摇匀溶液为酒红色，用EDTA标准溶液缓慢滴定，

22、并充分摇匀，至溶液由酒红色变为纯蓝色即为终点。记下EDTA所消耗的体积，计算总硬度。* 注意事项络合反应进行的速度较慢，滴定时加入EDTA溶液的速度不能太快,在室温低时更要注意。2、络合滴定，加入指示剂的量很重要，不要过多。五 数据处理 表一 EDTA的标定编号1#2#3#VEDTACEDTACEDTA平均值Zn标准溶液体积25.00mL25.00mL25.00mLZn片（或ZnO）质量Zn标准溶液浓度 表二 水硬度的测定编号1#2#3#V水样100.00mL100.00mL100.00mLVEDTACEDTA硬度平均硬度相对平均偏差 注意： 写出简要计算过程六、思考题为什么通常使用乙二胺四乙

23、酸二钠盐配制EDTA标准溶液，而不用乙二胺四乙酸？用EDTA法测定水的硬度时，哪些离子的存在有干扰？实验三、铁矿石中铁的测定（无汞盐测铁法）一、实验目的1.了解氧化还原滴定分析的使用条件及其选定方法。2.掌握无汞盐的重铬酸钾法测定铁的原理和方法。3. 了解氧化还原滴定中指示剂的原理和分类。二、实验原理铁矿石的种类很多，用来炼铁的矿物主要是磁铁矿（Fe3O4）赤铁矿（Fe2O3）和菱铁矿（FeCO3）等。常量铁的测定通常采用K2Cr2O7法。试样一般用浓HCl溶解，试样溶解后，首先用SnCl2还原大部分Fe3+, 再用TiCl3溶液还原剩余的Fe3+, 以Na2WO3为指示剂指示还原终点, 即当

24、Fe3+定量还原为Fe2+后，过量一滴TiCl3溶液，可使作为指示剂的六价钨（无色）还原为蓝色的五价钨化合物，俗称“钨蓝”，故溶液呈蓝色。过量的TiCl3，可在Cu2+的催化下，借水中溶解的氧氧化，从而消除少量的还原剂TiCl3的影响，立即加入硫磷混酸, 以二苯胺磺酸钠为指示剂, 用K2Cr2O7标准溶液滴定Fe2+离子。三、仪器与试剂1.仪器：试剂瓶、洗瓶、锥形瓶、烧杯、量筒、酸式滴定管、移液管、分析天平、架盘天平2. 试剂：(1) SnCl2 10%(2) 浓HCl (3)硫-磷混酸(4) 二苯胺磺酸钠指示剂：0.5%水溶液(5)K2Cr2O7标准溶液(6) Na2WO4 25% (7)

25、TiCl3溶液 （8）铁试样四、实验步骤和注意事项1、 K2Cr2O7标准溶液的配制：准确称取0.730.75g K2Cr2O7置于250ml烧杯中，加适量水，稍加热使其溶解，转移到250ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。（两组共用即可）2、准确称取铁试样0.10.12g于锥形瓶中，用少量水润湿，加入10ml 浓HCl低温加热溶解，趁热滴加10% SnCl2 溶液至溶液由黄色变为浅黄色，加水至100ml左右，加15滴Na2WO4指示剂，滴加TiCl3至溶液呈蓝色，并过量一滴。滴加0.4% CuSO4溶液，待蓝色褪去12min后，立即加入10ml硫-磷混酸，4滴二苯胺磺酸钠，立即用K2Cr2O

26、7标准溶液滴定至溶液呈稳定的紫色即为终点。重复三次，取平均值。计算出试样中铁的百分含量，求相对平均偏差。*注意事项1. 用SnCl2还原Fe3+离子时，溶液体积不能过大，盐酸浓度不能太小，温度不能低于600，否则还原反应很慢，颜色变化不易观察，SnCl2容易加入太多。2、SnCl2不能加过量，否则结果偏高，如不慎过量可滴加2% KMnO4至呈浅黄色。3、加入CuSO4后，一定要等钨蓝褪色1min后才能滴定，否则会因SnCl2氧化，而消耗K2Cr2O7使结果偏高。五、数据处理序次记录项目123铁试样gK2Cr2O7体积铁的含量铁的平均含量K2Cr2O7浓度相对平均偏差注意： 写出简要计算过程六、

27、思考题1.加入硫-磷混酸的目的何在？实验四 邻二氮杂菲分光光度法测定铁一、实验目的1. 掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的原理和方法；2. 学会制作标准工作曲线；3 了解分光光度法测定的特点。二实验原理邻二氮杂菲是测定微量铁的一种较好试剂，在pH=29溶液中，邻二氮杂菲与Fe2+生成稳定的橙红色络合物。如果铁以Fe3+形式存在，则应预先用盐酸羟胺将Fe3+还原。 亚铁离子 邻菲罗啉(无色) 邻菲罗啉铁（橙红色）三仪器与试剂仪器：722S型分光光度计；吸量管(10mL, 5mL)；容量瓶(50mL)试剂：铁盐标准溶液(10ug/mL)；邻二氮杂菲溶液(0.1%)；盐酸羟胺溶液(1%)；HAc-Na

28、Ac缓冲溶液(pH=4.6); 铁未知液 四实验步骤和注意事项1. 标准曲线的绘制用吸量管分别吸取铁盐标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL于8只50mL容量瓶中，依次加入2.5mL盐酸羟胺，4.0mL HAc-NaAc缓冲溶液，5.0 mL邻二氮杂菲溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min，用1cm比色皿，以不加铁的空白溶液作参比溶液，在波长为510nm处，用分光光度计分别测其吸光度，以50mL溶液中的含铁量为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制邻二氮杂菲铁的标准曲线。2. 试样中铁含量的测定吸取铁未知液5.0mL于50mL容量瓶中，按绘制标准曲线完全

29、相同的操作加入各种试剂使之显色，在相同的条件下测定其吸光度。由标准曲线求出所测试样中铁的含量。* 注意事项1. 实验中加入各种试剂，一定要用吸量管准确吸取加入，不要用量筒量取；2. 作显色剂用量的影响时，是以蒸馏水为参比溶液，吸收波长的选择时应以试剂空白为参比溶液；3. 实验中一定要控制好溶液的酸度(pH5)，因为酸度太高时，反应进行较慢，酸度太低，则Fe2+易水解，影响显色；4. 注意比色皿的用法；绘制标准曲线时一定要注明横纵坐标的名称及单位。五数据处理编号加入铁标液体积/mL加入铁未知液体积/mL吸光度A00.011.022.033.044.055.066.077.015.025.035.

30、0依照表格中的数据绘制标准曲线，由标准曲线求出所测未知样中铁的含量。六思考题1. 邻二氮杂菲测铁的原理是什么？用此方法测出铁的含量是否为试样中亚铁的含量？2. 吸收曲线与标准曲线有何区别？各有何实际意义？ 实验五 氨基酸的分离鉴定纸层析法实验目的：通过实验，了解氨基酸滤纸层析法的原理。2、掌握氨基酸滤纸层析的操作方法。实验原理：用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法。纸层析所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成。滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称为上行法；将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸

31、在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点不等的层析点。溶质在滤纸上的移动速率用f值来表示：Rf=只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，f值是常数，故可根据f值作鉴定物质的依据。氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。仪器和试剂：层析缸、毛细管、培养皿、层析滤纸、电吹风、针、线、尺、铅笔扩展剂：4份水饱和的正丁酷和1份冰醋酸的混合物。将20 mL正丁醇和5mL冰醋酸放入分液漏斗中，与15mL水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层。取漏斗内的扩展剂约5mL置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的

32、倒入培养皿中备用。 氨基酸溶液：5mgmI的赖氨酸、甘氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组分浓度均为o5)。 显色刑：o1水合正丁醇溶液。操作：滤纸准备：选用新华1号滤纸，裁成1815cm长方形，在距纸一端2cm处划一基线，在线上每隔2cm左右，画一小点作点样的原点，见图赖氨酸混和氨基酸甘氨酸亮氨酸2 cm点样处 图氨基酸的单向上行层析赖氨酸混和氨基酸甘氨酸亮氨酸2 cm点样处点样：氨基酸点样量以每种氨基酸含l为宜，用毛细吸取氨基酸样品10l点于原点（分批点完），点子直径不能超过0.3cm，边点边用电吹风吹干。3 展层和显色： 将点好样的滤纸两边缘对齐，用白线缝好，制成圆筒，注意缝线处的滤纸两

33、边不能接触，以免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动太快而造成溶剂前沿不齐。将圆筒状滤纸放入层析缸的平皿中（提前把展层剂倒入平皿内），注意滤纸勿与皿壁接触。进行展层，当溶剂展层至距滤纸上沿1cm时，取出滤纸，作好前沿位置标记后用喷雾器喷茚三酮显色剂，用电吹风或在烘箱中烘干，层析斑点即显蓝紫色。用铅笔轻轻描出各显色斑点的形状，用直尺量出各斑点中心与原点的距离以及溶剂前沿与原点的距离，求出各氨基酸的Rf值，将各显色斑点的Rf值与标准氨基酸的Rf思考题1 计算各氨基酸的Rf值 2 缓和氨基酸中有哪几种氨基酸？重氮偶合比色法一.实验目的掌握重氮偶合比色法的原理和操作要点；进一步熟悉分光光度计的使用方法。二.

34、原理样品经除去蛋白质和脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸作用形成重氮盐，再与盐酸萘乙二胺作用形成紫红色偶氮染料。此染料颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐的浓度成正比，在波长540nm下比色测定。三.仪器722S可见分光光度计；容量瓶（50mL;250mL）；吸量管四.试剂1. 2.5mol/L氢氧化钠溶液：溶解50g2. 0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g3. 0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g4. 亚硝酸钠标准溶液(5g/mL)：准确称取0.1g亚硝酸钠(优级纯)，用少量水溶解，以水定容到500mL，此溶液的浓度为200g/mL。吸取此液25mL，用水定容至1000mL。五

35、.操作步骤1. 亚硝酸钠标准曲线的绘制：吸取亚硝酸钠标准液(5g/mL)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5mL（相当于0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5g亚硝酸钠 ）分别于50mL容量瓶中，各加2mL 0.4%对氨基苯磺酸溶液，摇匀。静置35min后，加入1mL 0.2%盐酸萘乙二胺溶液，并用水定容，摇匀，静置15min后，用分光光度计在540nm波长下比色，测定吸光度。以亚硝酸钠含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 2. 样品处理样品采用华润万家购买的榆园牌酸白菜。将样品洗净后，称取一定的量加3倍的水，用组织捣碎机捣成匀浆。称取匀浆60g

36、左右（准确记录），置于250mL容量瓶中，加水100mL，振摇1h，加2.5mol/L氢氧化钠溶液15mL，定容后立即过滤3. 同时做空白实验。将匀浆用蒸馏水代替，其他的步骤与实际样品测定相同。4. 测定吸取样品溶液和空白液各40mL分别于50mL容量瓶中，加入2mL 0.4%对氨基苯磺酸溶液，摇匀。静置35min后，加入1mL 0.2%盐酸萘乙二胺溶液，并用水定容，摇匀，静置15min后，用分光光度计在540nm波长下比色，测定吸光度。六.结果计算 式中：X亚硝酸盐含量(mg/kg)C从标准曲线上查得的亚硝酸盐含量（g）V1比色时所取样品溶液的体积（mL）V2样品溶液的总体积（mL）m样品的

37、重量（g）七.说明与注意事项1. 当亚硝酸盐含量高时，过量的亚硝酸盐可以将偶氮化合物氧化，生成黄色，而使红色消失，可以先加入试剂，然后滴加样液，从而避免亚硝酸盐过量。2. 样品处理过程之中饱和硼砂溶液、亚铁氰化钾溶液、醋酸锌溶液为蛋白质沉淀剂。PAGE PAGE 30实验七 碱混合物测定的方法设计有一碱液，可能是NaOH、Na2CO3或NaHCO3中的一种，也可能是其中两者的混合物。设计一实验方案对其进行测定。一、实验目的 1培养学生查阅有关书刊的能力。2运用所学知识及有关参考资料对实际试样写出实验方案设计。3对混合碱体系的组成含量进行分析，培养学生分析问题、解决问题的能力，以提高素质。二、实

38、验要求1根据上述原理，查阅相关资料，设计出测定混合碱中各组分含量的实验方案。2设计混合碱组分测定方法时，主要考虑下面几个问题。(1) 所设计方法的原理，分析结果的计算公式。需判断什么情况下含有NaOH、Na2CO3或NaHCO3的一种、两种？(2) 所需试剂的用量、浓度，配制方法。(3) 实验步骤：包括标定，测定及其它实验步骤。(4) 数据记录(最好列成表格形式)。(5) 讨论：包括注意事项，误差分析，心得体会等。3. 学生自拟分析方案提前一周交给实验指导老师审核合格后，方能进入实验室进行实验，并在规定时间（4学时）内完成实验，写出实验报告。三、实验条件甲基橙和酚酞指示剂，25ml酸式和碱式滴

39、定管，其它玻璃仪器及试剂。实验七 碱混合物测定的方法设计一. 实验目的：1、进一步熟练滴定操作和滴定终点的判断；2、学会标定酸标准溶液的浓度；3、掌握混合碱分析的测定原理、方法和计算。二. 实验原理1. 浓盐酸有挥发性, 因此标准溶液用间接方法配制, 配好的溶液只是近似浓度, 准确的 HCl 浓度需用基准物质进行标定。通常用来标定 HCl 溶液的基准物质有无水碳酸钠 (Na2CO3 )和硼砂（ Na2B4O7l0H2O）。采用无水碳酸钠为基准物质来标定时, 可用甲基红、甲基橙等指示终点, 滴定反应为：Na2CO3+ 2HCl = 2NaCl + H2O + CO2 2. 混合碱可采用双指示剂法进行分析，测定各组分的含量。在混合碱的试液中加入酚酞指示剂，用HCl标准溶液滴定至溶液由红色褪至无色。此时试液中所含NaOH完全被中和，Na2CO3也被滴定成N