DNA的粗提取和鉴定 省赛获奖-完整版获奖课件

1、构成生物体的遗传物质是什么？怎样才能将细胞内的遗传物质分离出来？ 讨论2：讨论：基础知识0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低; 在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。基础知识0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L基础知识0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L思考2要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？ 2mol/L浓度可使DNA溶解； 0.14mol/L浓度可使DNA析

2、出。基础知识0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L思考2要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？基础知识将DNA和蛋白质进一步分离基础知识DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响基础知识 思考4 提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？ 蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为6080，因为该温度值蛋白

3、质变性沉淀，而DNA不会变性。基础知识 思考4 提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？ DNA的鉴定基础知识 DNA的鉴定DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。基础知识DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。甲基绿（绿色）基础知识 DNA的鉴定通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。原理总结实验设计（一）实验材料的选取 不同生物的组

4、织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？实验设计哺乳动物血液和液体培养基中大肠杆菌。（一）实验材料的选取 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？实验设计 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。（一）实验材料的选取实验设计鸡血、猕猴桃。（一）实验材料的选取 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，

5、猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1.动物细胞动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1.动物细胞讨论为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。2. 植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2. 植物细胞讨论加

6、入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2. 植物细胞实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液讨论如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？讨论如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DN

7、A需要将滤液作进一步处理。讨论此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质讨论此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理。 方案一：30mL滤液35gNaCl同方向搅拌，DNA溶解加入蒸馏水DNA析出过滤得到过滤物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液 方案二：30mL滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）静置1015分钟DNA滤液 方案三：30mL滤液6067处理过滤获得DNA滤液方 案讨论为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除

8、杂质？讨论 答：用高浓度的盐溶液溶解DNA，能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？讨论方案二与方案三的原理有什么不同？讨论方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。（四） DNA的析出与鉴定1. DNA的析出 在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？（四） DNA的析出与鉴定

9、1. DNA的析出 在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？ 滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置23分钟，析出的白色丝状物就是DNA。DNA呈白色。2. DNA的鉴定2. DNA的鉴定 试管2支，编号为甲、乙各加等量5mL的NaCl溶液甲中放入少量白色丝状物，使之溶解各加4mL二苯胺，混合均匀沸水浴5min观察颜色变化3. 实验操作制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静置或离心破碎细胞，释放DNA 加蒸馏水，同一方向快速搅拌过滤，除去细胞壁、细胞膜等溶解核内DNA 加入2mol/L NaCl溶液，同一方向缓慢搅拌DNA析出加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，再溶解到2mol/L NaCl溶液中除去细胞质中的大部分物质DNA初步纯化 与等体积95冷却酒精混合，析出白色丝状物除去核蛋白、RNA、多糖等DNA鉴定 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻