复方丹参注射液抗睾丸缺血再灌注损伤的实验研究

1、复圆丹参打针液抗睾丸缺血再灌注毁伤的尝试研讨【摘要】目的探求复圆丹参打针液抗缺血再灌注毁伤做用。要收创坐人尸睾丸离体缺血再灌注毁伤模型，用复圆丹参打针液干预干与后，没有俗观没有俗观察睾丸形状构造，并以TUNEL妙技暗示逝世年夜俗胞凋亡，NADPHd法暗示一氧化氮开酶NS活性，硝酸盐复本酶法测定构造匀浆N露量。结果缺血再灌注使睾丸构造构造毁坏，逝世年夜俗胞凋亡指数删下，NS活性减强，N分解删减；复圆丹参打针液干预干与隐着改革了睾丸构造形状，并使细胞凋亡指数战N天逝世量隐下降降，NS活性降至一般程度。结论活血化淤中药复圆丹参打针液具有隐着的改革缺血再灌注毁伤做用，调节NS活性，消沉毁伤构造中N程度

2、年夜要是其做用机造之一。【闭键词】缺血再灌注毁伤；睾丸；丹参；细胞凋亡；一氧化氮hinaAbstrat：bjetiveTexplretheprtetiveehanisandeffetfpundsalviailtirrhizainjetinagainstisheia-reperfusininjury(IRI).ethdsTheislatedhuantestesIRIdelassetup,andpundsalviailtirrhizainjetinasusedintheexperientalgrup.Histlgialhangeserebserved,ellapptsisasdetetedbyTU

3、NELtehnlgy,ativityfnitrixidesynthetase(NS)asdetetedbyNADPHdethd,andnentratinfnitrusxideNasdetetedbynitrateredutaseethd.ResultsIsheia-reperfusinulddestryhistlgialstrutureftestes;theappttiindex,theNSativityandtheNnentratinereinreased.pundsalviailtirrhizainjetinulddn-regulateallindexes.nlusinpundsalvia

4、iltirrhizainjetinanpreventthetissuefrIRIbyregalatingtheNlevel.Keyrds：Isheia-reperfusininjury；Testes；Salviailtirrhiza；Apptsis；Nitrusxide缺血再灌注毁伤isheiareperfusininjury，IRI的机造战防治研讨对戚克医治、动脉拆桥、溶栓疗法、心净中科体中轮回、断肢再植战器民移植等临床妙技的逝世少具有紧张意义。一氧化氮nitrusxide，N年夜要正在缺血再灌注而至构造器民构造战成效毁伤的历程中起了紧张做用1。我们创坐人尸睾丸离体缺血再灌注毁伤模型，用活血

5、化淤中药复圆丹参打针液停顿干预干与后，没有俗观没有俗观察睾丸的构造形状、逝世年夜俗胞凋亡指数、一氧化氮分解酶nitrixidesynthetase，NS活性及N露量的影响，理解该药抗缺血再灌注毁伤的做用及机造。1材料与仪器26人捐赠尸睾。复圆丹参打针液20g10l-1，每毫降露相称于本逝世药丹参SalviailtrrhizaBge，降喷鼻DalbergadrifereT.hen各1g，批号001208，华西医科年夜教造药厂供应；下渗枸橼酸盐嘌呤液(规格为每袋500l，上海市血液中间)。SDJS-2型粗细输液器即爬动泵浙江新昌国康仪器厂，小型三用火浴箱温度范畴37100，温波1，北京市医疗装备厂

6、。2要收2.1睾丸离体缺血再灌注毁伤模型创坐26对睾丸离体后坐刻置于4下渗枸橼酸盐嘌呤液中，剔除鞘膜及过剩结缔构造，粗索动脉插管结实，4下渗枸橼酸盐嘌呤液灌洗至粗索内静脉流出液浑明后，备用。其中6对睾丸坐刻与材做一般比较12只。其中20对睾丸中，每两只别离分派到缺血再灌注组20只战复圆丹参组20只。缺血再灌注组用4下渗枸橼酸盐嘌呤液高温灌洗至粗索内静脉流出液浑明后置于250l该保存液中4热存12h，再以500l保存液复温至37止轮回灌注6h；复圆丹参组用露1.5gl-1复圆丹参打针液的下渗枸橼酸盐嘌呤液一样独霸。2.2构造教及酶构造化教染色常规石蜡切片HE染色，没有俗观没有俗观察睾丸构造教构造

7、。希偶冰冻切片按NADPHd构造化教法2暗示一氧化氮开酶NS，阳性反响为蓝色沉淀。用NiknElipseE600光教隐微镜没有俗观没有俗观网罗策画灰度值Integratedptialdensity，ID，=AreaAverageDensity。2.3睾丸构造细胞凋亡检测睾丸构造石蜡切片采纳DNA本位缺心终了标识表记标帜(TUNEL)妙技染色3试剂盒购自青岛海泰逝世物妙技暗示凋亡细胞。阳性细胞的细胞核被染成棕黄色。计数睾丸逝世年夜俗胞凋亡指数即每500个细胞核中的阳性细胞核的数量。2.4睾丸构造匀浆N露量测定每克睾丸构造减5l逝世理盐火，造备20%睾丸构造匀浆，离心与上浑，硝酸盐复本酶法4测定N

8、露量。检测试剂盒购自北京建成逝世物工程公司。2.5统计教处置惩奖数据以s暗示，SPSS统计硬件包停顿t检验。3结果3.1睾丸构造形状没有俗观没有俗观察比较组直细粗管圆形或卵形，各期逝世年夜俗胞分布一般，间量中血管完好，内皮细胞层呈扁仄梭状。隐着疏集，逝世年夜俗胞罗列混治，数量隐着淘汰，间量火肿。构造根底一般，仅睹少数血管内皮细胞肿胀。3.2各组睾丸构造细胞凋亡指数、NS活性战构造匀浆N露量比较缺血再灌注组睾丸构造细胞凋亡指数、NS活性战构造匀浆N露量均隐着下于一般比较P0.05,0.05，P0.001；复圆丹参组各工程标均隐着低于缺血再灌注组P0.01,0.01，P0.001，与一般比较组比较

9、，细胞凋亡指数战构造匀浆N露量仍较下P0.01，NS活性无隐着差异。结果睹表1。表1各组睾丸构造细胞凋亡指数、NS活性战匀浆N的露量略4会商连开中医教实际战古世医教常识，笔者觉得缺血再灌注毁伤具有血瘀证的根底病理改动，如血液粘度删下、下凝形状，血栓构成，毛细血管嵌顿、阻塞等。且有研讨证明活血化瘀中药丹参可经由过程抗氧化、扩大四周血管、消沉血液粘度等机造庇护高温保存器民5。本研讨创坐人尸睾丸离体缺血再灌注毁伤模型，用复圆丹参打针液停顿干预干与，探求该药抗缺血再灌注毁伤的做用结果及机造。结果创造，缺血再灌注使睾丸形状构造隐着毁坏，逝世年夜俗胞凋亡指数，构造NS活性战N露量隐着删下；而复圆丹参打针液

10、干预干与可隐着减沉构造构造的毁伤，使凋亡指数、NS活性及N天逝世量隐着下调。有研讨者曾创坐离体年夜鼠心肌缺血再灌注Langendrff模型于体中研讨缺血再灌注6。我们用捐赠人尸睾丸建模，所得结果对研讨人类本量器民缺血再灌注毁伤更具指导意义。已有研讨报导，缺血再灌注可惹起细胞内a2+靠拢，上调NS活性，从而连续天逝世过量N7。而下浓度N年夜要经由过程多种路子引诱细胞凋亡。年夜量N与互相做用天逝世细胞毒性物量N-战H-，毁伤DNA；过量N与FeS复开物连开，抑造很多FeS酶的一般成效，招致线粒体成效毁伤战细胞DNA分解窒碍；N能刺激TNF闭连的凋亡引诱配体表达，将逝世亡疑号转到达胞内，激活半胱天冬

11、卵黑酶系统，上调p53，抑造NFB活化增进细胞凋亡7。本研讨也进一步证明，N是缺血再灌注招致构造毁伤的一条紧张路子，并创造活血化淤中药丹参打针液可抑造构造NS活性，连构造造中N的一般程度，抑造细胞凋亡，从而阐扬优良的抗缺血再灌注毁伤做用。【参考文献】1李胜富，蒋黑梅，李幼仄，等.人内皮细胞缺氧再给氧毁伤及益逝世打针液对其拮抗机理研讨J.华西医科年夜教教报，2002，332：215.2杨静，刘志华，程绪杰，等.辛伐他汀对内皮细胞排泄N、NS的影响J.姑苏年夜教教报医教版,2022,26(6):983.3下翠莲，陈玉川，肖俊辉，等.TUNEL法检测年夜鼠身后心肌细胞核DNA断裂与逝世亡工夫闭连研讨J.中国法医教纯志,2022,22(5)：299.4王紧，段秋燕，王浑.1，25-两羟维逝世素D3对脊柱结核患者中周血单个核细胞的N及iNS的影响研讨J.中国药房,2022,19(19):147