孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术

1、孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第1页 前 言 对于咱们医务工作者在医疗活动中针对符合一定条件就诊者提供艾滋病和梅毒、乙肝检测，咱们称之为“筛查”。筛查是预防艾滋病和梅毒、乙肝一项主要策略，为世界卫生组织和我国所提倡。它目标是早期发觉感染者，及早得到诊疗和治疗，到达治愈感染者、消除传染源、阻断深入传染目标。同时，这种筛查也是“有放矢”，它是针对特定人群、特定情况而进行，并非乱检验、乱收费。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第2页传染病传染过程：病原体侵入病原体与机体相互作用与斗争结局隐性感染病原携带显性感染 死亡宿主病原体被去除3孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第3页传染病传输基

2、础条件 三个基础步骤：传染源易感人群传输路径4孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第4页5孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第5页传染病流行过程 传染源 自然和 社会原因传输路径 易感人群6孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第6页潜伏期 传染期病原侵入排出病原体出现症状时间过程潜伏期停顿排出病原体（痊愈、死亡等）传染期7孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第7页 传染病种类繁多，为了保障公众健康与安全，国家以法律形式将一些传染病列为法定传染病以加强管理。 年新颁布中华人民共和国传染病防治法要求了甲类、乙类和丙类共37种法定传染病。其中： 1、甲类传染病2种：鼠疫、霍乱 法定传染病8孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第8页 乙类

3、传染病25种： 传染性非经典肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、流行性出血热、狂犬病、流行性乙型脑炎、登革热、炭疽、细菌性和阿米巴性痢疾、肺结核、伤寒和副伤寒、流行性脑脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生儿破伤风、猩红热、布鲁氏菌病、淋病、梅毒、钩端螺旋体病、血吸虫病、疟疾。 (其中传染性非经典肺炎、炭疽中肺炭疽和人感染高致病性禽流感按甲类管理。) 9孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第9页艾滋病和梅毒、乙肝离咱们远吗？ 艾滋病和梅毒、乙肝是一个危害性极大传染病，尤其是多年来, 我国艾滋病和梅毒、乙肝感染者和病人呈逐年上升趋势，从0.4%上升到2017年21.45%；并从高危人

4、群向普通人群扩散, 经过母婴传输路径感染百分比也在增加。若不采取预防干预办法，感染了艾滋病和梅毒、乙肝病毒母亲，生下染有艾滋病和梅毒、乙肝病毒婴儿百分比很大, 严重威胁着广大妇女和儿童健康。所以, 预防艾滋病和梅毒、乙肝母婴传输是保护儿童免遭艾滋病和梅毒、乙肝侵害、降低儿童感染艾滋病和梅毒、乙肝主要办法，这就需要咱们提升警觉，认识到艾滋病感染危险性，而接收专业人员咨询和筛查是有效处理路径。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第10页艾滋病、梅毒、乙肝-概况艾滋病梅毒乙肝病原体HIV病毒梅毒螺旋体HBV病毒传染源HIV感染者/AIDS梅毒患者急慢性乙肝患者和携带者传输路径血液/性/母婴传输性/母婴传输/

5、接触/血液血液/母婴传输/性预防献血员筛查/高危行为改变/孕妇筛查献血员筛查/高危行为改变/孕妇筛查主动免疫与被动免疫/孕妇筛查孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第11页母婴传输路径1、艾滋病：约1535% HIV阳性孕妇会发生母婴传输。90%以上儿童HIV感染者是由母亲垂直传输而感染 。2、梅毒：流产、早产、死胎或马鞍鼻、先天性耳聋等。3、乙肝：在我国，人群中40-50%是由母婴传输积累而成。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第12页 介绍相关检测技术一.艾滋病试验室检测技术HIV抗体检测核酸检测CD4+T淋巴细胞检测二.梅毒检测技术显微镜检验法血清学检验法三.乙肝检测技术HBV免疫标志物检测HBV-D

6、NA 孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第13页检测时要注意什么？ 作为受检者，应该注意是：一是要向医生提供较为详尽病史，尤其是危险性行为，不要因为不好意思而隐瞒。只有这么，医生才能正确判断感染危险性，有利于分析检测结果并做出诊疗和处理决断。二是注意检测“窗口期”问题，也就是从病原体进入人体到血液中产生足够量、能用检测方法查出抗体这段时期。对于艾滋病“窗口期”，伴随新一代、敏感艾滋病抗体检测伎俩出现后，艾滋病窗口期已经缩短到最为保守艾滋病抗体峰值出现第6周。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第14页就当前广泛采取第三、四代双原夹心法和酶联法以及化学发光法等检测伎俩而言，艾滋病窗口期能够缩短到1421天。而

7、梅毒虽无“窗口期”说法，但从感染到可检测到抗体也需要34周甚至更长时间。所以，在有高危性行为后接收检测，结果虽为阴性但未渡过“窗口期”，仍不可掉以轻心，需要继续随访直到确认已渡过“窗口期”。三是结果解释和分析要听从医生专业提议。艾滋病、梅毒检测结果意义随受检者不一样情况而有差异。所以受检者应该听从医生对结果解释和提议，不可盲目消极或盲目乐观。乙肝，丙肝，梅毒，艾滋检测必要性孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第15页 艾滋病、梅毒、 乙肝试验室检测技术孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第16页艾滋病抗体检测及 样品处理试验室质量管理生物安全质量控制梅毒乙肝 检测关键点孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第17页检测

8、技术一、艾滋病检测技术HIV抗体检测酶联免疫吸附试验（ELISA）核酸检测CD4+T淋巴细胞检测快速检测（RT） （提议配置合格快速检测试剂，灰区。）孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第18页HIV抗体检测试剂有国家食品药品监督管理局注册同意文号试剂在使用期内酶联免疫试剂应批批检合格证件采购试剂选择敏感性和特异性高试剂孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第19页HIV抗体筛查样品血清/血浆/全血滤纸干血斑唾液尿液孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第20页普通筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验：采取发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。快速检测（RT）及其它检测试验 (1)明胶颗粒凝集试

9、验(PA) (2)免疫渗滤试验 (3)免疫层析试验孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第21页(1)酶联免疫吸附试验（ELISA）HIV抗体检测试剂：检测HIV-1/2抗体HIV抗原抗体联合检测试剂：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体用酶标仪测定结果孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第22页四代艾滋病酶联免疫试剂比较solidphasespecificdetection ofconjugate第一代病毒裂解液HIV-1IgG 抗体HIV-1 -IgG抗体第二代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 / -2IgG 抗体HIV-1 / -2 IgG抗体第三代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1

10、 / -2 / -OIgM / IgG 抗体HIV-1 / -2 / -O病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 / -2 / -O第四代病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 AbIgM / IgG 抗体HIV-1 / -2 / -Op24 抗原病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 抗体孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第23页ELISA酶联免疫吸附试验 ELISA HIV 抗原包被平板病人抗体酶显色剂+ ve- ve孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第24页阴性对照阳性对照阴性阳性质控孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第25页酶联免疫吸附试验（E

11、LISA）优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于统计和保留用途：流行病学监测及临床大量标本检测孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第26页(2)化学发光或免疫荧光试验采取发光或荧光底物既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体酶或荧光标识HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物用发光仪或荧光仪测定结果孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第27页全血样品 加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果（3）快速检测（RT）及其它检测试验孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第28页快速检测（RT）及其它检测试验优点:试验简便快速，适合用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,普通可在

12、1030分钟内得出结果。缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保留。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第29页样品初筛试验一阴一阳均阳性反应汇报阴性确证试验复检试验汇报阴性均阴性反应阳性反应原有试剂另一不一样原理（或厂家）试剂或另外两种不一样原理（或厂家）试剂选取筛查试剂阴性反应HIV抗体筛查检测流程图孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第30页HIV抗体确证试验确证试验试剂： 必须是经国家食品药品监督管理局注册同意、在使用期内试剂。确证样品： 可采取血清、血浆、滤纸干血斑确证试验方法： 免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIV)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。我国

13、常见确实证试验方法是WB。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第31页HIV抗体确证试验结果a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2）b弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照d经典HIV-2血清阳性反应 a b c dgp160gp120 p66p55p51 gp41p39 p31P24p17 血清对照HIV-2特异带孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第32页初筛检测阳性标本两种筛查试剂汇报阴性阴性反应一阴一阳阳性反应确证试剂复检试验依据详细情况深入检测HIV-2汇报阴性出现HIV-2指示条带阴性反应不确定反应汇报HIV-1 阳性HIV-1 阳性反应结合流行病学资料，能够在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反

14、应，则汇报阴性；如随访期间出现阳性反应，则汇报阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则汇报阴性；满足HIV抗体阳性诊疗标准则汇报阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。HIV抗体确证检测流程图孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第33页试验室需备有：12种HIV-1/2抗体ELISA（化学发光）试剂2种HIV-1/2抗体快速试剂baidu网每年进行体外诊疗试剂评定如：“HIV抗体试剂临床评定”孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第34页HIV抗体母亲 HIV 抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染出生时母亲抗体，8090%

15、 在生后 912 个月消失，出生后 18 个月基础上全部消失18 个月后儿童 HIV抗体依然阳性，视为本身感染产生抗体18个月以下婴幼儿HIV诊疗孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第35页婴幼儿HIV感染抗体检测适合用于：HIV感染产妇所生婴幼儿；母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染儿童。婴儿12个月时进行HIV抗体检测 阴性排除感染，纳入正常儿童保健； 阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检测，结果阴性排除感染。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第36页艾滋病病毒感染产妇所生儿童阳阴用另一个不一样原理或不一样厂家生产筛查试剂再次检测12个月进行HIV抗体筛查

16、试验确证试验18个月时再进行HIV抗体筛查试验汇报HIV抗体检测结果阴性艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程阳性阴性阴性阳性用另一个不一样原理或不一样厂家生产筛查试剂再次检测阴性阴性阳性汇报HIV抗体检测结果阳性提供咨询，继续随访，4周后再次进行确证试验不确定阳性孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第37页18个月以下婴幼儿HIV诊疗核酸检测HIV 前病毒 DNA（HIV DNA）检测已整合到外周血液中血细胞基因组上 HIV DNA基于 PCR 技术高特异度(98%)和高灵敏度 (99%)孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第38页18个月以下婴幼儿HIV诊疗HIV 病毒载量（HIV RNA）用来监测已知

17、HIV 感染病人病毒载量试验；真阳性结果通常 100,000 拷贝/毫升, 而假阳性结果350/mm3艾滋病感染孕产妇，采取预防性抗病毒用药方案；对于CD4+T淋巴细胞计数350/mm3艾滋病感染孕产妇，采取治疗性抗病毒用药方案。 孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第68页常规CD4+T淋巴细胞检测方法和程序 流式细胞仪检测方法 双平台方法 单平台方法样品：EDTA、枸橼酸（ACD）或肝素抗凝全血运输条件：室温（1825）保留和运输样品防止极端温度（结冰或大于37）高温季节，需用隔热容器盛装样品，并将其置于有冰袋和吸热物质容器中。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第69页常规CD4+T淋巴细胞检测方法和程

18、序48小时内染色，染色后6小时内分析；如采血后24小时内染色，可在染色后24小时内分析；利用CD45单克隆抗体设淋巴细胞门，可检测放置72小时样品；在血球分析仪生产商允许样品采集时间范围内检测。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第70页FACSCalibur流式细胞仪孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第71页二、梅毒检测技术显微镜检验法血清学检验法 梅毒特异性抗原血清学检测 梅毒非特异性抗原血清学检测孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第72页各期梅毒取材部位和检验方法临床表现 取材部位 检验方法一期梅毒 溃疡、淋巴结 暗视野检验 血液 血清学检验二期梅毒 皮损、淋巴结 暗视野检验 血液 血清学检验三期梅毒 血液

19、、脑脊液 血清学检验隐性梅毒 血液 血清学检验胎传梅毒 皮损、胎盘 暗视野检验 血液 血清学检验孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第73页（一)、显微镜检验法1.暗视野显微镜检验2.直接免疫荧光试验（DFA）3.渡银染色检验孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第74页1.暗视野显微镜检验暗视野显微镜下，经典梅毒螺旋体呈白色发光, 其螺旋较密而均匀。运动规律，运动性较强，其运动方式包含旋转式，围绕其长轴旋转；蛇行式, 全身弯曲如蛇行；伸缩其螺旋间距离而移动。观察其运动形式有利于与其它螺旋体相判别。未检出螺旋体不能排除梅毒诊疗，阴性结果可能说明：螺旋体数量不足(单次暗视野显微镜检验阳性率小于50%)。患者已接收

20、抗生素或杀灭梅毒螺旋体药品治疗。损害靠近自然消退。损害不是梅毒。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第75页2.直接免疫荧光试验（DFA)在荧光显微镜下可见到发苹果绿色梅毒螺旋体。临床意义与暗视野显微镜检测相同。DFA特异性及敏感性均大于暗视野显微镜检测。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第76页3.梅毒螺旋体渡银染色检验梅毒螺旋体含有亲银性，显微镜下可见到染成棕色梅毒螺旋体。临床意义基础同暗视野显微镜检验法。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第77页(二)、血清学检验法血清学检验是辅助诊疗梅毒主要伎俩。当人体感染梅毒螺旋体后410周左右，血清中可产生一定数量抗类脂质抗原非特异性反应素（主要是IgM、IgG）和抗

21、梅毒螺旋体抗原特异性抗体（主要是IgM、IgG）。这些抗体均可用免疫学方法进行检测。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第78页梅毒血清学检测方法孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第79页1.非梅毒螺旋体抗原血清试验1.1 性病研究试验室试验（Venereal Disease Research Laboratory test，VDRL）1.2 快速血浆反应素环状卡片试验（Rapid plasma reagin circle card test，RPR）1.3 甲苯胺红试验（Toluidine red unheated serum test，TRUST） 方法简便、快速，敏感性和特异性很好。对一期梅毒敏感性为

22、7487，二期梅毒达100，三期梅毒3494。特异性9699。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第80页非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义适合用于各期梅毒诊疗。早期梅毒经治疗后血清滴度可下降或转阴，故可用于疗效观察、判愈、判定复发或再感染。也适合用于人群筛查、产前检验及健康体检等。VDRL试验适合用于神经梅毒脑脊液检验, 特异性高，但敏感性低。可在一些传染病及胶原病时出现假阳性反应，所以对阳性反应应结合临床进行判别，或做梅毒螺旋体抗原血清试验以深入证实之。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第81页2.梅毒螺旋体抗原血清试验 采取梅毒螺旋体作抗原，为特异性抗原，检测血清中抗梅毒螺旋体IgG或IgM抗体。敏感性

23、和特异性均较高。一期梅毒敏感性为70100，二期梅毒达100，三期梅毒9598，特异性94100。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第82页梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）原理TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清中抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见凝集反应。明胶颗粒为玫瑰红色，便于肉眼观察结果。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第83页梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）原理用经纯化及超声裂解处理梅毒螺旋体为抗原包被固相板条加入待检血清和辣根过氧化酶标识抗人IgG抗体，利用酶免疫法检测患者血清中抗梅毒螺旋体特异性抗体。采取特异梅毒螺旋体重组蛋白作为抗原，使试验愈加敏感、特异

24、。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第84页梅毒IgM抗体血清学试验梅毒特异性IgM抗体是梅毒感染最早期产生抗体。IgM分子量较大不能经过胎盘屏障。所以在新生儿血中检测到IgM抗体表明有先天感染。如在患者脑脊液检测到IgM抗体表明有活动性神经梅毒。血液中或脑脊液中出现抗梅毒IgM抗体均表示需要治疗。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第85页梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验多用作证实试验，尤其是隐性梅毒及一些非螺旋体抗原血清试验阴性而又怀疑为梅毒患者。但不能用于观察疗效、判断复发及再感染。梅毒螺旋体抗原血清试验偶可出现生物学假阳性反应。孕妇艾滋病梅毒和乙肝检测技术第86页梅毒血清学试验合理应用非梅毒螺旋体