金属硫蛋白对仔猪抗氧化功能及SOD基因表达的影响

1、金属硫卵白对仔猪抗氧化成效及SOD基因表达的影响李丽立，刘云华，侯德兴，印遇龙，张彬，侯振平，邱细敏【关键词】金属硫卵白；抗氧化酶；基因表达；仔猪【Keyrds】etallthinein;antixidativeenzye;geneexpressin;piglet【摘要】目的：用仔猪作模子，研究经锌元素诱导的外源性金属硫卵白ZnT对机体抗氧化成效和超氧化物歧化酶(SD)基因表达的影响.要领：选用杜长大杂交仔猪18头，随机分为3组(1,2和3.别离肌肉注射经生理盐水溶解的猪肝ZnT0g/kg(1组，0.8g/kg2组,1.6g/kg3组，让仔猪活动产生应激.注射T后3h和6h，别离从每组取3头仔

2、猪屠宰取肝脏，测定肝脏中与抗氧化有关的生化指标，检测肝脏SD基因表达程度.效果：在应激条件下，增补外源性ZnT一段时间后，仔猪肝脏SD，GSHPX活性明显升高(P0.05)，DA含量明显低落(P0.05)，肝脏抗活性氧和抗超氧阴离子程度也有进步的趋势.在注射ZnT后6h，0.8g/kg，1.6g/kg组仔猪肝脏SD基因表达程度比比拟组明显进步(P0.05).0.8g/kg组和1.6g/kg组6hSD基因表达程度比3h明显增长，表白T对SD基因表达的诱导与时间和剂量干系严密.结论：增补外源性ZnT可进步应激机体的抗氧化物酶活性，从而进步机体的抗应激本领.【关键词】金属硫卵白；抗氧化酶；基因表达；

3、仔猪0弁言1质料和要领1.1质料选用胎次、日龄雷同而且体质量相近的杜长大三元杂交雄性仔猪18头，14d一次性断奶，单栏豢养，自由采食和饮水.试验前体质量4.420.24kg.屠宰前1d停食，不竭水.梯度PR仪：德国Eppendrf消费，型号为5331055888；稳压稳流电泳仪：北京六一仪器厂消费，型号为DYY6B；凝胶成像体系：美国UVPBilagingSyste消费，型号为GDS8000；紫外阐发仪：北京六一仪器厂消费，型号为D9403B；紫外分光光度计：德国Eppendrf消费，型号为603105430；超低温冰箱：青岛海尔股份消费，型号为BD396LT65；台式离心机：德国Eppend

4、rf消费，型号为entrifuge5415D；低温离心机：德国Eppendrf消费，型号为entrifuge5810R；微波炉：青岛海尔股份消费，型号为HR6702D.猪肝ZnT：本课题组提取的产物；BIXYTEHSD525T试剂盒：购自XIS公司；谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)活力测定试剂盒、丙二醛(DA)测定试剂盒、活性氧(RS)测定试剂盒、超氧阴离子(SA)自由基测定试剂盒：购自南京建成生物工程研究所；ISGEN总RNA抽提试剂盒：购自日本基因株式会社；RTPR试剂：购自AershaPharaiaBiteh公司；琼脂糖及Tris：购自Rhe公司；GeneRulerT100bpDNALa

5、dder：购自BIFerntas公司.1.2要领2效果2.1T对仔猪肝脏抗氧化本领的影响仔猪应激时注射外源性ZnT一段时间后，仔猪肝脏SD，GSHPX活性升高，DA含量低落，抗活性氧和抗超氧阴离子程度也有进步的趋势.尤其在注射ZnT后6h，肝脏SD，GSHPX活性，DA含量各组比力差异具有统计学意义(P0.05，表1).同时由表1知，注射雷同剂量ZnT，6hSD，GSHPX活性比3h进步，且组6hSD，GSHPX活性比3h进步(P0.05)，DA含量低落(P0.01).各组肝脏抗活性氧和抗超氧阴离子程度6h与3h比拟也有进步的趋势.表1差异剂量的T对仔猪肝脏中与抗氧化有关的指标的影响2.2T对

6、仔猪肝脏SD基因表达程度的影响由表2和图1,2可知，注射T后3h各组比拟，肝脏SD基因表达程度差异不明显(P0.05).注射T后6h各组比拟，组肝脏SD基因表达程度比组明显进步(P0.05).注射雷同剂量ZnT在差异的时间，第1组3h与6h肝脏中SD基因表达程度比拟差异不明显(P0.05).第2组和第3组6h肝脏中SD基因表达程度比其3h的明显进步(P0.05).表2差异剂量的T对仔猪肝脏中SD基因表达程度的影响3讨论正常环境下，机体存在一个完备的包罗酶系和非酶系的抗氧化体系，抗氧化酶有SD，GSHPX等，非酶系有VE、复原性谷胱甘肽等，均有扫除自由基的作用.在他们的协同作用下，使体内过多的自

7、由基变化为无害的水，起到抗氧化的作用.羟自由基是最活泼，也是毒性较大的含氧自由基.由于至今体内尚未创造羟自由基的扫除酶系，T有用地抗羟自由基作用显得紧张.Adel等5比力了T与谷胱甘肽抗羟自由基庇护DNA的作用，创造当T浓度为13l/L时，DNA的落解险些完全被按捺，而10l/L的GSH才气到达此作用.而且在某些应豪环境下，GSH程度落落，而T合成增长.本试验效果表白，注射外源ZnT后，在必然的时间和浓度下，可明显进步仔猪肝脏SD，GSHPX的活性，低落肝中DA的含量.肝脏抗活性氧和抗超氧阴离子的程度也有进步的趋势,从而进步机体的抗应激本领.本效果同时表白，仔猪应激时，外源性增补ZnT一段时间

8、后，SDRNA表达程度进步，SD的活性增长.Sugin等6研究小鼠的黄酮细胞创造SD活性还受精胺的调控，这种调控是产生在转录程度.ZnT中半胱氨酸含量富厚，在巯基化合物天生的同时，并有精氨酸残基，如许提供了SD活性加强的物质底子.【参考文献】1祁克宗.内毒素性微循环山羊氧自由基代谢的研究J.中国农业科学，1999,32(3):90-95.2ZhuZB.EffetfZn7etallthinEinnxidativestressinliverfratsithseveretheralinjuryJ.AtaPharalSin，2022,24(8):764-760.3郑军恒，李海洋，茹刚，等.金属硫卵白扫

9、除羟自由基的研究J.北京大学学报:天然科学版，1999,35(2):573-576.4HuDX,Fukuda,Fujii,etal.Transriptinalregulatinfnitinaideadeninedinuletidephsphate:quinnexidredutaseinurinehepataellsby6(ethylsufinyl)hexylisthiyanate,anativepriniplefasabi(Eutreaasabiaxi.)J.anerLett,2000,161:195-200.5AdelJ,deRuiterN.InhibitinfhydrxylradialgeneratedDNAdegradatinbyetallthineinJ.TxilLett,1989,47:191-196.6SuginN,Telleria.Differntialregulatinfpperzinsuperxidedi