高效液相色谱法测定开光复明丸中黄芩苷的含量

1、高效液相色谱法测定开光复明丸中黄芩苷的含量【摘要】目的建立高效液相色谱法测定开光复明丸中黄芩苷的含量。方法采用HPL对黄芩苷进展含量测定，流动相为甲醇-水-磷酸(50：50：0.2);检测波长为277n;流速1.0l/in;柱温：40。结果黄芩苷线性范围为0.10050.8048g(r=0.9991)，平均回收率100.65%，RSD%为0.97%。结论本法结果准确，灵敏度高，重复性好，方法简便可行，为控制开光复明丸的质量提供了科学根据。【关键词】开光复明丸;黄芩苷;高效液相色谱法【Abstrat】bjetiveTestablishaHPLidentifiatinethdfKaiguangfu

2、ingan.ethdsHPL,thebilephasefethanl-ater-phsphriaid(50:50:0.2);thedetetinavelengthas277nandflrateas1.0l/in.Andthelunteperatureat40.ResultTheBaialinlinearintherangef0.10050.8048g(r=0.9991),theaveragereveryas100.65%,RSDperentageas0.97%.nlusinTheethdisreliableandnvenient,anditprvidessientififundatintntr

3、lthequalityfKaiguangfuingan.【Keyrds】Kaiguangfuingan.;baialin;HPL开光复明丸为?中华人民共和国卫生部药品标准?(中药成方制剂)第3册收载品种1，是由栀子、黄芩等18味中药组成的复方制剂，具有清热散风，退翳明目等作用。用于肝肺热盛引起爆发火眼，红肿痛痒，眼睑赤烂，云翳气蒙，羞明多眵。黄芩的有效成分为黄芩苷、黄芩苷元、二氢黄酮等黄酮类化合物，现代药理试验证明，黄芩苷有抗微生物、抗变态反响和抗炎等显著作用，因此选取黄芩苷作为质量控制的指标成分。正文采用高效液相色谱法测定样品所含黄芩苷的含量，该法灵敏度高、专属性好、操作简便、重现性好，测定

4、结果准确、可靠，可作为本品质量控制的方法。1仪器与试药1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪;VD紫外检测器;AX205梅特勒-托利多电子分析天平;KQ-300VDB超声波清洗器。1.2试药甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸(分析纯)(为北京化工厂消费)。黄芩苷对照品(批号110715-202214，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)。开光复明丸三批(批号6013864;6013865;6013866)，中国北京同仁堂(集团)有限责任公司北京中药二厂。2实验方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液精细称取黄芩苷对照品10.06g，置50l量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀

5、;精细量取2l，置10l量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1l含黄芩苷0.04024g)。2.1.2供试品溶液取重量差异项下的本品，剪碎，取约0.5g，精细称定，置50l量瓶中，参加70%乙醇适量，密塞，超声处理(功率300，频率40kHz)30in，放冷至室温，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精细汲取续滤液2l，置10l量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，即得。2.1.3阴性样品溶液按处方比例，取不含黄芩成分的阴性制剂，同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。转贴于论文联盟.ll.2.2色谱条件2色谱柱：ZRBAXSB-18(2504.6，5)分析柱;流动相：甲醇-水-磷酸(50：50：

6、0.2);检测波长：277n;流速1.0l/in;柱温：40。分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液(批号：6013864)、阴性对照溶液各10l，注入液相色谱仪，记录色谱图，测得的别离色谱图如图1显示。结果说明，黄芩苷与其他成分别离良好，不干扰测定，测得理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2500，黄芩苷峰与相邻峰的别离度大于1.5，符合要求。1.黄芩苷图1HPL色谱图2.3线性关系精细称取黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解并制成每1l含0.2022g溶液，作为储藏液。分别精细量取对照品储藏溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0l置于10l量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。分别精细汲取上述对照品溶液10

7、l，注入液相色谱仪，按正文所述色谱条件测定峰面积，以进样量(g)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进展回归处理。得黄芩苷回归方程：Y=29.59708249X-69.11618323,r=0.9991,n=6，说明黄芩苷在0.10050.8048g范围内有良好的线性关系。2.4回收率试验称取含量的同一批样品(批号6013864，含量为3.927g/g)约0.3g(6份)，精细称定，分别精细参加黄芩苷对照品溶液(0.04312g/l)各25l，按供试品溶液制备及上述色谱条件操作，依法制备、进样、记录色谱图、计算回收率，结果见表1。表1开光复明丸中黄芩苷加样回收测定结果2.5稳定性试验精细称取

8、供试品(批号6013864)0.5060g，照正文所述方法制备供试品溶液，照上述色谱条件，分别在0、1、4、9、20、24h依法测定，记录峰面积，结果峰面积的RSD%=1.2%(n=6)。说明在24h内根本稳定，本方法有良好的稳定性。2.6精细度试验取供试品溶液，按上述色谱条件重复进样6次，峰面积的RSD%=2.59%(n=6)。2.7供试品含量测定精细汲取黄芩苷对照品溶液和供试品溶液各10l，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中黄芩苷的含量，共测定3批供试品。结果见表2。表2供试品含量测定结果3讨论3.1提取溶剂的选择在本试验中称取同一批号的样品，分别参加30%乙醇、50%的乙醇、70%乙

9、醇及甲醇等溶剂，进展超声处理30in，按照正文含量测定项下方法进展测定，结果说明，采用70%乙醇为溶剂，提取较完全且别离良好，峰形良好。3.2提取方法的选择在本试验中称取同一批号的样品，采用70%乙醇考察了回流提娶超声提娶冷浸提取等方法，结果说明，超声处理30in相当于1g样品的峰面积最大，因此采用较为简便的超声处理提取方法。3.3流动相的选择2参考文献?中国药典?2022年一部黄芩项下含量测定方法所用的流动相，分别采用甲醇-水-磷酸(50：50：0.2;47：53：0.2;53：47：0.2)为流动相，进展实验，结果说明以甲醇-水-磷酸(50：50：0.2)为流动相时，黄芩苷基线别离，且峰形较好，应选择流动相为甲醇-水-磷酸(50：50：0.2)。3.4最大吸收波长的选择黄芩苷对照品甲醇溶液(浓度为0.03048g/l)经紫外吸收光谱扫描，在277n处有最大吸收，故确定检测波长为277n。3.5方法适用性本法色谱条件与系统，能较好地将开光复明丸中黄芩苷与其他成分完全别离，说明本法能准确地测定开光复明丸中黄芩苷含量，结果稳定、重现性好。为开光复明丸制剂的质量控制提供了可靠的根据。【参考文献】1国家药典委员会.中国卫生部药品标准中药成方制剂.北京：卫生部药典委员会，1998，33.2国家药典委员会.中国药典，一部