高三生物一轮复习课件：微生物的培养与应用

1、 专题2 微生物的培养与应用各种各样的细菌几种菌落及其形态本节聚焦：一.什么是培养基？培养基的分类？二.什么是无菌技术？消毒和灭菌的常用方法？四.大肠杆菌的纯化培养： 培养基的制备流程？ 平板划线法&稀释涂布平板法三.什么是菌落？菌落的特征和功能？一、基础知识 1、概念： 2、种类:（1）物理状态：（2）成分：（3）功能：液体培养基+琼脂=固体培养基选择培养基和鉴别培养基天然培养基和合成培养基（一）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质称 。培养基培养基名称培养微生物类型培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基细菌培养牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，水1000m

2、L，pH7.47.6。高氏1号培养基放线菌培养可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO43H2O0.5g，MgSO47H2O0.5g，FeSO47H2O0.01g，水1000mL，pH7.47.6。配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。马铃薯培养基(PDA)霉菌或酵母菌培养马铃薯(去皮)200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL。中性红培养基厌氧菌培养葡萄糖40g，胰蛋白胨6g，酵母膏2g，牛肉膏2g，醋酸铵3g，KH2PO45g，中性红0.2g，MgSO47H2O0.2g，FeSO47H2O0.01g,水1000mL，pH6.2，121湿热灭菌

3、30min。微生物常用培养基配制3、基本成分: 碳源、氮源、无机盐和水维生素、碱基等（一）培养基pH、氧气的需求：特殊营养：一、基础知识 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。分析营养构成？ 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至1000mlNaCl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂 20.0g碳源、氮源和维生素碳源、氮源和维生素无机盐思考（二）无菌技术 1、概念： 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。 2、种类:消毒与灭菌消毒灭菌定义方法较为温和理化方法杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物巴氏消毒法煮沸

4、消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌(121、1530min)一、基础知识(160170 12小时)请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻璃棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手思考酒精擦拭消毒干热灭菌高压蒸汽灭菌（二）无菌技术 3、无菌范围：实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程酒精灯火焰旁操作一、基础知识（一）制备固体培养基二、大肠杆菌的纯化培养1、计算：2、称量：3、溶化：4、灭菌：5、倒平板：H2O 定容至1000mlNaCl 10g蛋白胨 10g酵母提取物 5g琼脂 2

5、0.0g依配方计算各成分的用量牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖不好溶解时可以稍微加热（最后定容、调PH）培养基：高压蒸汽灭菌 100KPa、121、1530min培养皿：干热灭菌 160170、2h约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。思考（二）纯化大肠杆菌二、大肠杆菌的纯化培养1、接种：平板划线法讨论1、为什么在

6、操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。练习1、关于灭菌和消毒的不正确理解是（ ） A.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B.消毒和灭菌实质上是相同的 C.常用灭菌法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 D.常用消毒方法有煮沸法、巴氏消毒法、紫外线法、化学药物法2、下

7、列有关平板划线接种法的操作错误的是（ ） A将接种环放在火焰上灼烧 B将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液 C蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D 划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连（二）纯化大肠杆菌二、大肠杆菌的纯化培养1、接种：稀释涂布平板法6支试管，分别加入9ml无菌水1ml101ml1021ml1031ml1041ml1051ml106a.梯度稀释菌液：菌液b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板，1个不涂布作空白对照滴灼冷涂（二）纯化大肠杆菌二、大肠杆菌的纯化培养1、接种：稀释涂布平板法（一）制备固体培养基平板划线法2、培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入3

8、7恒温箱中培养12h24h后，观察并记录每克样品中的菌株数= _(CV)M C：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数 误差：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，这时计算结果比实际值偏大？偏小？偏小！ 1、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？ 2、在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似？ 未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。三、结果分析与评价 3、培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？ 4、如果在培养基上观察到不同形态的菌落