血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定-检验科生化室作业书

1、【实用】检验科SOP文件药海无涯学无止境专注医学领域血清乳酸脱氢的LDH速率法测定.实验原理VITROSLDHt剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有 分析成份的化学干片。本法测LDH采用丙酮酸和NADH作底物以产生 乳酸和NAD+。将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布 并渗透到下面的试剂层。乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和 NAD+。用反射强度变化测出 NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱 氢酶的活力。测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37c约5分钟反应过程：LDH丙酮酸+NADH+H+乳酸+NAD2标本：病人准备：无特殊。样品类型：血清

2、；肝素锂/钠抗凝血浆。标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。而其它一些方法由于在低 速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明 显差异。由于VitrosLDH干片对完整血小板内的LDH不敏感，因此对 比方法的LDH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。处理样品时要将其当成 生物污染品。.标本的存放：血清、血浆室温下最多 2天；不可冷冻保存。.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。.标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。.试验材料：测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3; Vi

3、tros特制 质控液；Vitros7%BSAM释液。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。其它成份有聚合物颗粒，粘合剂， 缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。干片标记：试剂 盒外包装上标明了测试项目名称， 试剂标签代码，有效期限和储藏温 度。试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入 仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828c。因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置 60分钟，而冷藏的试剂 盒至少要在室温下放置30分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪 器的储

4、藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。试剂稳定性与贮存未开封的干片盒：存储在-18C或低于该范围。说明：为了缩短预 温时间或者当冷冻空间有限时，未开封的试剂盒在28c (3646oF) 下最多可以保存4周。在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过 2周， 否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒 留在储藏器中。出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小 时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确，VitrosLDH干片可保质到包装盒上标明的有效期限。 参见VITROS25阡化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件。变质指示

5、：超过有效期的试剂干片不能使用。注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打 干片盒；不要让尖利物刺入内包装。校准品：用Vitros化学定标物Kit3。血清、血浆都用相同的定 标液，不过各自的SAVs值不同。有关标准液的配制，使用及保存的 配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS25阡化学分析仪校准品和 质控品.SORt件。质控品：使用Vitros特制的质控物品；若使用其它的一些质控 物品，当与别的AST测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清 / 血浆混合物分离制成的质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它 化学添加剂的质控物品；猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低， 还会 因测试方法

6、不同而变化；酶的活性可能会由于酶源，稀释温度和复溶 活化时间的不同而发生变化；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使 用。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS25阡化学 分析仪校准品和质控品.SO找件。.仪器：美国强生厂家VITROS250b自动干式生化分析仪。具体测 试程序请参阅操作手册的介绍。.操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器 5分后 自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS25臊作手册.SOR具体 定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。何时进行定标：一一在维 护和保养时更换了仪器的重要部件。一一质控结果持续超出线性范围 内时，详情参阅操作手册。一一管

7、理条例上指定的时间，在美国，CLIA 要求至少每6个月定标一次。.检验结果的判断与分析.质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将 质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运 行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性； 其它详情参阅操作手 册质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测(IQCT1的内容。在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本 进行分析，以2s为质控警告限，3s为失控限，绘制质控图，判断是 否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程 .SOPt件。.计算方法：以用Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可 报告范围内，仪器

8、直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。.参考值范围国际单位(U/L)成人 313-618此参考范围是测试189位健康成人，然后取靶值附近95%的结果计 算所得。参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据 好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。.临床意义：乳酸脱氢酶是一种存在于人体细胞液中的酶，它在 NADH的作用下催化丙酮酸还原成乳酸。肿瘤，低氧性呼吸性心脏病， 心肌梗塞，溶血性贫血，巨幼细胞性贫血，肝硬化，肾阻塞，外伤， 肌肉受损，肌肉营养不良，休克和低血压都可造成LDH增高。LDH在 心肌梗塞发作后12小时内开始升高，2-5天后恢复正常。.操作性能线性范围：血清：100-

9、2150U/L。14.2精密度：在Vitros250生化仪上用质控液来测精密度。结果反 映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质 控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。日间精密度血清x(U/L)s(U/L)CV(%)室间精密度n=20 天X(U/L)s(U/L)CV(%)样 品1n=8053611.4样品153618.53.4样 品2n=80164325.1样品2164342.52.6*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对 测试结果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结【实用】检验科SOP文件果进行统

10、计计算。方法学比较：用Vitros700仪器和Buhl方法参考方法分别测试相同血清样品，对 比结果显示Vitros方法的准确度良好。用 Vitros250仪器与Vitros700 仪器测试相同的血清样品，对比结果显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=1.01X+9.5(r=0.999, N=80,范围 103-2085U/L)。灵敏度：本试剂的检测下限为血清为 100U/L。特异性：经测试，以下物质对 VitrosLDH干片法均无干扰(偏 差44U/L)。扑热息痛5mg/Dl、乙酰乙酸30mg/dL、维生素C3mg/dL、 胆红素30mg/dL、乙醇300mg/dL、龙胆酸0.5m

11、g/dL、谷胱甘肽1mg/dL 空空寻寻O病人结果可报告范围：血清 100-2150U/L。.超出范围结果处理：本法线性上限为血清2150U/L。如果样品中 LDH浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：用 7%BSAffi释样品；重新测试；将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始 样品中LDH的活性；如果样品中LDH的活性仍然超出系统的线性范 围，加大稀释倍数，重新测试，然后将测试结果乘以新的稀释倍数。.病危报警值的处理无。.方法局限性本法线性上限为血清2150U/L。如果样品中LDH浓度超出系统 的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：用7%BSA稀释样品；重新测试；将测试结果乘以稀释倍

12、数，就得到原始样品中LDH的活性；如果样品中LDH的活性仍然超出系统的线性范围，加大稀释倍数，重 药海无涯 学无止境 专注医学领域【实用】检验科SOP文件药海无涯学无止境专注医学领域新测试，然后将测试结果乘以新的稀释倍数。干扰物质：总蛋白12g/dl(120g/L)的多发性骨髓瘤患者样品中 免疫球蛋白占很大比例，会使LDH的测试结果偏高。因此在测试前先 要将该样品用等量的生理盐水稀释，再将结果乘以2,就得到原始样品中LDH的活性。出现KE代码的结果可能是因为样品中胆红素，总 蛋白或别的成份浓度太高引起的，此时真实的LDH活性可能是正常或 略有偏高。用等量的Vitros7%BSA稀释样品，如果是总蛋白太高，可 以用生理盐水稀释，再将结果乘以就得到原始样品中 LDH的活性。出 现TR或DP代码，通常是