鱼病专题-日本国立北海道大学兽医学部传染病学讲座4

1、鱼病专题日本国立北海道大学兽医学部传染病学讲座系列之四三、鱼类细菌性疾病3.5. Red spot diseases (赤点病)本病正如其病名，以体表的点状出血为其特徵。70年代初期首次被报告的，比较新的鳗鱼细菌性疾病。本病不仅在台湾、日本经常发生，80年代初期在英国也有此病的发生报告。(1)病 因 此病的病原菌乃由Wakabayashi和Egusa所报告的Pseudomonas anduilliseptica。此菌属Gram阴性的短杆菌(0.513m)。具有单鞭毛，有运动性。倍培养温度超过25度以上时，运动性变弱或消失。使用普通培养基培养时，细菌增长速度缓慢，20度培养23天後，方产生直径1

2、mm左右的透明，具光泽且黏稠性的菌落。培养温度范围是530度，至适温度1520度。培养pH值范围是5.39.7，至适pH值79。培养食盐浓度范围是0.10.4，至适食盐浓度是0.51。本菌在淡水中生存日数不超过一天以内就死亡，但在海水或稀释海水中可生存200天以上而不死亡。(2)症 状 病鳗皮肤，特别在下颚、腹部及肛门内周围的皮肤有显着的点状出血。因病原菌侵入表皮基底膜或在真皮繁殖，使分布在表皮基底膜及真皮组织内的毛细血管充血，发生渗出性出血或破绽(裂)性块状出血病变。此外，尚可见鳍的出血，肝脏郁血，脾脏褪色萎缩，肾脏萎缩，肠管、胃变赤，腹膜点状出血。有的病例可见各内脏贫血现象。(3)诊 断

3、根据病鳗典型的体表点状出血之病理特徵，大概可以诊断为本病。但有些病鱼的症状和其他细菌性疾病的症状类似，因此尚需进行细菌学诊断。将疑似本病的鳗鱼的肝、脾、肾脏或血液，用普通培养基培养进行细菌分离。20度2天培养後，如有透明感的菌落出现，则可进一步鉴定是否为本病原菌。用凝集反应和直接免疫营光法可以同定本病原菌。(4)对 策 饲养水温保持在2627度，池水尽可能使用淡水等是有效的对策手段。但保持水温必增加燃料投资。理想的预防措施是使用疫苗，但实用性的疫苗尚待开产。Chloramphenical等抗生素对本菌虽有较强的杀伤作用，但在养鳗场使用抗生素治疗是有实际困难的。因为本病潜伏期较长，当发病时，病鱼

4、大都已失去食欲，经口投药效果甚差。另外，本病常发生於刚刚过冬时，此时，鳗鱼尚未开始摄食，也是经口投药效果不佳的原因之一。因此，设备完善的养殖池，可将水温提高到26度，同时投药治疗，一般都会收到较好的治疗效果。3.6. Pasteureliosis (巴斯德杆菌症)本病1969年6月在日本西部 鱼养殖场首次流行发生过，以脾脏出现多数，明显的小白点为特徵，隔年，日本全国都流行发生本病，而且每年均有反复发生，被害甚大。(1)病 因 病原菌首次由本村和北尾两位专家所分离，在美国大西洋岸也分离出同一性状的病原菌。本病原菌Pasteurella piscide属Gram阴性短杆菌(0.61.20.82.6

5、m)。但随着培养条件的变化，有的呈球状，有的呈长杆状。此菌无运动性，无芽胞。 在普通培养基上，本病生长不良。在血液培养基(含1.52.0食盐)上，则繁殖良好。BHI培养基上的菌落呈圆形、无色、半透明、露滴状，且有黏稠性，在MaConky培养基上增殖良好，但在SS、BTB培养基上不繁殖。培养温度范围是1732度，至适温度2530度。培养pH值范围6.88.8，至适pH值7.58.0。培养食盐浓度范围0.55.0，至适食盐浓度23。(2)症 状 病况进行急速，病鱼先失去食欲，然後离开鱼群，游入水池底部静止不动而死亡。体表稍变黑，除了鱼鳞脱落的体表有显着的变色外，无其他可见的变化。剖解时，可见脾、肾

6、脏上有多数的小白点，其他如心脏、肝脏、肠间膜、腹膜、鳔、鳃有时也会出现较少数的小白点。白点大小自针头大至直径数厘米大，但大多数在1厘米左右。白点为一个大菌落或几个小菌落所组成，多被纤维组织包围形成结节样构造，内部细菌则已死亡。这些菌落乃由於细菌耐过白血球，内皮网状细胞之吞食後，在病变部位繁殖起来的。在毛细血管及间质组织内，细菌虽然增殖快，但因不产生菌素，故对实质组织没有太大的影响。(3)诊 断 内脏出现小白点的病变除本病以外，还有Nocardiosis，Ichthyophthyriasis。本病在肌肉中不形成结节或脓疡，且肝脏及肾脏也不肿大，因此肉眼可以与Nocardiosis， Ichthy

7、ophthyriasis之发生区别。确切的诊断还需以细菌检查，血液涂抹标本及病变组织直接涂抹片等方法为辅助。如有两端浓染的杆菌，则可判是本病。(4)对 策 因为传染来源乃保菌鱼、非海水，因此预防上，重点要尽快地除去重症鱼及病死鱼。Chloramphenical，Tetracyclin等抗生素对本病原菌有效，但磺胺剂则没有杀菌效果。在梅雨期的易流行的季节里，应进行投药预防措施，减少发病。3.7. Bacterial gill disease (细菌性鳃病)鳃组织表面上因长杆菌繁殖，刺激而引起的上皮细胞异常增生使鳃薄板愈合为本病的特徵。(1)病 因 Flavobacterium sp.是属於Gra

8、m阴性长杆菌(0.30.5515m)，无运动性。分离时，一般使用cytophaga培养基，於18度培养5天後，可形成直径0.5mm、淡黄色、半透明的微小菌落。菌落周围圆滑，加入5仔牛血清将促进细菌生长。培养温度是1025度，食盐浓度是00.05。(2)症 状 病鱼食欲减退，离开鱼群，浮於水面。病状加剧後，分泌多量的黏液，将鳃盖覆盖使鳃郁血、肿胀。组织病理学所见，鳃组织细菌增殖，上皮细胞增生，特别是从鳃薄板先端开始，最後渐扩散到鳃板全体，使鳃薄板完全愈者，鳃瓣变为棒状。以上病变，阻害血液中二氧化碳与水中氧气的交换，使鱼的呼吸受阻害，是鱼死亡的原因。(3)诊 断 采集鳃瓣的一部份直接进行显微镜检查

9、，确认有无细长的细菌存在，上皮细胞的增生，及鳃薄板的愈合，就可以初步断定本病。菌数不多或与组织紧密附着不能直接观察时，则将采集的组织放在载玻片上涂抹，经固定、染色後再用显微镜检查。(4)对 策 避免过密饲养是相当重要的。预防措施过去常用硫酸铜，有机水银制剂来治疗，但依公共卫生上而言现已废弃不用了。目前一般可用过锰酸钾(12ppm)，1小时药浴。在日本用5食盐水浸渍2分钟的方法也是非常有效且安全的。但规模大的养殖池则需消耗大量的食盐。3.8. Columnaris disease 被Flexibacter columnaris感染的鱼，首先在与外界接触的器官：鳃、鳍、皮肤上出现病变。随鱼的种类、

10、年龄等因素，病变常常出现於鱼体不同的部位。因此常被称之为gill diseases、cotton mouth等。此病不仅在日本，而且在美国、加拿大及欧洲都有发生。在美国和加拿大被称之为summer disease。发病鱼种多，危害甚大。(1)病 因 病原体是Flexibacter columnavis，属Gram阴性长杆菌(0.50.748m)。长时间培养後，细菌形状不一，有的呈细长形、波浪状或轮状。此菌虽无鞭毛，但具有特异的运动性，即菌体一端固定，另一端摆动的屈曲运动和在培养基或载玻片上的滑走运动。使用Cytophaga、TY培养基分离时，菌落呈周围树根状、黄色扁平的菌落。用液体培养基静止培

11、养时，液表面上形成一层黄色的强韧膜。培养温度范围是535度，至适温度2728度。培养pH值范围是6.58.5，至适pH值7.5左右。培养食盐浓度0.5时发育良好，超过2时将不发育。(2)症 状 症状随鱼种多少有些差异。首先在鳍、嘴吻、鳃板的先端或体表上出现黄白色的小斑点，然後渐次扩大。体表的患部周围变赤，鳍白先端裂开。鳃黏液分泌剧增，鳃叶变成帚状，部分出现脱落。其他内脏一般正常。 皮肤患部因病原菌增殖，使真皮组织内毛细血管充血，最後破裂引起出血。真皮坏死时，鱼鳞将脱落。鳃板被病原菌感染，导致病鱼呼吸困难，是致死的原因。本病和3.7.的Bacterial gill disease不同之处是鳃组织

12、容易出现坏死现象。(3)诊 断 病变仅限於体表，易从外观观察病变来诊断。与霉菌感染有类似病变，但病巢表面上无霉菌感染之特异毛状菌丝，却附着黄色的黏液。鳃有病巢时，打开鳃盖，也可以观察到同样的症状。从患部采集黏液，用400倍的显微镜，可以观察到正在做滑走及屈曲运动的多数细长菌体，开始分散的菌体互相结合变成特异的圆柱状。病原菌的分离，培养将从患部采集的黏液涂抹於Cytophaga或TY培养基上，於25度培养48个小时。根据菌落的形态，基本上可以判断为本菌。通常以抗血清，用凝集反应来做辅助诊断。(4)对 策 本病乃接触而感染，特别是鳃及皮肤有损伤时易感染，因此流行期尽可能避免捞取或移动鱼。治疗使用药

13、浴最有效。发病初期可以用磺胺剂及抗生素经口治疗。虽有疫苗的研究报告，但距实用阶段尚待进一步开发。四、4.7. 鲤鱼鶪疹病毒感染症 (Herpesirus Infection of Carp)本症是由病毒感染所引起的表皮性肿疡，俗称鲤鱼痘(carp poo)，虽在1964年已由Schubert以电子显微镜在病变组织内发现了病毒颗粒，但病毒的分离直到1984年始由Sano完成。(1)病 因 由Herpesvirus cypirini所感染，本病的分离以EPC、FHM等细胞株，接种肿疡组织的过滤上清，在20经23星期後，出现圆形化的病变细胞，并渐次细胞融解，在EPC细胞内可出现核内包涵体(即Cowd

14、ry type A)。(2)症 状 本病多发生在2公斤左右的成鱼，於口吻周围、鳍、皮肤等部位常发现突起肿瘤，不大引起死亡，却对观赏用的锦鲤鱼造成观赏价值的损失。组织病学上的病变，属上皮乳头肿(epithelial papilloma)，人工接种後所形成的肿瘤也有相同的组织变化。(3)诊 断 本症病理组织变化属epitealial papilloma的肿瘤构造，以病理诊断非常容易，但病毒的分离率依Sano等人自19811983年间，由8个病例成功地分离来看，如果能以病毒分离来辅助诊断则更能确诊。本病毒由Sano等人更证实人工感染鲤鱼经10个月有5070的再现率。(4)对 策 本病毒在鱼体内呈不显

15、性的终身感染(latent infection)，去除本病毒的再传染在目前是相当困难的事。养殖池的一般卫生管理仍是不可缺少的重要工作。4.8. 鳗鱼病毒感染症 (Viral Infection in Eel)自鳗鱼已分离的病毒很多，由於其病原性及疫学多未确定，在此仅列表於表三(7月份刊出)并稍加说明。由欧洲鳗(在欧洲所捕获的幼鳗)之肾脏所分离的EVE病毒，其特性和前述的IPN(French 21 Strain)病毒一致，而且稍後也在日本鳗(在日本、亚洲各国所掳获的幼鳗)被分离到，EVE病毒主要引起鳗鱼之肾脏充出血，肾小管内蛋白渗出物出现及肝脾之坏死 ，鳃发红、充出血等病变。由美洲鳗所分离的EV

16、A病毒已知属Rhabdovirus，临床症状与欧洲EVE病毒类似，在日本曾发生自古巴进口的幼鳗死亡例子。4.9. 病毒性红血球坏死症 (Viral Erythrocytic Necrosis)本症旧称鱼红血球坏死症(PEN)，现以VEN称之。(1)病 因 本病毒属Iridoviridae的DNA病毒，病毒颗粒大小，不同报告有很大的差异，Walker (1971)在鳕鱼的报告是330nm，及在鶼鱼的155nm，白鲑鱼的230nm。但病毒的分离尚未成功。(2)症 状 在感染鱼的红血球细胞质内，可见14的嗜硷性包函体为主要病徵，感染严重的病鱼，其红血球90100都有包涵体。由於红血球严重的被破坏，死

17、亡的鱼所呈显着贫血，病鱼的红血素值多降至210左右。在一感染鱼群，各慢性至急性病程都同时可被发现，特别是弧菌症混合感染时，其死亡率、型态趋於复杂。(3)诊 断 因本病的病毒尚未分离成功，故其诊断得以血液抹片来检查，抹片以Giemza或 Wright染色，在光学显微镜就可发现红血球的质内包涵体。最终的确可利用电子显微镜检查出iridovirus病毒颗粒的特徵。病毒颗粒大小，直径154300nm。(4)对 策 本病的传播机序尚未十分明了，防治之对策只能依病毒疾病的一般措施进行。4.10. 鱼病毒学的一般实验技术(1)细菌之培养 病毒分离所用的细胞，应正值分裂旺盛的正常细胞，且需同时使用2种细胞株供

18、分离。细胞株应事先且定期确定未被Mycoplasma所污染。培养液内添加penicillin 100 IUml和Streptomycin 100gml，或Gentamycin 100gml和Mycostatin 25 mgml。(2)病材之采取及处理(a)自5尾病鱼所采的病材，同一器官组织同时一起做成一个接种乳剂。尽可能的话，应采有上述之2个接种乳剂。(b)同时采取不同鱼群的病材供比照。(c)病材之采取应根据下列之原则：1. 孵化不久的幼鱼得除去卵黄，使用全鱼化验。2. 5cm未满的幼鱼，采取包括肾在内的全部内脏器官。3. 5cm以上的成鱼，只要采取脾及肾。(d)为输送及保存上的需要，可加入含倍量的抗生素的pH7.07.8缓冲液。(e)为抑制及减少供检材料之被污染，添加含800IUml之penicillin及800gml之streptomycin，400unitsml之mycostatin缓冲液，在室温2小时，或4一夜缓慢搅拌，或乳剂通过0.45m小大的milipone。(3)接种及培养依各所使用的培养瓶或培养皿大小来接种多少量的乳剂，但至少每一个乳剂应接种2个培养瓶(皿)，培养时间应至少观察14日以上。培养温度如下：(a)IHN、IPN、VHS病毒15。(b)CCV病毒2730。(c)Herpesvirus salmonis病毒510。饲料营养杂志(8087)林子恩郭